丙酮酸脱氢酶E1α亚单位、转录激活反应RNA结合蛋白1在表皮生长因子受体突变晚期非小细胞肺癌中的表达及对患者预后的影响

目的探讨丙酮酸脱氢酶E1α亚单位(PDHA1)、转录激活反应RNA结合蛋白1(TARBP1)在表皮生长因子受体(EGFR)突变晚期非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及对患者预后的影响。方法取95例接受靶向治疗的EGFR突变晚期NSCLC患者的肿瘤组织,免疫组化法检测PDHA1、TARBP1蛋白的表达情况,并分析其与患者临床特征的关系。随访3年,记录患者的总生存率,NSCLC患者预后的影响因素采用Cox风险比例回归模型分析。结果95例NSCLC患者肿瘤组织中,PDHA1阳性表达率为45.26%,阴性表达率为54.74%;TARBP1阳性表达率为74.74%,阴性表达率为25.26%。分化程度为中低分化、淋巴结转移NSCLC患者肿瘤组织中PDHA1蛋白的阳性表达率较低、TARBP1蛋白的阳性表达率较高。至随访结束,95例NSCLC患者病死67例,生存28例。PDHA1阳性表达患者总生存率为44.2%,明显高于PDHA1阴性表达患者的17.3%(P﹤0.01);TARBP1阳性表达患者的总生存率为18.3%,明显低于TARBP1阴性表达患者的62.5%(P﹤0.01)。多因素Cox回归分析结果显示,分化程度为中低分化、有淋巴结转移、PDHA1表达阴性、TARBP1表达阳性均是NSCLC患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。结论接受靶向治疗的EGFR突变晚期NSCLC患者肿瘤组织中PDHA1阴性表达率较低、TARBP1阳性表达率较高,且PDHA1阴性表达、TARBP1阳性表达患者的预后较差。

长链非编码RNA OSER1-AS1对缺氧环境下胃癌细胞上皮间质转化的机制研究

目的:探讨长链非编码RNA氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA 1(LncRNA OSER1-AS1)对缺氧诱导的胃癌细胞上皮间质转化(EMT)的作用机制。方法:缺氧组(Hypoxia)、对照组(Hypoxia+NC)细胞转染si-LncRNA OSER1-AS1-NC,实验组(Hypoxia+si)细胞转染si-LncRNA OSER1-AS1后,Hypoxia、Hypoxia+NC、Hypoxia+si组细胞的培养基中添加CoCl2构建缺氧微环境;另取细胞转染si-LncRNA OSER1-AS1-NC后,常规培养,为正常组(control)细胞。qRT-PCR检测各组细胞中LncRNA OSER1-AS1、E-cadherin和α-SMA mRNA表达,检测各组细胞形态的改变,CCK-8法检测细胞的增殖能力;Transwell侵袭检测各组细胞的侵袭能力;免疫荧光和Western blot检测各组细胞中E-cadherin、α-SMA以及对应蛋白的表达水平。结果:与control组相比,Hypoxia、Hypoxia+NC、Hypoxia+si组细胞中LncRNA OSER1-AS1的表达、E-cadherin的mRNA和蛋白的表达以及细胞中E-cadherin与α-SMA荧光强度的比值明显降低,细胞中发生EMT细胞比例、细胞增殖性能、侵袭能力、α-SMA的mRNA和蛋白表达明显升高,与Hypoxia+NC组相比,Hypoxia+si组细胞中LncRNA OSER1-AS1的表达、E-cadherin的mRNA和蛋白表达以及细胞中E-cadherin与α-SMA荧光强度的比值明显降低,细胞中发生EMT细胞比例、细胞增殖性能、侵袭能力、α-SMA的mRNA和蛋白表达明显升高,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。结论:LncRNA OSER1-AS1在胃癌组织中呈低表达,沉默其表达RNA能明显增强其侵袭能力,推动肿瘤细胞的EMT过程。

