Ⅱ类抗原反式激活因子与HLA-DR抗原的关系及其意义(英文)

本研究探讨Ⅱ类抗原反式激活因子(CIITA)和人类白细胞抗原(HLA-DR)表达时相的关系和差异,及STAT1-α反义寡核苷酸(STAT1-αAS)对CIITA和HLA-DR的抑制作用。分离健康志愿者外周血T淋巴细胞,给予不同剂量干扰素-γ(IFN-γ)后,用RT-PCR法检测CIITAmRNA,Westernblot分析HLA-DR抗原表达,然后给予不同浓度STAT1-αAS和STAT1-α寡核苷酸有义链(STAT1-αS),再次检测CIITAmRNA和HLA-DR的表达。结果表明:CIITAmRNA在IFN-γ作用后5小时开始表达,14小时达峰值;HLA-DR在28小时后可被检测出,52小时达高峰。5、10和20μmol/LSTAT1-αAS作用于细胞后,CIITAmRNA的表达显著低于对照组(P<0.01),而在S组明显高于AS处理组(P<0.01),S组与对照组间无显著差异;HLA-DR的表达可被STAT1-αAS抑制,AS组仅为对照组的64.3%(P<0.01),S组与对照组间仍无差异;STAT1-αAS作用后,HLA-DR变化同CIITA。结论:CIITAmRNA表达与HLA-DR表达呈正相关且早于后者;STAT1-αAS可特异性抑制CIITA和HLA-DR的表达,并能预防T淋巴细胞激活,CIITA在移植免疫病因中起重要作用。

MHCⅡ类反式激活因子在上调HepG2细胞HLAⅡ类分子表达中的作用

目的探讨主要组织相容性复合物(major histocom patibility complex,MHC)Ⅱ类反式激活因子(classⅡtrans-activator,CⅡTA)在调控HepG2细胞HLAⅡ类分子表达中的作用。方法将含CⅡTAcDNA的真核表达载体EBS-NPL-CⅡTA和不含CⅡTAcDNA的空载体EBS-NPL分别转染至HepG2细胞。用RT-PCR技术检测未经转染的HepG2细胞、转染EBS-NPL-CⅡTA及空载体EBS-NPL的HepG2细胞CⅡTA mRNA的表达,并用间接细胞免疫荧光技术及流式细胞技术检测其3种HLAⅡ类分子(HLA-DR、DP、DQ)的表达。结果未经转染的HepG2细胞和转染空载体EBS-NPL的HepG2细胞均无CⅡTA mRNA和HLAⅡ类分子的表达。转染EBS-NPL-CⅡTA后的HepG2细胞出现CⅡTA mRNA表达,并表达3种HLAⅡ类分子。结论CⅡTA是调控HepG2细胞是否表达HLAⅡ类分子的关键因子,HepG2细胞不表达HLA-Ⅱ类分子与其缺乏CⅡTA表达有关,为进一步研究CⅡTA在肝癌治疗中的作用奠定基础。

MHCⅡ类反式激活因子与病毒感染的关系

MHCⅡ类反式激活因子(ClassⅡtransactivator,CⅡTA)通过调控细胞是否表达MHCⅡ类分子及其水平而决定宿主是否对外来病毒感染产生免疫应答及其程度,从而影响病毒感染的发生、发展与转归。本文介绍了CⅡTA的结构与功能、IFNγ诱导MHCⅡ类基因表达的机制及CⅡTA分子与病毒间的相互作用。

JDVTat反式激活LTR与HIV-1Tat采用类似的细胞因子

为分析 JDV Tat 在反式激活 JDV 及 HIV-1 LTR 过程中是否采用与 HIV-1 Tat 类似的细胞因子,本文构建了包含完整激活域的 jTat70 和 hTat47,同时构建了 cyclin T1 和 CDK9 真核表达及反义转译质粒。过量表达 hTat47和 jTat70 对 hTat 反式激活 HIV-1 LTR,jTat 反式激活 JDV 和 HIV-1 LTR 均有明显的抑制作用推测 jTat 和 hTat 的反式激活作用可能涉及类似的细胞因子。通过 cyclin T1 和 CDK9 的反义转译质粒对 jTat 反式激活的抑制作用证实这两种细胞因子参与了 jTat 对 JDV 和 HIV-1 LTR 的反式激活。

