苯乙烯、茴脑与肉桂醛的臭氧化反应竞争性研究

以苯乙烯为参照物 ,采用气相色谱跟踪肉桂醛与苯乙烯、茴脑与苯乙烯以及肉桂醛、苯乙烯和茴脑3种化合物的混合物的臭氧化竞争性反应 ,得出此 3种化合物的反应活性由大到小的顺序为茴脑、苯乙烯、肉桂醛 ;利用膜模型理论进一步求算出肉桂醛、茴脑与参照物苯乙烯的反应速率常数比为 0 .0 5 5和 2 5 .6 ,相应的反应速率常数分别为 72 0L·mol-1·s-1和 3.33× 10

应用竞争性荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA

目的:建立竞争性荧光定量聚合酶链反应(CFQ-PCR),并探讨CFQ-PCR在乙型肝炎病毒(HBV)临床检测中的意义.方法:根据HBV病毒adr亚型基因组序列合成一对HBV特异的引物,和一条特异的TaqMan探针;根据上述引物序列,采用分子克隆技术制备内对照DNA;再根据内对照序列合成一条内对照DNA特异的与上述TaqMan探针不同标记的TaqMan探针;将适量的内对照DNA加入到PCR反应体系中,使其与HBV靶序列共扩增.结果:在30μL CFQ-PCR反应体系中,加入约20拷贝内对照DNA能够稳定地获得共扩增曲线;经琼脂糖凝胶电泳分析,加入约100-500拷贝内对照DNA能够有效地获得共扩增产物条带信号;在210个临床HBsAg阳性血清标本的CFQ-PCR扩增中识别出8个未能有效扩增的标本,60份HBsAg阴性血清标本中识别出2个内对照未能有效扩增的标本,后经DNA纯化处理,上述全部标本的内对照均获得阳性扩增结果,其中有7个HBsAg阳性血清标本获得HBV DNA扩增阳性结果.结论:CFQ-PCR能够有效地提示临床标本HBV DNA体外扩增时由于扩增失败导致的假阴性,适合临床推广应用.

竞争性逆转录-聚合酶链反应对哮喘患者诱导痰白细胞介素-10基因表达的定量分析

目的:建立竞争性逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)定量方法,监测哮喘患者白细胞介素-10(IL-10)基因的表达水平,探讨IL-10在哮喘气道炎症中的作用和临床意义。方法:用酶切法构建IL-10内标分子,用已知量的该内标分子,通过竞争性RT-PCR对哮喘组(30例)和对照组(29例)的诱导痰和外周血IL-10 mRNA进行定量分析。结果:哮喘发作期患者的诱导痰和外周血绝大多数未检测到IL-10 mRNA,部分缓解期患者有少量IL-10 mRNA表达。健康对照者外周血和诱导痰均有IL-10 mRNA表达。结论:哮喘患者的气道炎症过程与IL-10基因表达有关,且存在IL-10转录水平的合成障碍。

竞争性反转录聚合酶链反应对髌韧带中的α_1-Ⅰ型胶原蛋白基因表达的定量检测

应用竞争性反转录聚合酶链反应技术,对韧带中的α_1-Ⅰ型胶原蛋白基因表达进行了定量测定。研究表明:该技术是适用于对一小块髂韧带中的基因表达进行定量研究。

用竞争性聚合酶链反应分析制造业中的汇集血浆的B19病毒污染

<正> 背景和目的 血液或血液制品存在B19病毒可引起传播病毒的风险。制造业中筛选步骤应该使汇集血浆中的B19病毒水平在10~4基因组当量/ml(geq/ml)以下,以避免经血浆类制品传播病毒感染。材料和方法 用竞争式聚合酶链反应方法检测汇集血浆中B19病毒检测,竞争性质粒作为内分析标准的适合性。75份汇集血浆,每份由960份单位血浆组成,混匀后进行了B19病毒污染物的检测。结果 确定了竞争性PCR方法。

竞争性抑制酶联反应在量热式农残生物传感器中的试验研究

以量热式农残生物传感器为研究对象,借鉴免疫分析方法,进行竞争性抑制酶联反应在量热式农残生物传感器中的试验研究。结果表明,在甲胺磷浓度为0~0.004 mg.kg-1范围内,甲胺磷含量和放热量之间的线性较好,竞争性抑制酶联反应分析法测农药残留的最低检测限为0.0011 mg.kg-1,每次测定时间为20 min。

