反式白藜芦醇葡萄糖苷在犬体内的药动学研究

目的:建立Beagle犬血浆中反式白藜芦醇葡萄糖苷(TRG)的测定方法并进行药动学研究。方法:Beagle犬分别灌胃和静脉给予TRG后测定不同时间的血药浓度,运用Topfit 2.0药动学软件计算非房室模型药动学参数。结果:Beagle犬以25,50,100 mg·kg^(-1)3个剂量灌胃给予TRG,TRG血浆峰浓度(Cmax)分别为(0.92±0.44),(1.93±0.46),(4.02±1.22)mg·L^(-1);达峰时间(t_(max))分别为(0.83±0.18),(1.19±0.36),(0.78±0.17)h;半衰期(t_(1/2))分别为(0.93±0.16),(1.18±0.19),(1.18±0.29)h;药-时曲线下面积(AUC_(0-t))分别为(1.73±0.77),(4.14±0.52),(8.67±2.95)mg·h·L^(-1)。Beagle犬静脉注射TRG25 mg·kg^(-1)后,TRG的t1/2为(1.72±0.41)h,AUC_(0-t)为(48.9±6.41)mg·h·L^(-1),TRG的绝对生物利用度为3.53%。结论:TRG在25~100 mg·kg^(-1)剂量范围内Cmax和AUC0-t呈线性动力学特征,TRG在Beagle犬体内的绝对生物利用度较低。

反式白藜芦醇葡糖苷在大鼠组织中的体外代谢研究

采用体外孵化方法考察反式白藜芦醇葡糖苷(TRG)在大鼠胃、十二指肠、空肠、回肠和肝脏组织提取物中代谢情况,研究TRG的脱糖代谢机制。结果表明,优化的孵化时间为90 min,蛋白质量浓度为3.2 mg.mL-1,底物浓度为50μmol.L-1。TRG与大鼠各组织37℃孵化90 min后,其代谢物反式白藜芦醇在大鼠胃、十二指肠、空肠、回肠和肝脏提取物中的产率分别为(3.50±0.24)%,(65.7±5.94)%,(83.5±6.43)%,(77.6±6.26)%和(9.62±1.21)%,小肠组织对TRG的水解能力明显大于肝脏,提示大鼠肠黏膜在TRG脱糖代谢中起着非常重要的作用,该代谢途径可能由β-葡糖苷酶催化。

葡萄酒中抗癌活性成分反式白藜芦醇含量及其环境因素的影响

目的:利用高效液相色谱法测定葡萄酒中抗癌活性成分反式白藜芦醇的含量,并研究其含量的环境影响因素。方法:采用高效液相色谱法,使用ZORBAX C_(18)色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为30%乙腈水溶液;流速为1 ml/min;检测波长为306nm;柱温为室温;分离测定葡萄酒中反式白藜芦醇的含量,并研究光照、温度及密封状况对其含量的影响。结果:张裕干红葡萄酒中反式白藜芦醇的含量为(1.01±0.03)mg/L,长城干红解百纳中反式白藜芦醇的含量为(2.36±0.02)mg/L。阳光照射、温度升高及密封状况差均会导致反式白藜芦醇含量下降。结论:不同品牌的葡萄酒中反式白藜芦醇含量相差较大,且应在低温、避光和密封的条件下贮存葡萄酒。

反式白藜芦醇苷在大鼠体内的药物动力学

目的建立反相高效液相色谱法测定大鼠灌胃后血浆中反式白藜芦醇苷的浓度。方法采用色谱柱Hypersil BDS C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为乙腈-1％冰醋酸溶液（22：78，V／V）；流速0．8ml／min；柱温25℃；检测波长306nm。结果线性范围0．012625-2．525μg／ml，血浆标准曲线为R=4．264995＋17．5689C，相关系数0.9998，日内、日间精密度均小于9％。方法回收率为95．0％～103.0％。根据大鼠灌胃给药50，100，200mg／kg后测得的血药浓度，用DAS 1．0软件处理后求得的反式白藜芦醇苷的主要药动学参数：AUC（0-2．5）分别为2．637，0．925，0．617mg／（h·L），Vβ分别为89．490，79．717；31．253L/kg，CL（s）分别为54．915，95．661，73.631L／（h·kg）。结论建立了白藜芦醇苷血药浓度的HPLC测定方法，阐明了白藜芦醇苷的药代动力学特征。方法专属性高，操作简便，结果准确。