主要组织相容性复合体Ⅱ类分子反式激活因子的研究进展

主要组织相容性复合体Ⅱ类分子反式激活因子(MHC class Ⅱ transactivator,CⅡTA)是 1993年发现的反式转录激活因子,被认为是MHCⅡ类分子表达的主要调控因子。本文就C Ⅱ TA的结构、功能以及对MHC基因调节及其应用前景作一综述。

MHCⅡ类分子反式激活因子(CⅡTA)的研究进展

MHCⅡ类分子反式激活蛋白 (CⅡTA ,classⅡtransactivator)的发现是近年来国际免疫学研究的一项重大突破 ,CⅡTA及其突变体在免疫调节和免疫治疗中具有诱人前景。本文对CⅡTA的结构、功能及其反式激活MHCⅡ类分子的机制作一综述 ,并对CⅡTA及其突变体的应用前景作一简要介绍。

腺病毒介导MHC Ⅱ类分子反式激活因子突变体基因治疗小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎

目的:观察腺病毒介导MHC Ⅱ类分子(major histocompatibility complex classⅡmolecules)反式激活因子突变体(CⅡTAm)基因治疗小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎(experi mental autoi mmune thyroiditis,EAT)的效果,并探讨其可能的作用机制。方法:31只健康雌性CBA/J小鼠随机分成EAT模型组(n=8)、CⅡTAm治疗组(n=9)、GFP对照组(n=9)和正常对照组(n=5)。除正常对照组不作特殊处理外,其余3组均以猪甲状腺球蛋白(porcine thyroglobulin,pTg)+弗氏佐剂(com-plete or incomplete Freund adjuvant,CFA/IFA)建立EAT小鼠模型,CⅡTAm治疗组和GFP对照组分别静脉注射重组腺病毒Ad-CMV-CⅡTAm及Ad-GFP进行治疗,EAT模型组注射等量生理盐水。首次免疫后第29日处死小鼠,进行H-E染色观察甲状腺病理形态;免疫组织化学染色测定甲状腺MHCⅡ类分子表达;分析pTg刺激下脾脏淋巴细胞的增殖及其上清液中IFN-γ的分泌水平;ELISA法检测血浆中抗-pTg自身抗体滴度;流式细胞术分析外周血和脾脏淋巴细胞中CD4+T淋巴细胞上可诱导共刺激分子(inducible costi mulator,ICOS)的表达水平。结果:H-E染色结果表明,CⅡTAm治疗组甲状腺淋巴细胞浸润指数(0.3±0.5)低于EAT模型组(1.4±0.4)和GFP对照组(1.5±0.2,P<0.01)。免疫组化结果显示,EAT模型组和GFP对照组甲状腺组织有弥漫性MHC Ⅱ类分子表达,而CⅡTAm治疗组未见明显表达,正常对照组表达呈阴性。80μg/mlpTg刺激下,CⅡTAm治疗组小鼠淋巴细胞刺激指数(SI)明显低于EAT模型组或GFP对照组(P<0.05);培养上清各组IFN-γ分泌水平与SI结果类似(P<0.01)。CⅡTAm治疗组血浆抗-pTg自身抗体滴度显著低于EAT模型组或GFP对照组(P<0.01);CⅡTAm治疗组外周血和脾脏CD4+T细胞ICOS分子阳性表达率亦显著低于EAT模型组或GFP对照组(P<0.01)。结论:重组腺病毒Ad-CMV-CⅡTAm能抑制EAT小鼠甲状腺组织MHCⅡ类分子表达,抑制自身反应性T细胞增殖,减轻甲状腺炎性细胞浸润,降低自身抗体滴度,对EAT有一定的治疗作用。

Ⅱ类分子反式激活因子与MHC表达

MHC Ⅱ类分子反式激活因子 (CⅡTA)是参与MHC Ⅱ类基因转录的关键调节蛋白 ,它的调节基本上决定了MHC Ⅱ类分子的存在与否及表达程度 ,也决定了免疫应答的本质 ,因而被看作是MHC Ⅱ类基因表达的主宰调节者。