谈酸碱盐竞争性反应的“优先原则”

酸碱盐的竞争性反应问题作为一种重要的化学题型,在中考中备受青睐。解决此类竞争性反应问题离不开相应的解题技巧,特别是相关的“优先原则”。

竞争性定量PCR检测恶性血液病造血干细胞移植术后克隆性TCRVγI-Jγ基因重排

目的 :为提高恶性血液病患者微小残留病 (MRD)检测的临床意义。方法 :构建竞争性定量聚合酶链反应 (PCR)检测技术并定量分析 3 1例恶性血液病患者 (包括 12例急性淋巴细胞白血病 ,10例急性非淋巴细胞白血病 ,6例非霍奇金淋巴瘤和 3例慢性粒细胞白血病 )造血干细胞移植术后TCRVγI Jγ基因重排。结果 :建立定量PCR方法的灵敏度为 10 -5水平 ;3 1例恶性血液病造血干细胞移植术后 1个月MRD的水平为 (3 16± 2 74)× 10 -5,移植后 1个月MRD水平显著低于移植前 [(4 2 1± 3 2 7)× 10 -5] (P <0 0 2 5 ) ;2 2例自体造血干细胞移植术后MRD为(3 47± 2 91)× 10 -5水平 ,显著高于 9例异基因造血干细胞移植术后 [(2 63± 2 2 1)× 10 -5] (P <0 0 5 ) ;MRD >40 0×10 -5的 13例病人中 2年内复发率为 5 3 8% (7/13 ) ,而MRD <40 0× 10 -5的 18例病人中仅有 2例 (11 1% )出现复发。MRD >40 0× 10 -5患者 2年内的复发率显著高于MRD <40 0× 10 -5患者 (P <0 0 1)。结论 :所构建竞争性定量PCR技术简便、快速、灵敏 ;定量检测恶性血液病造血干细胞移植术后MRD水平有利于预后预测。

多重竞争性荧光PCR检测X连锁Alport综合征大片段缺失突变

目的:探讨多重竞争性荧光PCR在X连锁Alport综合征分子诊断中的应用。方法:选择20例在北京大学第一医院确诊且未进行基因诊断的X连锁Alport综合征患者为研究对象,同时选择2例经多重连接依赖性探针扩增技术检测到COL4A5基因大片段缺失突变的患者作为阳性对照和1例经肾活检组织电子显微镜检查证实非Alport综合征的男性作为正常对照。首先应用多重竞争性荧光PCR技术扩增COL4A5基因53个外显子和4个参照基因,对于检测到COL4A5基因缺失第1外显子者,进而应用相同技术扩增COL4A5基因外显子1~4、COL4A6基因外显子1~4、两基因共用启动子以及3个参照基因;对于检测到拷贝数缺失者,应用琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增后的PCR产物或直接测序。结果:两例阳性对照应用多重竞争性荧光PCR技术检测到的COL4A5基因缺失突变与应用多重连接依赖性探针扩增技术检测到的COL4A5基因缺失突变一致。20例患者中6例(30%)明确了基因型,其中2例患者具有累及COL4A5和COL4A6两个基因5'端的大片段缺失,2例患者具有累及COL4A5基因30个外显子以上的大片段缺失,1例患者具有累及COL4A5基因至少1个外显子的大片段缺失,1例患者具有COL4A5基因缺失13个碱基的小的缺失突变,未检测到重复突变。结论:多重竞争性荧光PCR技术可用于检测X连锁Alport综合征大片段缺失突变,是对该病分子诊断检测方法的重要补充。

