cAMP反应序列结合蛋白及其家族与转录调节

ｃＡＭＰ反应序列结合蛋白（ｃＡＭＰ－ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｅｌｅｍｅｎｔｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＣＲＥＢ）经磷酸化激活后，可参与ｃＡＭＰ诱导的多种靶基因的转录调控。新近研究表明，ＣＲＥＢ的转录调节作用可能是通过ＣＲＥＢ结合蛋白（ＣＲＥＢ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＣＢＰ）实现的。在神经系统中，ＣＲＥＢ可能介导神经递质诱导的基因表达，并能通过放大神经营养因子的信号，参与神经细胞增殖、分化、存活等生物效应。

怀安-大同一带基性麻粒岩变质反应序列与水活度

晋冀蒙三省交界的怀安－大同一带基性麻粒岩有保存完好的变质反应结构。依据岩相学特征，可在基性麻粒岩中区分出四个世代的矿物组合：①峰前阶段（Ｍ１）以包裹在石榴石或紫苏辉石中的Ｈｂ＋Ｐｌ±Ｑｚ、Ｃｐｘ＋Ｈｂ＋Ｐｌ±Ｑｚ组合为代表，Ｔ为６００℃～７００℃，Ｐ为０．７０～０．８２ＧＰａ，相应的ａＨ２Ｏ值为０．５０～０．６２；②峰期阶段（Ｍ２）以三联点结构的基质矿物为特征，组合为Ｏｐｘ＋Ｃｐｘ＋Ｈｂ＋Ｐｌ±Ｑｚ、Ｇｔ＋Ｏｐｘ＋Ｃｐｘ＋Ｈｂ＋Ｐｌ±Ｑｚ，Ｔ为７５０℃～８５０℃，Ｐ为０．８４～１．０５ＧＰａ，相应的水活度降至０．３９～０．５２；③峰后近等温减压阶段（Ｍ３）以石榴石普遍转变为Ｏｐｘ＋Ｐｌ±Ｍｔ及角闪石转变为Ｏｐｘ＋Ｃｐｘ后成合晶为特征，Ｔ为７００℃～７８０℃，Ｐ为０．５０～０．７０ＧＰａ，相应的ａＨ２Ｏ值降至０．０８～０．１１；④至降温阶段（Ｍ４），以无水矿物石榴石、辉石退变为Ｈｂ＋Ｐｌ组合为代表，Ｔ为５３０℃～６３０℃，Ｐ为０．３０～０．４２ＧＰａ，ａＨ２Ｏ值再次升至０．３７～０．４０。研究表明，矿物组合演化和所发生的（脱水）变质反应不仅受ＰＴ条件的控制。

序列特异引物引导的聚合酶链式反应(PCR-SSP)结合血清学在疑难血型鉴定中的应用

目的 探讨血型血清学与序列特异引物引导的聚合酶链式反应(PCR-SSP)基因分型在ABO疑难血型鉴定中的作用。方法 用血清学分析鉴定的ABO疑难血型标本80例,同时采用PCR-SSP法进行基因分型,结合两种方法学结果,确定血型及制定输血策略。结果 血清学鉴定亚型40例,其他原因引起的抗原抗体缺失或减弱正常血型40例;PCR-SSP法基因分型亚型41例(3例二者结果不一致:血清学Ael型1例,基因分型O2O2;血清学O型1例,基因分型BO1;血清学A型1例,基因分型AB),正常血型39例。结论 使用血清学结合基因分型鉴定ABO疑难血型具有重要意义。

序列反应时任务中内隐和外显学习表征方式的实验研究

采用改进的序列反应时任务,探讨内隐和外显学习的知识表征方式,发现内隐组和外显组被试都习得了一定的序列规则。内隐组对标准字母的反应显著快于知觉偏差,而后者则又显著快于对动觉偏差字母的反应;外显组对标准字母的反应显著快于知觉偏差和动觉偏差,而后两者之间则没有区别。以上结果表明外显和内隐学习中知觉表征和动觉表征都起作用,不过在内隐学习中动觉表征起的作用更大。

厌氧—好氧序列间歇式反应器处理造纸中段废水的研究

采用厌氧—好氧序列间歇反应器—混凝沉淀组合工艺,处理碱法草浆造纸中段废水。结果表明,经8.0h厌氧搅伴处理和5.0h好氧曝气处理,进水CODCr为729.1～2239mg/L,出水CODCr小于550mg/L,CODCr去除率在66.2％～76.3％之间,再经混凝沉淀处理,出水CODCr小于200mg/L,色度小于50倍,满足国家造纸工业水污染物排放标准中的二级标准。