乳腺癌患者外周血中组织特异性mRNA的表达及其临床意义

目的 :检测乳腺癌患者外周血中组织特异性mRNA的表达并分析其临床意义。方法 :用RT PCR方法检测 6 7例乳腺癌患者、2 9例乳腺良性疾病患者 ,35例正常健康人外周血中组织特异性mRNA的表达。结果 :6 7例乳腺癌患者中有 18例外周血中组织特异性mRNA表达阳性 ,阳性率为 2 6 9% ,与健康对照人群和乳腺良性疾病患者相比差异有显著意义 ,P <0 0 5 ;Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌患者外周血中组织特异性mR NA的表达高于Ⅰ、Ⅱ期乳腺癌患者 ,P <0 0 5 ,在不同病理类型乳腺癌患者外周血中的表达差异无显著意义 ,P >0 0 5 ,手术后比手术前的阳性表达率低 ,但差异无显著意义 ,P >0 0 5。结论 :乳腺癌患者外周血中组织特异性mRNA的阳性表达同肿瘤的分期有关 。

竞争性内源RNA的生物学功能及其调控

最新研究表明,RNA之间可以通过竞争结合共同的microRNA反应元件(micro RNA response element,MRE)实现相互调节,这种调控模式构成竞争性内源RNA(Competing endogenous RNA,ceRNA)。已发现的ceRNA包括蛋白编码mRNA和非编码RNA,其中后者包括假基因转录物、长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)、环状RNA(Circular RNA,circ RNA)等。文章主要从ceRNA分类的角度,阐述各类ceRNA构成的调控网络发挥的生物学功能在病理和生理相关过程中的作用,以及可能影响ceRNA调控有效性的因素。

lncRNA作为竞争性内源分子的作用机制及研究进展

竞争性内源RNA(competing endogenous RNA,ceRNA)假说提出具有相同短序列非编码微小(microRNA,miRNA)应答元件(microRNA response element,MRE)的转录物通过竞争的方式结合miRNA,从而影响转录物的表达水平。ceRNA假说颠覆了miRNA与靶基因单向调控的传统观念,在RNA调控网络中具有重要的生物学意义。在众多转录物中,长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类序列长度超过200个核苷酸的非编码RNA,对lncRNA的研究涉及到遗传、分子生物、基因调控、疾病(癌症、神经系统疾病等)等领域。miRNA与lncRNA形成了一个相互作用的调控网络,lncRNA可作为ceRNA抑制miRNA的功能,从而影响后续基因的表达。近年来,随着生物信息学技术的发展,科研人员发现ceRNA作用机制不仅涉及到人类癌症疾病,而且在各种复杂动物的肌细胞分化、脂肪细胞分化和颗粒细胞凋亡等生物过程中也发挥重要的调控作用。作者追溯了ceRNA调控机制,分析了ceRNA网络调控的影响因素,综述了ceRNA在不同动物中调控miRNA的研究进展,为进一步研究lncRNA与miRNA的调控网络提供参考,为畜牧业发展及复杂动物疾病治疗提供新的思路。

TARBP2降解AKAP12转录本促进人乳腺癌细胞转移

目的研究乳腺癌细胞中反式激活反应RNA结合蛋白2(TARBP2)转录后调控转移抑制基因A激酶锚定蛋白12(AKAP12)表达的作用及机制。方法生物信息学方法分析TARBP2在乳腺癌中的表达及其与肿瘤转移间的关联和乳腺癌中TARBP2与AKAP12表达之间的关联。利用脂质体转染后药物筛选的方法在人乳腺癌细胞系MDA-MB-231中稳定过表达TARBP2。裸鼠成瘤实验检测肿瘤肺转移;RT-qPCR检测靶基因AKAP12表达及半衰期。荧光素酶报告基因实验检测调节基因3′非编码区(3′UTR)的能力。EMSA实验检测TARBP2结合3′UTR中的茎环结构。结果人乳腺癌组织中TARBP2高水平表达且与患者淋巴结转移密切相关;TARBP2显著促进MDA-MB-231细胞肺转移(P<0.05);TARBP2显著抑制AKAP12表达(P<0.01)及其mRNA半衰期(P<0.05);TARBP2显著降低含AKAP123′UTR的报告基因荧光素酶活性(P<0.05)并结合其茎环结构;人乳腺癌组织中TARBP2表达与AKAP12表达呈显著负性关联(P<0.001)。结论TARBP2抑制AKAP12表达可能是其促进乳腺癌转移的机制之一。