醇提法提取酿酒葡萄皮渣中反式白藜芦醇的研究

采用醇提法对酿酒葡萄皮渣中反式白藜芦醇的最佳提取工艺进行研究。通过单因素和正交实验优化提取条件,高效液相色谱法测定酿酒葡萄皮渣中反式白藜芦醇的含量。结果表明:最佳提取工艺为乙醇浓度80%,温度60℃,料液比1∶20,提取时间5h;各因素的影响顺序依次为料液比、乙醇浓度、提取时间。优选结果经验证实验,获得较高得率为94·2μg/g。

宁夏干红葡萄酒中反式白藜芦醇的含量测定

以宁夏三大品牌干红葡萄酒为研究对象,采用高效液相色谱法对其中的反式白藜芦醇含量进行了测定,其中,对提取条件和色谱条件进行了优化.结果表明:该方法的最低检出限为0.015mg/L,定量限为0.03mg/L;在0.03mg/L^300 mg/L浓度范围内线性良好,线性方程为y=1.1161x+0.0137,R^2=0.9996;重复性较好,标品的RSD为0.23%,样品的RSD为0.18%;准确度较高,加标回收率范围在92.3%~97.1%之间;研究表明反式白藜芦醇的含量与酒的品牌、葡萄品种有较大的关系,供试样品中反式白藜芦醇含量在1.97mg/L^3.70mg/L之间.

蛇龙珠葡萄不同组织器官及其愈伤组织反式白藜芦醇含量的比较研究

以酿酒葡萄品种蛇龙珠不同组织器官为材料,探讨了组织培养条件下不同器官合成反式白藜芦醇的能力。结果表明,4种外植体中反式白藜芦醇含量依次为:种子>外果皮>叶片>茎段,差异显著,在愈伤组织条件下反式白藜芦醇含量无显著差异;在愈伤组织1个继代周期内,反式白藜芦醇的含量也呈动态变化,且反式白藜芦醇含量积累和愈伤组织的生长有一定的相关性。

葡萄汁中抗肿瘤成分反式白藜芦醇含量的测定及其影响因素

目的:利用高效液相色谱法(HPLC)测定葡萄汁中抗癌成分反式白藜芦醇的含量,并研究其环境影响因素。方法:选取ZORBAX-C18(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱;流动相:70%水-30%乙腈;波长:306nm;流速:1ml/min;进样量:20μl,葡萄汁经滤膜过滤后直接进样测定其中的反式白藜芦醇含量;并采用相同方法研究光照、温度及密封状况对其含量的影响。结果:淳果篮浓缩紫葡萄汁中反式白藜芦醇的含量为(1.64±0.07mg/l),汇源百分百的含量为(0.25±0.01mg/l),统一葡萄多中未检测到反式白藜芦醇。另外,阳光照射、升高温度、密封状况差都会导致反式白藜芦醇含量下降。结论:不同品牌的葡萄汁中反式白藜芦醇含量相差较大;低温避光密封条件下可减少葡萄汁中反式白藜芦醇的损失。

虎杖白藜芦醇的提取及抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性的研究

该研究以虎杖白藜芦醇提取率为考察指标,通过单因素试验及正交试验方法确定白藜芦醇的最佳提取工艺,并对其体外抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性进行了考察。试验结果表明,最优提取工艺为:乙醇体积分数为60%,料液比为1∶20,微波提取参数为50℃、700 W、700s。在该提取工艺下,虎杖白藜芦醇提取率为2.14%。体外抑制α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶活性表明,白藜芦醇对两者都有较好的抑制作用,抑制率分别为69.42%和74.39%。

产β-葡萄糖苷酶细菌的筛选及转化白藜芦醇的研究

白藜芦醇具有抗癌、抗氧化等八大功效,在医药、化妆品等领域应用广泛。为获得分泌β-葡萄糖苷酶的细菌菌株,并实现其对虎杖苷的有效转化。通过栀子苷平板初筛、虎杖苷摇瓶复筛,筛选得到一株能够分泌β-葡萄糖苷酶,转化虎杖苷生成白藜芦醇的菌株,并利用16S r DNA序列对筛选得到的菌株进行鉴定,鉴定为沙福芽孢杆菌(Bacillus safensis),命名为CGMCC13129,该菌株在37℃,接种量为7%,底物虎杖苷浓度为0.1%,p H为7,转化8 h的条件下,对底物虎杖苷的转化率可达90%以上,利用HPLC、HPLC-MS、1H-NMR等手段检测转化产物为白藜芦醇,经甲醇萃取一次,纯度高达99.3%。