重复序列引物聚合酶链反应追踪金黄色葡萄球菌所致医院感染

目的利用重复序列引物聚合酶链反应(rep-PCR)追踪我院一起由金葡菌所致的医院感染。方法分离得到的50株金葡菌用PHOENIX-100微生物自动鉴定系统鉴定,苯唑西林-盐琼脂筛选MRSA表型；PCR检测其耐药基因mecA；rep- PCR作金葡菌基因分型。结果50株金葡菌中,22株mecA阳性,其中19株分离自患者标本。采用rep-PCR,50株金葡菌均出现9～11条带的电泳图谱,从而可分成11个不同的基因型。结论rep-PCR是一种快速、简便、可靠的基因分型方法,是在分子水平追踪医院感染病原菌较理想的工具。

应用肠杆菌科基因间重复序列聚合酶链反应对鲍曼不动杆菌进行同源性分析

目的了解临床不同来源的鲍曼不动杆菌是否存在同源性,判断其是否存在耐药菌株的克隆播散,追踪其在医院交叉感染的可能途径,以便有效防控鲍曼不动杆菌在医院中传播。方法收集2012年10月至2013年6月临床分离的73株多重耐药鲍曼不动杆菌,用肠杆菌科基因间重复序列-聚合酶链反应(enterobacterial repetitive intergenic consensus-polymerase chain reaction,ERIC-PCR)对菌株进行同源性分析。结果 73株多重耐药鲍曼不动杆菌经ERIC-PCR分型分为8个基因型,分别用A、B、C、D、E、F、G、H表示,其中A型31株,B型15株,C型12株,D型8株,E型3株,F型2株,G和H型各为1株。A型为主要的流行株,分布在多个不同的科室。重症监护室(intensive care unit,ICU)分离的菌株存在6个基因型;骨科系统病区存在4个基因型;急诊科有5个基因型;内科发现有6个基因型;外科发现3个基因型。ICU病房环境物体表面共分离出4株鲍曼不动杆菌,其中9号和10号菌株来自于不同患者的床旁,12号和13号来自于护理站电脑键盘。结论临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌存在多个基因型。多重耐药鲍曼不动杆菌存在时间和空间的聚集性。

颗粒化序列间歇式活性污泥反应器工艺处理化粪池污水

在序列间歇式活性污泥反应器(SBR)中成功培养出适应化粪池污水水质的好氧颗粒污泥,并将其应用于化粪池污水的处理。在好氧颗粒污泥培养的第15天左右,SBR中开始出现细小的颗粒,然后微生物在其上繁殖生长使颗粒逐渐增大而成熟;在第24天时,SBR中絮状活性污泥已基本实现了颗粒化。培养出的好氧颗粒污泥对化粪池污水有稳定的处理效果,在进水完全为化粪池污水时,COD、NH4+-N、TN的平均去除率分别为77%、61%、47%。但是,由于化粪池污水COD较低,因此无法维持较高的生物量,在后期的稳定运行过程中MLSS始终维持在2500mg/L左右。好氧颗粒污泥的同步硝化反硝化作用是其稳定脱氮的保证。

重复序列引物聚合酶链反应在检测肺炎克雷伯菌院内流行中的应用

目的 用重复序列引物聚合酶链反应（rep-PCR）方法分析从大连医科大学第一临床学院不同患者分离出来的肺炎克雷伯菌是否起源于同一菌株.方法 用微生物分析系统检测其对抗生素的敏感程度,选用肠杆菌科广泛存在的基因间重复片段为引物进行扩增,对肺炎克雷伯菌进行基因分型.结果 建立了rep-PCR法方法,显示可将肺炎克雷伯菌扩增出丰富的区带.分离到的33株产ESBL肺炎克雷伯菌分属6个基因型.结论 rep-PCR是一种快速、简便、可靠的基因分型方法,是分子水平追踪医院感染较理想的方法.