牛泡沫病毒反式激活因子在内部启动子上应答元件的研究

泡沫病毒的基因转录依赖至少两个不同的启动子 :LTR调节病毒结构蛋白的表达 ,而内部启动子 (IP)则起始调节蛋白mRNA的转录。牛泡沫病毒 (BFV)在env与 3′LTR之间有两个重叠的开放阅读框架orf 1和orf 2 ,分别编码BFVORF 1、ORF 2等多种调节蛋白。这些蛋白中BFVORF 1为转录激活因子 ,称为Tas。Tas对LTR及IP均有反式激活作用。BFV中第二类启动子IP的存在反映了泡沫病毒基因调控的复杂性。已从BFV3 0 2 6中国毒株中克隆了基因组区段 85 72～ 95 0 9,并通过测序和功能分析证明该区段包含了BFVIP。为了对IP进行更精确的定位 ,对其进行了进一步的缺失分析 ,将完整的IP定位在 9117～ 940 5之间。该启动子的TATA盒位于 912 80～92 85 ,是IP必不可少的元件之一。杂合启动子和缺失分析表明 ,TATA盒上游 16 0bp的区域内包含了IP的Tas应答元件 (TREIP) ,其功能类似于增强子。Tas对IP具有强烈的激活作用 ,而C端缺失的ORF 1蛋白或ORF 2蛋白均不足以激活IP的表达。

三氧化二砷反式激活基因AsTP2的克隆化及生物信息学分析

目的 三氧化二砷反式激活靶基因(AsTP2)的克隆化研究。方法 对构建的三氧化二砷差异表达的肝HepG2细胞 cDNA消减文库进行筛选,利用RT PCR技术获得新基因AstTP2的编码序列,结合生物信息学对其氨基酸序列、染色体定位和基因 功能进行分析比较。结果 AsTP2基因编码区为1119nt,编码产物为372aa。经核苷酸序列数据库(GenBank)和蛋白质一级结构序 列数据库(SwissProt)同源序列的搜寻,发现未知功能的同源蛋白,说明克隆的AsTP2基因属于未知功能新基因,GenBank注册号为 AY744366。该基因在三氧化二砷诱导的HepG2细胞中表达上调。结论 克隆了一条新的三氧化二砷反式激活靶基因AsTP2,为进 一步研究三氧化二砷的反式激活作用和揭示砷致癌的生物学机制提供新线索。

核因子кB介导病毒基因反式激活途径在激素敏感型单纯性肾病发病中的作用

目的研究核因子кB(NF-кB)介导的病毒基因反式激活途径在激素敏感型单纯性肾病(SRSNS)发病中的作用,探讨呼吸道病毒触发该病的机制。方法采用电泳迁移率改变分析、RT-PCR和ELISA法分别对SRSNS、肾炎性肾病、继发性肾小球疾病、毛细支气管炎和正常儿童外周血单个核细胞(PBMC)NF-кB转录活性、呼吸道病毒基因和抗体表达、血清IL-8水平进行检测。结果1SRSNS活动期NF-кB转录活性增高,与SRSNS恢复期、缓解期和其它组比较差异有统计学意义(P<0.05);2SRSNS活动期血清IL-8水平增高,与NF-кB转录活性呈直线正相关关系(r=0.88,P<0.001),NF-кB活性与呼吸道病毒检出阳性率亦呈正相关趋势。结论NF-кB介导的病毒基因反式激活途径能使IL-8等基因表达增高而致病,这可能是呼吸道病毒触发SRSNS的主要机制之一。

无血清培养上调N2a细胞钙反应性反式激活因子的表达

目的探讨钙反应性反式激活因子(calcium-responsive transactivator,CREST)是否与神经细胞的分化有关。方法选用在促分化因素作用下具有分化为神经元能力的小鼠神经母细胞瘤(N2a)细胞,用无血清培养(血清撤除)诱导N2a细胞分化。接种和培养N2a细胞12～24h后,将其分为对照组和无血清诱导组,对照组继续在含5%胎牛血清(FBS)的培养基中培养,无血清诱导组在不含FBS的培养基中培养。采用免疫印迹技术、免疫荧光技术和RT-PCR检测无血清诱导分化对N2a细胞CREST蛋白和mRNA表达的影响。结果在含5%胎牛血清(FBS)培养基培养的对照N2a细胞中,CREST蛋白水平在各时间点均无明显变化,CREST mRNA水平仅在培养48h后略有升高。而在无血清诱导分化的N2a细胞中,CREST蛋白表达水平在无血清诱导12h时无明显变化,但在诱导24h后明显升高,诱导48h后进一步升高;RT-PCR检测显示,CREST mRNA在无血清诱导12h后即开始升高,诱导24h和48h则升高更为明显。结论无血清诱导分化的N2a细胞中CREST的表达上调,提示CREST可能参与神经细胞的分化。