原位吸附提高葡萄悬浮培养中反式白藜芦醇产量的研究

[目的]研究原位吸附对葡萄悬浮培养体系生长和生产的影响。[方法]考察5种常用吸附剂对葡萄细胞生长及芪类和花色苷生产的影响。并对筛选出的HP2MGL和XAD-7的最佳添加浓度进行了研究。[结果]在添加浓度为100 g/L的XAD-7和HP2MGL的处理组中反式白藜芦醇的产量最高,在第7天达到251.4和258.8 mg/L,将白藜芦醇苷和白藜芦醇的产量换算成总芪产量(mmol/L),结果显示,添加XAD-7和HP2MGL后,在第7天芪类产量达到最大,分别为1.4和1.5 mmol/L,比对照处理的芪类产量高27%。在筛选出XAD-7和HP2MGL后,又考察了添加不同浓度XAD-7和HP2MGL对葡萄细胞生长、花青素和芪类生产的影响。结果表明最佳优化结果为添加200 g/L的HP2MGL,此时,体系中反式白藜芦醇在第7天的产量为568 mg/L。[结论]200 g/L HP2MGL大孔树脂可以显著促进葡萄悬浮培养细胞体系中反式白藜芦醇产量。

反式白藜芦醇及反式白藜芦醇苷对大鼠肝微粒体蛋白质及细胞色素P450的影响

目的:研究反式白藜芦醇及反式白藜芦醇苷对大鼠肝质量、肝微粒体蛋白质及细胞色素P450的影响。方法:大鼠分为空白对照组、反式白藜芦醇组及反式白藜芦醇苷组,分别连续给予等摩尔量的反式白藜芦醇、反式白藜芦醇苷(116.69、200 mg/(kg.d)),连续灌胃给药7 d后,分光光度法测定大鼠肝质量、肝微粒体蛋白质浓度及细胞色素P450质量分数,氨基比林-N-脱甲基酶、红霉素脱甲基酶和7-乙氧基-3-异吩哐恶唑酮脱烃酶的活性。结果:反式白藜芦醇组及反式白藜芦醇苷组大鼠肝质量、肝微粒体蛋白浓度与空白对照组比无统计学意义;而2个剂量组大鼠肝微粒体中细胞色素P450、氨基比林-N-脱甲基酶、红霉素-N-脱甲基酶和7-乙氧基-3-异吩哐恶唑酮脱烃酶的活性与空白对照组比有统计学意义(P<0.05),对细胞色素P450酶有抑制作用,但剂量组间无统计学意义。结论:反式白藜芦醇与反式白藜芦醇苷可引起肝药酶对某些药物代谢的改变。

白藜芦醇对α-葡萄糖苷酶的抑制动力学及抑制机制

白藜芦醇因具有广泛的生物活性而备受重视,有报道称白藜芦醇有降血糖的功效。α-葡萄糖苷酶抑制剂能够降低血糖含量,有效防治Ⅱ型糖尿病。因此,为了确定白藜芦醇的降血糖机制,研究白藜芦醇与α-葡萄糖苷酶活性的关系,本研究采用分光光度法测定α-葡萄糖苷酶活力,采用双倒数作图法研究白藜芦醇的酶抑制动力学,并采用对接模拟方法对白藜芦醇与α-葡萄糖苷酶的结合模式进行探讨。结果表明:白藜芦醇非竞争性地抑制α-葡萄糖苷酶活性,且有较强的抑制作用,半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)为5.047μmol/L,抑制常数为5.743μmol/L,明显强于阳性对照阿卡波糖(IC50=632.6μmol/L);对接模拟结果表明其与α-葡萄糖苷酶有多种可能的结合模式,且都不影响阿卡波糖与α-葡萄糖苷酶的结合。因此,白藜芦醇有被开发为降糖药物的潜力,也可作为膳食补充剂发挥一定的降血糖功效。