三叶青相关序列扩增多态性-聚合酶链式反应体系的建立与优化

目的建立浙江和江西产的三叶青(Tetrastigma hemsleyanum)SRAP-PCR的反应体系和扩增程序。方法应用L9(34)正交设计方法,以三叶青基因组DNA为模板,研究了Mg2+、dNTP、引物和模板DNA 4种PCR反应组分浓度变化对扩增结果的影响,根据梯度PCR仪引物的条带数量及清晰度选择退火温度。结果优化后的25μL反应体系包含:10×PCR buffer2.5μL,2.5mmol/L MgCl2,0.15mmol/Ld NTP,0.15μmol/L引物,1.0U Taq DNA聚合酶,50ng DNA模板。扩增程序的最佳退火温度为51℃。并筛选出8对扩增产物丰富,多态性好的引物。结论正交设计优化的三叶青SRAP反应体系,经过10份样品检验,证明该体系稳定可靠,多态性好,可用于三叶青遗传多样性分析。

运用序列式生物膜反应器处理味精污水工艺研究

味精污水中含有较高的氨氮离子,序列式生物膜反应器(SBBR)能够有效实现味精污水的同步硝化与反硝化反应,减少设备占有面积和节约处理时间。经过实验得出,当溶氧(DO)为3~4mg/L能够有效地满足生物膜中好氧菌的生长需要,又不会破坏生物膜内的厌氧环境,当pH值为8.0时,温度为30℃时,对味精生产中产生的污水的化学需氧量(COD)去除率高达95.34%,氨氮的去除率达到95.78%,生物需氧量(BOD5)去除率94.1%。

正交设计优化半夏相关序列扩增多态性-聚合酶链式反应体系

目的采用正交设计优化半夏SRAP-PCR的反应体系。方法以半夏基因组DNA为模板,应用L_(16)(4~5)正交表,研究了Taq酶、Mg^(2+)、随机引物、dNTPs和模板DNA 5种SRAP反应组分浓度变化对扩增结果的影响。结果优化反应体系为:25μL反应体系中含有buffer2.5μL、Taq酶1.0U、Mg^(2+)2.5mmol/L、引物0.8μmol/L、dNTPs0.1 mmol/L、模板DNA 50 ng。结论正交设计能客观高效的优化半夏SRAP反应体系。

最大长度序列诱发听性脑干反应的线性与非线性成分引出率和稳定性分析

在记录常规的听性脑干反应(c ABR)时,听觉系统被视为一个线性系统,无法获取反映听觉系统非线性特性的成分。而采用最大长度序列(MLS)刺激,对记录的反应建立Volterra级数展开模型,能够同时获取反映听觉系统线性与非线性特性的不同成分,所获取的ABR被称为MLS-ABR。由于这种方法在实验和计算方面的困难,现阶段对MLS-ABR的特性了解尚少,所以通过实验研究对其引出率及稳定性进行分析。利用MLS方法提取非线性成分,选择一个9阶MLS,提取11例正常青年人的MLS-ABR及c ABR,其中MLS-ABR的一阶和一个二阶核切片(VS1和VS21)的波形清晰完整,分别表达ABR的线性和非线性成分。以c ABR、VS1、VS21中各特征波出现率、潜伏期及峰峰值变异系数为考察指标,对照分析c ABR与MLS-ABR的线性、非线性成分引出率和稳定性。结果发现,MLSABR中线性成分各特征波引出率都较高(>90%),且其潜伏期(1、3、5潜伏期波变异系数分别为5.17、3.70、2.00)比c ABR(Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ波潜伏期变异系数分别为6.54、3.70、2.87)更加稳定;非线性成分也可稳定引出1、3、5波(>80%),并且非线性成分的在5波的表达更加强烈。进一步证实MLS在获取ABR非线性成分的可靠性,加深对MLR-ABR的认识,为后续相关研究提供重要依据。

聚合酶链式反应-特异性序列引物基因定型在新生儿溶血病ABO血型定型中的应用

目的研究聚合酶链式反应-特异性序列引物(PCR-SSP)基因定型在新生儿溶血病(CHDN)ABO血型定型中的应用。方法收集20例来自广东省肇庆市第一人民医院新生儿溶血病(HDN)的样本,对这些样本进行ABO血型鉴定等一系列血型血清学方法进行检测,然后用PCR-SSP基因定型技术进行样本的基因分型。结果与其血型的血清学分型结果进行比较,新生儿溶血病ABO血型的定型是新生儿输血的必要保障,而PCR-SSP基因分型较血型血清学方法更快捷、准确。结论 PCR-SSP基因正型技术将不再局限于疑难血型的鉴定中,并会越来越多地应用于HDN的鉴定中。