表皮生长因子受体的反式激活及其与高血压关系的研究进展

最近20年的研究表明,表皮生长因子受体(epidemal growth factor receptor,简称EGFR、ErbB或HER)在心血管系统中起重要作用,包括心脏和血管调节细胞生长和增殖,以及对血管张力的调节。EGFR不仅可以由它的多个肽配体活化,也受到许多其他因素激活,例如血管紧张素Ⅱ(AngII)、内皮素-1、去甲肾上腺素等,这一现象称为'反式激活'。许多实验和临床研究已经表明表皮生长因子受体—配体依赖性活化和/或受体—配体独立性EGFR活化涉及各种心血管疾病的发病机制,如动脉高血压,

核因子-κB/抑制蛋白-κB信号通路介导的激素敏感型单纯性肾病患儿病毒基因反式激活

目的研究核因子-κB(NF-κB)/抑制蛋白-κB(IκB)信号通路在激素敏感型单纯性肾病(SRSNS)患儿病毒基因反式激活中的作用。方法采用电泳迁移率改变实验、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶标记免疫吸附分析法(ELISA)分别测定SRSNS、肾炎性肾病、继发性肾小球疾病、毛细支气管炎和正常儿童外周血单个核细胞(PBMCs)NF-κB活性、呼吸道病毒基因和血浆病毒抗体;同时采用Western blot和ELISA分别检测SRSNS和正常儿童IκBα蛋白质表达和血浆IL-8水平。结果与SRSNS缓解期和其他组比较,SRSNS活动期组NF-κB活性明显增加。NF-κB活性与呼吸道病毒检出阳性率呈正相关趋势。SRSNS活动期血浆IL-8水平增高,且与NF-κB活性呈正相关(r=0.88 P<0.001)。SRSNS活动期患儿IκBα蛋白质明显低于SRSNS缓解期和正常儿童,IκBα蛋白质水平与NF-κB活性呈负相关(r=-0.884 P<0.05)。结论NF-κB/IκB信号通路介导的病毒基因反式激活过程,可能是呼吸道病毒触发SRSNS的主要机制之一。

牛免疫缺陷病毒反式激活因子作用机理的研究

牛免疫缺陷病毒（Ｂｏｖｉｎｅｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓ，ＢＩＶ）基因组编码的反式激活因子（ｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｏｒ，Ｔａｔ）可以提高ＢＩＶ长末端重复区（ｌｏｎｇｔｅｒｍｉｎａｌｒｅｐｅａｔ，ＬＴＲ）启动子的表达。为研究ＢＩＶＴａｔ蛋白的作用机理，分别从ＢＩＶＬＴＲ５′端及３′端构建不同的缺失，从荧光素酶基因（ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ，Ｌｕｃ）为报道基因，通过共转染小牛肺细胞检测ＢＩＶＬＴＲ中与Ｔａｔ蛋白反式激活作用相关的序列。转染结果表明ＢＩＶＬＴＲ启动子始于－５２位的上游区不显著影响Ｔａｔ蛋白的激活作用，转录起始点下游的序列与Ｔａｔ蛋白的激活作用密切相关；并且－２－＋３２间的序列为ＢＩＶＴａｔ蛋白靶序列的一部分。将ＢＩＶＬＴＲ启动子下游序列（－２－＋２０４）亚克隆到ＨＩＶ－１ＬＴＲ启动子－５位之后，ＢＩＶＴａｔ蛋白可极大地提高该杂合启动子表达，进一步说明ＢＩＶＴａｔ蛋白的靶序列存在于－２－＋２０４的范围内；同时将ＢＩＶＬＴＲ启动子上游序列（－４１０－－３）接于ＨＩＶ－１ＬＴＲ下游序列（－２－＋７８）之前，ＨＩＶ－１Ｔａｔ蛋白可以激活该杂合启动子表达，说明ＢＩＶＬＴＲ上游序列可以支持ＨＩＶ－?

