乙脑病毒嵌套式RT-PCR检测方法的建立及初步应用

目的 建立适用于检测人用猪源性生物制品中外源性乙脑病毒(JEV)的嵌套式RT- PCR方法。方法 根据已公布的JEV序列(GenBank登录号为M5 5 5 0 6 ) ,设计合成两对引物,对JEV感染的乳鼠脑组织和培养JEV的BHK 2 1细胞抽提RNA进行RT PCR和RT nestedPCR ,将PCR产物进行了克隆测序;同时对猪细小病毒(PPV)、猴空泡病毒4 0 (SV4 0 )及正常乳鼠脑组织、正常BHK 2 1细胞、PK15细胞、BSC 1细胞提取核酸进行PCR ,并对2 10份临床样品进行了检测。结果 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测,JEV感染的乳鼠脑组织和培养JEV的BHK 2 1细胞均扩增出10 15bp和6 2 2bp目的基因片段,而PPV、SV4 0及未感染JEV的乳鼠脑组织、正常BHK 2 1细胞、PK15细胞、BSC 1细胞均未见特异性扩增条带,2 10份猪组织样品中未检出阳性样品。RT nestedPCR检测的最低限度为10PFU病毒。从样品核酸的提取到PCR扩增及检测结果的报告可在8小时内完成。结论 本研究建立的RT NestedPCR方法具有快速、特异、敏感、可靠的特点,可用于人用猪源性生物制品中外源性JEV的污染检测。

NY-ESO-1基因在人食管癌中的表达及其基因克隆

背景与目的:NY-ESO-1是从食管癌cDNA文库中筛选到的肿瘤抗原,但是该基因在食管癌组织中的表达情况尚未见报道。本文研究NY-ESO-1基因在食管癌中的表达率,以便于确定食管癌患者是否可以使用以NY-ESO-1抗原为基础的疫苗治疗。方法:采用RT-PCR方法检测了NY-ESO-1基因在30例食管癌组织和相应癌旁正常组织中的表达;采用分子克隆的方法从食管癌组织中克隆了NY-ESO-1cDNA。结果:NY-ESO-1基因在食管癌组织中的表达率为50%(15/30),在30例相应癌旁正常组织中未见表达;克隆的NY-ESO-1cDNA序列与GenBank报道一致。结论:NY-ESO-1基因在食管癌中高频率表达,NY-ESO-1抗原可以被具有HLA-I类分子限制性CTL识别。

癌胚抗原信使核糖核酸在不同类型肺癌组织中的表达

目的 比较不同类型肺癌组织表达癌胚抗原信使核糖核酸 (CEAmRNA)的差别 ,评估检测组织标本CEAmRNA指标在诊断与鉴别诊断肺癌方面的应用价值。方法 选取肺癌组织为研究对象 ,非癌性疾病的肺病变组织为对照 ,应用反转录套式聚合酶链反应 (RT NP PCR)技术检测CEAmRNA。结果 肺癌组总体表达CEAmRNA的阳性结果为 6 6 / 76 (86 .8% ) ,其中 ,不同类型肺癌组织表达CEAmRNA的阳性结果分别为 :腺癌 2 2 / 2 5 (88.0 % )、鳞癌 19/ 2 2 (90 .5 % )、腺鳞癌 8/ 8(10 0 % )、小细胞癌 10 / 12 (83.3% )、大细胞未分化癌 7/ 9(77.8% )。对照组织有 2例阳性发现 (8.0 % )。结论 各类肺癌组织表达CEAmR NA的结果明显高于非肺癌组织 (P <0 .0 0 1) ,检测肺组织标本CEAmRNA指标对诊断肺癌具有较高的应用价值 (特异性为92 .0 %、敏感性为 86 .8% )。