肠道细菌基因间重复共有序列-聚合酶链式反应指纹图谱技术用于细菌分型的研究进展

肠道细菌基因间重复共有序列-聚合酶链式反应(enterobacterial repetitive intergenic consensus-polymerase chain reaction,ERIC-PCR)指纹图谱技术利用普遍存在于生物体内的ERIC进行引物设计,通过基因扩增,获得能够表征其基因组结构的产物,该方法简单易行、重复性好、用时短,被广泛应用于细菌基因分型及同源性判别。本文简述细菌分型的研究背景和ERIC-PCR指纹图谱技术的原理及特点,归纳该技术在细菌基因分型方面的优缺点及其在常见食源性致病菌基因分型中的应用现状,并对ERIC-PCR指纹图谱技术应用于乳品企业污染菌溯源的研究进行展望。

无精子症患者Y染色体序列标签位点-聚合酶链反应与二代测序检测的比较

目的观察无精子症患者Y染色体序列标签位点-聚合酶链反应(STS-PCR)与二代测序(NGS)检测的差异。方法对133例无精子症患者,采用STS-PCR检测Y染色体AZF微缺失的15个STS位点,包括AZF a区的sY84/sY86、AZF b区的sY124/sY127/sY128/sY133/sY134/sY143/sY1192、AZF c区的sY152/sY239/sY242/sY254/sY255、AZF b/c区的sY145,同时采用NGS检测Y染色体基因组拷贝数变异(CNVs),并统计分析两种检测方法的差异。结果133例无精子症患者中,Y染色体AZF微缺失异常17例(12.78%),其中缺失14个STS 1例,占5.88%;缺失12个STS 3例,占17.65%;缺失11个STS 1例,占5.88%;缺失6个STS 1例,占5.88%;缺失5个STS 1例,占5.88%;缺失4个STS 2例,占11.76%;缺失2个STS 1例,占5.88%;缺失1个STS 7例,占41.18%。Y染色体CNVs异常12例(9.02%),其中既重复又缺失3例,占25%;重复(dup)4例,占33.33%;缺失(del)5例,占41.67%。Y染色体AZF(15个STS)微缺失的结果与CNVs缺失结果相比,差异有统计学意义(P<0.05),而Y染色体AZF(经典6个STS)微缺失的结果与CNVs缺失结果相比,差异无统计学意义(P=0.357)。结论STS-PCR和NGS互有补充,前者不能检测出重复,后者可能漏检小片段缺失。在无精子症遗传因素的实验室检查中,可以考虑采用NGS作为筛选,而采用STS-PCR作为验证。

ABO正反定型不符的白血病患者血型鉴定与临床分析

目的 对1例白血病患者ABO血型鉴定异常结果进行鉴定与回顾性分析,旨在为同类患者血型相容性检测提供参考。方法 采用血清学检测进行ABO血型鉴定,采用聚合酶链反应-序列特异性引物进行ABO血型基因分型;采用亚硫酸氢盐测序检测ABO启动子甲基化状态。结果 患者ABO血型正定型结果为O型,反定型结果为A型,正反定型结果不一致;试管法重复试验,4℃时可见A1c凝集;吸收放散试验结果显示红细胞表面存在A抗原,提示正定型结果为A型;不规则抗体筛查阴性,直接抗人球蛋白试验阴性;基因分型检测基因型为AO1,表型为A型;甲基化检测发现患者ABO基因启动子区甲基化率为66.7%,明显高于随机选取的5例正常对照组标本平均甲基化率。结论 白血病患者ABO抗原减弱可能导致血型误判,疾病状态下患者ABO基因启动子甲基化程度增高可能与其ABO抗原减弱密切相关,须结合分子生物学基因分型和血型基因甲基化检测方法进一步判断患者血型鉴定异常的原因,保障临床用血安全。

中国南方汉族和西藏藏族RHCE基因109bp插入序列和733C>G多态性研究

目的研究中国南方汉族人群和西藏藏族人群RHCE基因内含子2中109bp插入序列缺失情况和外显子5中733C>G多态性,并比较2民族间有无差异。方法收集186例中国南方汉族人样本和50例西藏藏族人样本,应用PCR-SSP方法对内含子2的109bp插入序列和外显子5的733C>G多态性进行检测,并用测序方法验证。结果在中国南方汉族人群中携带RhC抗原个体其RHCE基因内含子2中109bp插入序列的缺失率为1.08%,在西藏藏族人群中缺失概率为0,二者缺失率相比无统计学差异(χ2=0.02,P>0.05)。2民族所有样本RHCE基因外显子5的733位核甘酸均为G,未发现该位点存在733C>G多态性。结论 2民族在内含子2的109bp插入序列缺失和外显子5的733C>G多态性方面未发现二者有差异。在南方汉族人群中针对RHCE基因内含子2的109bp插入序列来检测RHCc基因会因缺失而导致假阴性错误。