抑制子κBα调控激素敏感型单纯性肾病病毒基因反式激活途径中核因子κB活性的研究

目的研究抑制子κBα基因(IκBα)表达及其对激素敏感型单纯性肾病(SRSNS)病毒基因反式激活途径核因子κB(NF-κB)活性的调控作用。方法采用荧光定量RT-PCR、Western blot和电泳迁移率改变实验分别测定SRSNS活动期、SRSNS缓解期患儿和正常儿童外周血单个核细胞(PBMCs)中IκBα mRNA、蛋白质表达水平和NF-κB活性。同时采用RT-PCR和ELISA分别检测PBMCs呼吸道病毒基因表达和血浆病毒抗体。结果SRSNS活动期PBMCs细胞核中NF-κB活性增加,与SRSNS缓解期和正常儿童比较,差异有统计学意义(P<0.05)。NF-κB活性与呼吸道病毒检出率呈正相关趋势(OR=27,Kappa系数=0.59,P<0.05)。SRSNS活动期PBMCs细胞浆中IκBα蛋白质低于SRSNS缓解期和正常儿童(P<0.05)。SRSNS活动期NF-κB活性与IκBα蛋白质水平呈负相关(r=-0.884,P<0.05)。SRSNS活动期IκBα mRNA水平高于正常儿童,但仍低于SRSNS缓解期(P<0.05)。结论NF-κB介导的病毒基因反式激活过程中存在IκBα异常表达,IκBα对于NF-κB活性具有调控作用。

牛泡沫病毒LTR的反式激活因子靶序列研究(英文)

牛泡沫病毒（ＢＦＶ）是反转录病毒科泡沫病毒属成员之一．其基因组除编码ｇａｇ，ｐｏｌ，ｅｎｖ三个结构基因外，在ｅｎｖ和３＇ＬＴＲ之间有２个ＯＲＦ（ＯＲＦ－１和ＯＲＦ－２），编码自身的反式激活因子Ｔａｓ等调节蛋白．本研究利用我们实验室分离鉴定的ＢＦＶ３０２６中国毒株［１２］为材料，克隆Ｏｒｆ－１基因，构建ｐＢＦＶＯＲＦ－１表达质粒，通过带有ｌｕｃ基因的ＬＴＲ系列缺失质粒与ｐＢＦＶＯＲＦ－１共转染，瞬时表达分析结果将ＢＦＶＬＴＲ上Ｔａｓ应答元件（ＴＲＥ）定位于－９８３／－６６８（ＴＲＥＩ），－４７０／－１４０（ＴＲＥＩ）和ＲＵ５区．其中ＴＲＥＩ、ＴＲＥＩＩ为正调控区域，ＲＵ５为负调控区域，并进一步证明ＲＵ５在异源启动子（ＢＩＶＬＴＲ）上具有抑制其下游基因表达的功能．这些结果表明ＢＦＶＴａｓ作用机理与慢病毒（Ｔａｔ）。

核因子-κB和IL-8在激素敏感型单纯性肾病病毒基因反式激活过程中表达变化及糖皮质激素的影响

目的研究激素敏感型单纯性肾病(SRSNS)病毒基因反式激活中核因子-κB(NF-κB)活性和IL-8表达,以及糖皮质激素的抑制作用。方法采用电泳迁移率改变实验、RT-PCR和ELISA分别测定SRSNS活动期(包括初发和复发)患儿外周血单个核细胞(PBMCs)NF-κB活性、呼吸道病毒基因、病毒抗体及IL-8浓度。结果SRSNS活动期NF-κB活性和IL-8水平增加;NF-κB活性与呼吸道病毒检出率呈正相关。SRSNS活动期复发组NF-κB活性和IL-8浓度低于初发组。结论NF-κB和IL-8参与SRSNS病毒基因反式激活。糖皮质激素抑制病毒基因反式激活与其对NF-κB和IL-8的调节作用有关。

HIV－1反式激活因子（Tat）作用机理的研究进展

ＨＩＶ－１反式激活因子（Ｔａｔ）作用机理的研究进展梁臣，耿运琪（南开大学生命科学学院，天津３０００７１）关键词ＨＩＶ－１，Ｔａｔ，ＴＡＲ人免疫缺陷病毒－１（ＨＩＶ－１）属反转录病毒科，慢病毒亚科，为艾滋病的重要病原体。该病毒可长期潜伏于人体内，但在某...