采用竞争性定量PCR检测幽门螺杆菌cagA基因

目的建立竞争性定量 PCR 检测幽门螺杆菌 cagA 基因的方法。方法以重组 PCR 将乳糖操纵子中 Lac 阻抑蛋白特异性结合序列(21bp)重组入 cagA 基因397bp 的片段中构建内参标模援(rfcagA)。体外克隆并表达具有双功能的 GST-LacI 融合蛋白,其一端只有 GST 酶活性,另一端可特异性地与重组内参标模板结合。在定量 PCR 中,以 rfcagA 为内参标模板,pMC3 或 Hp 基因组 cagA 作为竞争性模板,PCR 产物的5′-端标记了生物素,可与包被了亲和素的微孔板结合,只有 rfcagA 的 PCR 产物可与融合蛋白结合而显色。结果 GST 底物的显色程度与样本的 ca-gA 含量呈负相关,当反应体系中的起始模板量为10-10~5拷贝,循环次数小于等于20次。原始模板数以指数方式增长,并建立了原始模板的考贝数与 A_(340)值同的标准曲线。用该方法检测12份已知菌株中的 cagA 含量,8份 cagA 阳性,cagA 基因的拷贝数为6.3×10^(10)-2.14×10^(11)/L,特异性为100%,敏感度达可检出 cagA 基因2倍的差别。结论这是一个特异、敏感及很实用的定量检测 cagA 基因的方法。

一种竞争性HCV定量方法的建立及其应用

目的:建立检测丙型肝炎病人血清HCV RNA水平的竞争性定量方法。方法:采用含HCV5＇非编码区(5＇NCR)缺失突变重组质粒5Tld,将前期目的基因亚克隆进体外转录载体pCDNAI,获得特录重组体5Tld＇。线性化后用SP6 RNA聚合酶体外转录竞争性缺失突变模板RNA,定量后与血清HCV RNA一起作逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),建立检测血清HCV RNA水平的竞争性定量方法。结果;检测15例丙肝病人20份血清,滴度为6.6×10^(12)～6.6×10~6拷贝/ml,经干扰素治疗后病毒水平下降1～5个log,年龄<20岁者干扰素治疗效果较好。结论:竞争性逆转录聚合酶链反应是一种较好的检测HCV RNA水平的定量方法。

肾移植急性排斥反应与T细胞胞内抗原-1表达的关系

目的 :研究移植肾组织T细胞细胞内抗原 1(TIA 1)的表达与急性排斥 (AR)的关系。 方法 :采用竞争性逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)技术在mRNA水平上定量检测 4 2例标本中的TIA 1,并将结果与组织学诊断比较分析。 结果 :AR组全部检测出TIA 1,而慢性排斥组和无排斥组分别只有 10 / 15和 3/ 13;AR组TIA 1mRNA水平明显高于慢性排斥组 (P <0 .0 5 )和无排斥组 (P <0 .0 5 ) ;AR标本TIA 1表达与病理改变严重程度相关联 ,病理改变越严重 ,表达水平越高 ;竞争性RT PCR测定TIA 1诊断移植肾AR敏感度和特异度分别为 93%和6 8%。 结论 :TIA 1的表达与移植肾AR有关 。

Enhancing selectivity in acidic CO_(2) electrolysis:Cation effects and catalyst innovation

The electrochemical reduction of CO_(2)(eCO_(2)R)under ambient conditions is crucial for reducing carbon emissions and achieving carbon neutrality.Despite progress with alkaline and neutral electrolytes,their efficiency is limited by(bi)carbonates formation.Acidic media have emerged as a solution,addressing the(bi)carbonates challenge but introducing the issue of the hydrogen evolu-tion reaction(HER),which reduces CO_(2) conversion efficiency in acidic environments.This review focuses on enhancing the selectivity of acidic CO_(2) electrolysis.It commences with an overview of the latest advancements in acidic CO_(2) electrolysis,focusing on product selectivity and electrocatalytic activity enhancements.It then delves into the critical factors shaping selectivity in acidic CO_(2) electrolysis,with a special emphasis on the influence of cations and catalyst design.Finally,the research challenges and personal perspectives of acidic CO_(2) electrolysis are suggested.

