乙型肝炎病毒全S蛋白反式激活蛋白1基因的克隆化

目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学(bioin formatics)技术筛选并克隆乙型肝炎病毒(HBV)全S反式激活新型靶基因,进一步阐明HBV感染相关疾病的发病机制. 方法:以HBV全S蛋白表达质粒pcDNA3.1(-)-全S转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为平行对照,提取mRNA逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后将实验组cDNA分成2组,分别与2种不同的接头衔接,与对照组cDNA进行二次杂交和二次PCR.并结合生物信息学技术,克隆HBV 全S反式激活作用的新型靶基因. 结果:对于所获基因片段序列分析表明,其中之一为新型基因片段.成功克隆出他的全长序列并测序证实,其可以被全S蛋白反式激活,故命名为全S反式激活蛋白1 (CSTP1),已在GenBank中注册,注册号:AY553877.CSTP1 基因的编码序列全长为945个核苷酸(nt),编码产物由315 个氨基酸残基(aa)组成. 结论:HBV全S蛋白具有反式激活蛋白1基因克隆成功. HBV全S反式激活新靶基因的发现,为进一步研究HBV全S的分子生物学机制和探索新型治疗技术奠定基础.