长链非编码RNA OIP5-AS1在肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)与肿瘤的发生发展密切相关。LncRNA反义Opa反应蛋白5RNA(Opa interacting protein 5-antisense RNA 1,OIP5-AS1)在多种肿瘤中不仅异常表达,还发挥癌基因的作用,是潜在的肿瘤治疗靶点,并有望成为肿瘤诊断和预后新的标志物。本文就近年来OIP5-AS1在肿瘤中作用的相关研究作一综述,以期为OIP5-AS1的临床应用提供依据。

Toehold 开关调控的大肠杆菌基因表达体系

设计了一种核糖体调节器—“立足点开关”(toehold switch)。与传统核糖体调节器设计不同的是,该核糖体调节器的起始密码子(AUG)和核糖体结合位点位于核糖体调节器中发夹结构RNA的环(loop)上,而“茎”(stem)结构是完全互补配对的RNA双链。通过RNA链替换反应,引发链(trigger)RNA能够打开发夹结构RNA,从而激活下游绿色荧光蛋白的表达,导致荧光信号的增长,最终实现对大肠杆菌基因表达的调控。系统研究了“茎”的长度对绿色荧光蛋白表达的调控作用。实验结果表明,当“茎”的长度大于8个碱基时,发夹结构RNA就能有效地抑制绿色荧光蛋白的表达。进一步的共表达实验结果表明,引发链RNA能够打开发夹RNA,从而调控大肠杆菌基因表达。Toehold开关调控的大肠杆菌基因表达系统具有可拓展性,可应用于多基因表达调控,对基因疾病诊疗具有潜在应用价值。

反义HSP70对人乳腺癌细胞的抑瘤效应

目的：观察反义热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）RNA对人乳腺癌细胞的生物学特性的影响，探讨其抗肿瘤作用。方法：将逆转录病毒真核表达载体介导的反义HSP70重组质粒pX-AHSP70和空载体pLXSN-neo转染至MCF7/Adr人乳腺癌细胞，通过细胞生长曲线和软琼脂集落实验以及裸鼠移植瘤实验观察转染反义HSP70重组质粒细胞的体内外抑瘤作用。结果：建立了稳定表达反义HSP70 RNA的MAp70细胞，与空载体细胞相比，HSP70蛋白的表达下降了48％。细胞群体生长速度明显减慢，软琼脂集落形成率和抑制率分别为6.08％和62.14％，裸鼠皮下接种的平均出瘤时间为15天，最终平均瘤重为108 mg，以上参数与空载体细胞相比，均有显著差异。结论：反义HSP70 RNA能够有效地抑制HSP70表达，进而抑制乳腺癌细胞的体外增殖和体内移植瘤的形成与发展。