薄层层析-紫外分光光度法测定葡萄果皮中白藜芦醇及白藜芦醇苷

建立了葡萄果皮中反式白藜芦醇及反式白藜芦醇苷含量的薄层层析-紫外分光光度测定法。以甲醇提取目标组分,以高效硅胶GF254为固定相,甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸(5∶4∶1)为展开剂,对反式白藜芦醇及反式白藜芦醇苷进行分离纯化,并用紫外分光光度法进行定量,波长为306nm。结果表明,该方法测定反式白藜芦醇及反式白藜芦醇苷含量的线性关系良好,相关系数为0.9997;平均回收率为98.12%、97.23%;方法的精密度较高。并用该方法测定了酿酒红葡萄品种蛇龙珠不同生长时期的反式白藜芦醇和反式白藜芦醇苷含量。

反式白藜芦醇热稳定性与光致异构化的高效液相色谱和液相色谱-电喷雾离子化质谱研究

应用高效液相色谱(HPLC)及液相色谱 电喷雾离子化质谱(LC ESI MS)方法对反式白藜芦醇的长期热稳定性及光致顺反异构化反应进行了研究。色谱条件为:采用Hypersil ODS色谱柱分离,流动相为甲醇 0 05%三氟乙酸水溶液(体积比为60∶40)(用于HPLC分析)及甲醇 5mmol/L甲酸铵水溶液(含0 1%甲酸)(体积比为60∶40)(用于LC ESI MS分析),检测波长300nm,进样量20μL(HPLC)或10μL(LC ESI MS);质谱检测中设定为负离子模式。在4～40℃条件下的热稳定性研究表明,反式白藜芦醇溶液在冷藏条件下避光保存600h后,浓度没有明显下降。通过测定254及365nm紫外光照条件下不同光照时间各个化合物浓度的变化,研究了反式白藜芦醇的异构化和其余几个副反应的机理。根据实验结果推测,白藜芦醇的顺反异构化是通过一个p 几何状态完成的,而另外几个副反应则是通过自由基历程完成的。

基于微流控芯片的高糖对模式生物线虫寿命影响及白藜芦醇苷保护性作用考察

线虫是一种经典的模式生物,在分子和基因水平上与人类具有高度同源性,目前已被广泛应用于生命科学领域。本文以微流控芯片为平台,以模式生物秀丽隐杆线虫为研究对象,在单个线虫操作的水平上探讨高糖对线虫寿命和氧化应激的影响,同时考察了白藜芦醇苷对高糖引起的线虫寿命及应激响应变化的保护性作用。结果表明,高糖会缩短线虫寿命并增强线虫的氧化应激蛋白GST-4表达;而白藜芦醇苷会显著减弱高糖诱导的线虫应激反应并延长线虫寿命,表明白藜芦醇苷对高糖诱发的线虫应激反应具有保护性作用。本文所建立的单个线虫操控的微流控芯片可以为动物水平上治疗糖尿病的相关药物评价提供一种新的潜在平台。

反式白藜芦醇对Aβ_(25-35)致痴大鼠海马诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的采用双侧海马注射Aβ25-35建模,观察反式白藜芦醇(TR)对模型大鼠海马诱导型一氧化氮合酶(i NOS)mRNA表达的影响。方法大鼠经莫式水迷宫(MWM)训练合格后,随机分为5组:假手术组,模型组,TR高、中、低剂量组。在大鼠海马内注射Aβ25-35制模,制模后用TR干预。采用逆转录实时定量荧光聚合酶链反应法(RT-PCR)检测5组大鼠海马i NOS mRNA表达。结果在MWM中模型组逃避潜伏期比TR高、中、低剂量组和假手术组明显延长,假手术组,模型组,TR高、中、低剂量组i NOS mRNA表达分别为0.23±0.90、1.23±0.91、0.34±0.18、0.48±0.12、0.87±0.49。原位末端标记(TUNEL)法检测假手术组,模型组,TR高、中、低剂量组间海马凋亡细胞百分比(术后第11天)分别为:(3.23±0.52)%、(21.32±5.02)%、(5.72±1.56)%、(7.21±1.22)%、(10.93±3.25)%;术后第17天分别为:(3.21±0.29)%、(16.31±4.27)%、(5.13±2.00)%、(7.12±1.78)%、(9.84±2.66)%。各组间凋亡细胞百分比差异有统计学意义(P<0.01)。结论 TR可减轻Aβ25-35诱导的大鼠记忆减退,其机制可能部分与下调海马i NOS mRNA表达从而减少海马细胞凋亡有关。