补肾中药对去卵巢大鼠骨组织ER、OPG表达的促进作用

通过检测去卵巢大鼠给予补肾中药后腰椎内ERmRNA及OPGmRNA的表达 ,进一步探讨补肾中药防治骨质疏松的分子机制。将雌性 3月龄SD大鼠 4 8只 ,随机分为卵巢切除 +补肾中药防治 (HDP) ,卵巢切除 +雌激素 (倍美力 )防治 (ER) ,骨质疏松(卵巢切除 ) (OVX)及正常对照组 (SHAM) 4组 ,每组 12只。术后 12周处死大鼠 ,取L3 椎体 ,异硫氰酸胍一步法提取总RNA ,嵌套式反转录聚合酶链反应 (NRT PCR) ,扩增待检测各组ERmRNA及OPGmRNA的表达。同时取L4椎体 ,行骨组织形态计量学检测。结果显示HDP组ERmRNA及OPGmRNA阳性表达率分别为 75 .0 %和 6 6 .7% ;EP组ERmRNA及OPGmRNA阳性表达率均为 83.3% ;OVX组各例ERmRNA均无表达 ,2例OPGmRNA呈弱阳性表达 (阳性率为 16 .7% ) ;SHAM组呈ERmRNA及OPGmRNA阳性表达。χ2 检验 ,HDP组与ER组比较ERmRNA及OPGmRNA阳性表达率均无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;该两组与OVX组比较 ,ERmRNA及OPGmRNA阳性表达率均有高度显著性差异 (P <0 .0 1) ;而与SHAM组比较 ,HDP组ERmRNA ,ER组ERmRNA及OPGmRNA阳性表达率无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,但HDP组OPGmRNA阳性表达率有显著性差异 (0 .0 1<P <0 .0 5 )。骨组织形态计量学检测 ,OVX组骨体积、骨小梁厚度及骨小梁数目均比SHAM组显著减少 ,而骨小梁?

检测组织标本癌胚抗原信使核糖核酸指标诊断胃癌

目的 :评估检测组织标本癌胚抗原信使核糖核酸 (CEA- m RNA)指标在诊断胃癌方面的应用价值。方法 :以胃癌组织和良性胃病组织为检测标本 ,应用反转录套式聚合酶链反应技术 (RT- NP- PCR)检测 CEA- m RNA。结果 :CEA- m RNA的检出率在 32份胃癌标本为 81 .2 % (2 6 /32 )、在 32份良性胃病标本为 1 2 .5 % (4 /32 ) ,两者检测结果的差别具有显著性 (P<0 .0 0 1 )。结论 :检测组织标本 CEA- m

拟南芥谷氨酰tRNA合成酶(AtGluRS)与受ABA调控基因的表达分析

通过对AtGluRS转基因植株的生理观察以及对ABA相关基因在转录水平的检测,发现ABA相关基因HB6,NCED3,LTI65的表达量受到GluRS的影响,揭示出GluRS对ABA信号通路的调控作用,并推测AtGluRS通过对ABA合成途径的调节,从而实现对信号通路的调控.

洛伐他汀对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞Ras/NF-?B通路的影响

目的:研究洛伐他汀对人高转移卵巢癌HO-8910PM细胞Ras/NF-κB信号通路的影响。方法:不同浓度洛伐他汀分别作用HO-8910PM细胞48 h后,采用反转录聚合酶链式扩增反应(RT-PCR)分别检测Ras、HIF-1α、NF-κB(P65)、Rho A和VEGF m RNA的表达;蛋白质印迹法(Western Blot)分别检测p21Ras、ERK2、I-κBα、NF-κB(p65)、HIF-1α和VEGF的蛋白水平。结果:洛伐他汀能使NF-κB(p65)、VEGF和RHo A m RNA表达水平下降,影响Ras蛋白在胞浆和胞膜之间的分布,下调HO-8910PM细胞的ERK2、HIF-1α、VEGF蛋白表达水平;还可以使胞浆中NF-κB(p65)上调、I-κBα下调,下调核内NF-κB(p65)水平和上调I-κBα。结论:洛伐他汀抗卵巢癌的分子机制主要干扰Ras蛋白在细胞膜上的锚定,抑制Ras/NF-κB信号通路密切相关。

两种不同基因型NS3抗原在HCV感染者血清学诊断中的应用

目的研究两种不同基因型NS3抗原在HCV感染者血清学诊断中的应用价值。方法分别用两种不同基因型NS3单片段抗原、两种单片段抗原的混合物(MIX)作为包被抗原,对血清标本进行ELISA测定;应用反转录套式聚合酶链反应(RT-nPCR)检测血清中HCV RNA,数据以χ2检验。结果 85份抗-HCV阳性血清以不同基因型HCV NS3单片段抗原检测,阳性检出分别为52份(Ⅰ型)和50份(Ⅵ型),χ2=0.06,P>0.05;100份健康成人体检血清以此两种抗原检测均为阴性;90份抗-HCV阳性血清经MIX抗原检测,阳性检出为65份;51份抗-HCV阳性血清经RT-nPCR检测,29份阳性。结论 HCV不同基因型NS3编码区抗原片段有不同的抗原反应性,在HCV感染者的血清学诊断中将不同基因型NS3抗原混合使用可能是更好的选择。