长链非编码RNA氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA 1对肾癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA氧化应激反应丝氨酸丰富1反义RNA 1(lncRNA OSER1-AS1)对肾癌ACHN细胞的增殖、迁移、侵袭的影响及其对微小RNA(microRNA,miR)-612的调控作用。方法2017年1月至2020年3月,采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测肾癌组织、癌旁组织中OSER1-AS1、miR-612的表达量;体外培养肾癌细胞ACHN,分别将OSER1-AS1小分子干扰RNA(si-OSER1-AS1)及其阴性对照(si-NC)、miR-612寡核苷酸模拟物(miR-612 mimics)及阴性对照mimic NC序列(miR-NC)、si-OSER1-AS1与miR-612特异性寡核苷酸抑制剂的阴性对照(anti-miR-NC)、si-OSER1-AS1与miR-612特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-612)转染至ACHN细胞;采用RT-qPCR法检测细胞中OSER1-AS1、miR-612的表达量;采用噻唑蓝(MTT)、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测OSER1-AS1、miR-612的靶向关系;蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、p21蛋白表达量。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果肾癌组织OSER1-AS1的表达水平(1.00±0.08比3.37±0.28)高于癌旁组织(t=52.113,P<0.05),miR-612的表达水平(1.00±0.06比0.47±0.04)低于癌旁组织(t=47.062,P<0.05);si-OSER1-AS1组细胞活力(0.66±0.05比0.31±0.03)与Cyclin D1(0.63±0.05比0.25±0.02)、MMP-2(0.82±0.07比0.35±0.03)、MMP-9(0.76±0.06比0.28±0.03)蛋白水平低于si-NC组(t=18.007、21.169、18.514、21.466,P<0.05),si-OSER1-AS1组迁移细胞数[(115.56±9.52)个比(55.99±5.59)个]、侵袭细胞数[(93.41±6.09)个比(46.05±4.35)个]低于si-NC组(t=16.188、18.984,P<0.05),si-OSER1-AS1组p21蛋白水平(0.15±0.02比0.57±0.05)高于si-NC组(t=23.398,P<0.05);miR-612组细胞活力(0.68±0.05比0.39±0.03)与Cyclin D1(0.66±0.05比0.28±0.03)、MMP-2(0.85±0.06比0.46±0.03)、MMP-9(0.78±0.05比0.34±0.02)蛋白水平低于miR-NC组(t=14.920、19.551、17.441、24.512,P<0.05),miR-612组迁移细胞数[(118.76±9.87)个比(64.39±4.65)个]、侵袭细胞数[(99.65±9.12)个比(53.57±3.67)个]低于miR-NC组(t=14.950、14.062,P<0.05),miR-612组p21蛋白水平(0.14±0.02比0.51±0.04)高于miR-NC组(t=24.820,P<0.05);双荧光素酶报告实验证实OSER1-AS1可靶向结合miR-612;抑制miR-612表达可明显逆转干扰OSER1-AS1对细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论干扰OSER1-AS1可通过上调miR-612的表达从而抑制肾癌ACHN细胞增殖、迁移及侵袭。

TARBP1在非小细胞肺癌患者肿瘤组织中的表达及与生存预后的关系

目的探究TARBP1在非小细胞肺癌患者肿瘤组织中的表达及与生存预后的关系。方法选择我院2013年2月至2015年4月诊治的103例非小细胞肺癌患者作为研究对象,观察其手术后病理组织中TARBP1蛋白表达情况,探究TARBP1蛋白表达与非小细胞肺癌患者临床病理资料的关系。检测非小细胞肺癌组织及癌旁组织中TARBP1 mRNA表达量,探究TARBP1 mRNA在非小细胞肺癌患者3年预后诊断中的价值。分析非小细胞肺癌患者3年生存预后的独立影响因素。结果TARBP1在非小细胞肺癌组织中阳性表达78例,占比75.73%;TARBP1在癌旁组织中阳性表达23例,占比22.33%,两组差异有统计学意义(P<0.001)。TARBP1表达与非小细胞肺癌患者年龄、性别、肿瘤直径无关(P>0.05),与TNM分期、组织分化程度、病理类型和淋巴结转移有关(P<0.05)。TARBP1 mRNA在非小细胞肺癌组织中的相对表达量与TARBP1 mRNA在癌旁组织中的相对表达量比较,差异有统计学意义(P<0.001)。非小细胞肺癌术后3年生存患者与死亡患者接受根治术治疗时,非小细胞肺癌组织中TARBP1 mRNA表达量比较,差异有统计学意义(P<0.001)。TARBP1 mRNA诊断非小细胞肺癌患者3年生存期的AUC为0.891(95%CI:0.723~0.975),价值较高,可辅助评估非小细胞肺癌患者生存预后。单因素分析结果显示TNM分期、组织分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移和TARBP1表达与非小细胞肺癌患者生存预后有关。多因素分析结果表明TNM分期及组织分化程度越高、肿瘤直径≥5 cm、淋巴结转移及TARBP1阳性表达,提示非小细胞肺癌患者预后较差。结论检测非小细胞肺癌组织中TARBP1蛋白表达有助于患者预后评估。