反式白藜芦醇对Aβ_(25-35)损伤大鼠海马旁回caspase-8、caspase-9的影响

目的观察反式白藜芦醇(TR)对β-淀粉样肽(Aβ25-35)损伤大鼠的海马旁回的作用。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、TR高、低剂量组、多奈哌齐对照组。在大鼠海马内注射Aβ25-35后分别灌胃给相应药物10 d,采用TUNEL法检测5组大鼠海马细胞及周围皮质凋亡情况;采用real time RT-PCR法检测5组大鼠海马及皮质caspase-8、caspase-9 mRNA表达。结果大鼠海马及周边脑组织细胞凋亡情况,模型组与其他各组差异显著(P<0.01),说明造模成功。TR对caspases-8、caspase-9表达水平的下调非常显著(P<0.01),低剂量组与高剂量组之间也有统计学差异(P<0.05)。结论 TR对损伤的大鼠海马周围皮层神经元有保护作用,其机制可能部分与下调caspase-8、caspase-9 mRNA表达有关。

药物转运体在反式白藜芦醇肠道吸收中的作用

目的:通过体内和体外模型研究多药耐药相关蛋白(Mrp-2)外排底物溴磺肽钠对反式白藜芦醇(trans-resvera-trol,TR)肠道吸收的影响,并对转运体在TR肠道吸收中的作用进行研究。方法:应用离体肠外翻模型,测定不同时间点时肠囊内TR的浓度,寻找TR在肠中吸收的最佳部位;观察多种P-糖蛋白及Mrp-2抑制剂对TR吸收的影响;根据离体肠外翻吸收试验结果,选择溴磺肽钠作为促吸收剂,研究不同给药途径的溴磺肽钠对TR在大鼠体内药动学行为的影响。结果:TR在不同肠段均具有很高的通透性(Papp>1×10-6cm/s),回肠是TR的最佳吸收部位。Mrp-2外排抑制剂丙璜舒及底物溴磺肽钠都能够显著增加TR在回肠部位的吸收;P-糖蛋白及Mrp-2共同底物甲氨碟呤也能够增加TR的肠吸收;而P-糖蛋白抑制剂地高辛和维拉帕米无此作用。整体动物实验结果,发现预先给大鼠灌胃溴磺肽钠,可以显著提高TR的口服吸收,TR的生物利用度提高4倍;而溴磺肽钠通过尾静脉注射给药无此作用。结论:Mrp-2参与TR的肠道外排过程,P-糖蛋白对其外排无影响。溴磺肽钠通过灌胃给药途径可增加TR的吸收及生物利用度。

反式白藜芦醇联合胡椒碱对慢性应激大鼠的抗抑郁作用及其下丘脑相关机制

目的探讨反式白藜芦醇(trans-REV)合用胡椒碱后的抗抑郁作用是否涉及下丘脑5-羟色胺(5-HT)系统及下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴。方法建立慢性不可预知性应激模型,同时每天ip给予胡椒碱2.5 mg.kg-1+ig给予trans-REV 2.5,5,10,20和40 mg.kg-1。开野和穿梭箱实验验证药物的抗抑郁作用;高效液相-电化学法检测下丘脑中5-HT及其代谢产物水平,荧光分光光度法检测单胺氧化酶(MAO)活性;计算肾上腺指数;酶联免疫法检测血清皮质酮水平。结果胡椒碱合用trans-REV 20和40 mg.kg-1可改善应激大鼠在开野实验中爬格数和探究次数的降低及理毛次数和粪便粒数的增加;胡椒碱合用trans-REV10,20和40 mg.kg-1显著降低大鼠在穿梭箱中逃避失败次数;胡椒碱合用trans-REV 40 mg.kg-1显著逆转下丘脑中5-HT等递质水平的下降及MAO活性的相对增高;此外,trans-REV合用胡椒碱后可抑制肾上腺指数及血清皮质酮含量的升高。结论 trans-REV合用胡椒碱可拮抗慢性应激引起的抑郁样行为,其机制可能与下丘脑中5-HT系统和HPA轴功能改变有关。