纳米蒙脱土/环氧树脂复合材料的插层剥离及性能研究

考察了纳米蒙脱土在环氧树脂中的插层剥离行为 ,发现提高环氧树脂在蒙脱土层间的固化反应速率 ,有利于促进层间反应在与层外反应的竞争中胜出 ,有利于蒙脱土在环氧树脂中的剥离。制备了纳米蒙脱土 /环氧树脂复合材料 ,性能测试显示复合材料的力学性能和热性能均比纯环氧树脂有所提高 ,无缺口冲击强度提高了 177.8% ,拉伸强度提高了 46.5 % ,热变形温度提高了 13 .2℃。

恶性血液病患者mdr1基因启动子区甲基化状态及其与表达的关系

为了探讨多药耐药 (mdr1)基因启动子区的甲基化状态及其与表达的关系 ,采用甲基化敏感的HpaⅡ酶切结合竞争性定量PCR检测 5 4例急性白血病 (AL)和 9例多发性骨髓瘤 (MM)患者mdr1基因启动子区位于转录起始点上游 - 110和 - 5 0bp处两个CCGG位点 (I区和Ⅱ区 )的甲基化率 ;半定量RT PCR检测mdr1基因的表达水平。结果显示I区、Ⅱ区及总甲基化率均与表达呈负相关 ,I区比Ⅱ区相关密切 (r分别为 - 0 .6 4和 - 0 .4 0 )。低甲基化组(n=36 )mdr1高表达率显著增高 (P <0 .0 0 1)。与化疗敏感组 (n =8)相比 ,耐药组 (n=16 )I区 (P =0 0 5 )、Ⅱ区 (P <0 .0 5 )和总甲基化率 (P <0 .0 5 )均减低。与未化疗组 (n =36 )相比 ,化疗后组 (n =14 )I区和总甲基化率均减低 (P <0 .0 5 ) ,Ⅱ区甲基化率也减低 ,但无统计学意义 (P >0 .0 5 )。化疗后组随甲基化率减低 ,mdr1表达升高 ,但尚无统计学意义 (P =0 .0 6 )。结论 :AL和MM患者骨髓mdr1基因表达水平与基因转录起始点上游 - 110和- 5 0处两个CCGG位点的甲基化程度呈负相关 ,且与 - 110处关系更密切。化疗后及耐药病人mdr1基因甲基化水平相对降低。化疗后mdr1基因表达增高与其甲基化水平降低有关。

NB4细胞系诱导分化过程中WT1基因表达的变化

为了研究WT1基因的表达与NB4细胞诱导分化的关系 ,应用基因重组技术建立了竞争性RT PCR定量检测WT1基因表达的方法 ,并用间接免疫荧光标记法检测NB4细胞表面抗原CD11b的变化。结果发现 ,随着NB4细胞向粒系终末分化WT1基因表达迅速下降 ,全反式维甲酸(ATRA)作用 0 ,12 ,2 4小时后每 μg总RNA中WT1基因的分子数分别为 4× 10 6,1.5 6× 10 6和0 .4× 10 6,与CD11b的变化情况相一致。结论提示 ,WT1基因高表达与NB4白血病细胞分化阻滞有关 。

大鼠发情周期下丘脑中食欲素及其受体的变化

目的观察大鼠发情周期各期下丘脑中食欲素及其受体(OX1R、OX2R)表达的变化,探讨食欲素对发情周期的可能调节作用。方法通过竞争性逆转录多聚酶链式反应(competitive RT-PCR)方法检测大鼠下丘脑中食欲素前体(Prepro-Orexin)、食欲素-A、OXIR和OX2R在发情周期各期的表达。结果发情前期的OX1R mRNA表达水平明显高于发情后期,而prepro-OX和OX2R mRNA的表达各期间没有明显的不同。结论食欲素可能通过结合OX1R调节促性腺激素释放激素和/或黄体生成素的分泌而参与排卵的发生。

QC-PCR测定HIV-Ⅰ型DNA含量

目的为人类免疫缺陷病毒(HIV)含量测定提供一种定量的方法.方法以HIV-Ⅰ型感染小鼠,用竞争性定量多聚酶链式反应(Quantitative Competitive Polymerase Chain Reaction,QC-PCR)和增强化学发光法测定HIV含量.结果用QC-PCR方法测定HIV含量简单、快速、准确而且无污染.结论QC-PCR可作为HIV DNA测定的新方法,是AIDS早期诊断、疗效观察及愈后判断的监控手段.

Relation between the viremia level and liver disease in patients with chronic HCV infection

Abstract AIMS\ To explore the relation between the level of HCV viremia and HCV_related chronic liver disease. METHODS\ Serum hepatitis C virus(HCV) RNA in 27 patients with chronic HCV infection was analyzed quantitatively by competitive reverse transcription polymerase chain reaction (CRT_PCR).