呼和浩特地区儿童肠道病毒感染的临床症状与病原学分析

目的调查呼和浩特地区儿童肠道病毒感染情况,指导临床疾病预防和控制。方法收集2017年1—12月内蒙古妇幼保健院719例具有肠道病毒(EV)感染指征的患儿临床资料及粪便标本,标本经前处理后提取RNA,采用荧光定量反转录PCR方法检测常见肠道病毒,结合患儿临床特征进行综合分析。结果2017年内蒙古妇幼保健院儿童粪便标本EV阳性率为7.8%(56/719),其中致肠病变人孤儿病毒(简称埃可病毒)30型感染15例(26.8%),肠道病毒71型(EV71)感染12例(21.4%),柯萨奇病毒(Coxsackie virus)16型(CA16)感染9例(16%),其他类型共20例(35.7%);EV感染的发病高峰时间为8~10月份;男女之比为133:100;不满1岁患儿12例(21.4%),1≤年龄<3岁患儿7例(12.5%),3≤年龄<5岁患儿11例(19.6%),5≤年龄<7岁患儿22例(占39.2%),7≤年龄≤9岁患儿4例(7.1%),发病高峰年龄为5≤年龄<7岁;患儿临床症状发热32例(57.1%),腹泻30例(53.6%),呕吐33例(58.9),皮疹5例(8.9%),心肌损害12例(21.4%),神经系统并发症12例(21.4%),呼吸系统并发症14(25%)。结论儿童肠道病毒感染具有明显季节性(8~10月份),存在高发年龄段(5≤年龄<7岁),主要表现为发热、腹泻、呕吐、皮疹、心肌损害等。

miRNA-21靶向调控子宫内膜癌PTEN基因MRE-21片段的研究

目的:观察微小RNA-21(miR-21)对子宫内膜癌细胞PTEN基因的调控作用,并验证PTEN基因3'-UTR区内的微小RNA反应(MRE)-21片段为miR-21作用的靶向位点,为通过miR-21治疗子宫内膜癌提供依据。方法:在人子宫内膜癌HEC-1A细胞中转染不同浓度的miR-21拮抗剂、无关序列和空白对照,利用qRT-PCR法检测miR-21以及靶基因PTEN的mRNA水平,利用免疫印迹法检测PTEN的蛋白表达水平。再利用双荧光素酶报告基因法对miR-21与PTEN3'-UTR区内的MRE-21片段的靶向关系进行验证。结果:在HEC-1A细胞内,随着miR-21拮抗剂浓度的增加,miR-21的表达量逐步减少。miR-21拮抗剂组与无关序列组比较,miR-21表达量的减少差异有统计学意义(P<0.01);PTEN蛋白表达量的增加差异亦有统计学意义(P<0.01)。p MER-报告载体和miR-21拮抗剂共转染HEC-1A细胞时,与p MIR-空白载体转染组以及p MER-报告载体转染组相比,荧光素酶表达水平皆显著上调(P<0.01)。结论:沉默miR-21能上调子宫内膜癌细胞内PTEN基因的表达,PTEN基因3'-UTR区的MRE-21片段为miR-21作用的靶向位点。