常温常压下反式茴香脑-对茴香醛超额焓的测定及关联

针对八角茴香油主要组分部分热力学数据缺失,常压下利用C80型塞塔拉姆微量量热仪测定了反式茴香脑(1)-对茴香醛(2)二元体系在25、30、35℃的超额焓。实验数据采用Redlich-Kister方程式进行关联,相对偏差较小。二元体系的超额焓在全浓度范围内均为正值,其最大值在摩尔分数x_(1)=0.5附近,温度对超额焓有一定的影响,超额焓随温度的升高而降低。

顶空气相色谱法测定饲料中的反式茴香脑

研究建立了顶空气相色谱法测定饲料中的反式茴香脑。该方法样品直接在顶空进样器中处理,减少挥发性物质损失的同时不需要用到溶剂,优化了顶空的加热温度和平衡时间。本实验方法的反式茴香脑在0.05~20mg/mL范围内呈线性,线性回归方程为y=2158.7x-28.288、相关系数0.9996及检出限(3S/N)0.0003mg/mL。而且实验抽取了样品的上层气体,样品中的液体和固体杂质不进入仪器,对色谱柱和FID检测器起到了很好的保护作用。本实验反式茴香脑的平均回收率在85~109%之间,RSD均小于3%。用顶空气相色谱法测定反式茴香脑实验稳定,分析准确、方便、重复性高,且实现了样品分析半自动化。

基于偏最小二乘法的近红外光谱测定八角中反式茴香脑和莽草酸

采用偏最小二乘法(PLS)建立八角中反式茴香脑和莽草酸含量的近红外光谱定量分析模型。利用近红外光谱技术采集八角粉末的近红外光谱图(NIR),以高效液相色谱法测定的八角中反式茴香脑和莽草酸质量分数作为参考值,经过光谱处理软件将近红外光谱图与质量分数参考值进行关联,反式茴香脑的定量分析模型采用二阶导数作为预处理方法,以7 502~5 446.2和4 601.5~4 246.7 cm^(-1)为波数范围,维数为10;莽草酸的定量分析模型采用一阶导数加直线减法作为预处理方法,以7 502~6 098.1和5 450.1~4 597.6 cm^(-1)为波数范围,维数为8。结果表明:建立的八角中反式茴香脑和莽草酸含量的快速无损定量检测模型的决定系数(R^(2))分别为90.86%和93.13%,校正集的内部交叉检验均方根误差(RMSECV)分别为0.158和0.285,验证集的均方根误差(RMSRP)分别是0.068 7和0.171,配对T检验P值分别为0.761和0.194,均大于0.05,测量值与参考值偏差较小,建立的模型能较准确地测定八角中反式茴香脑和莽草酸的含量。

不同产地小茴香挥发油成分分析及反式茴香脑含量的测定

为分析不同产地小茴香挥发油成分及反式茴香脑含量,文章利用气相色谱-质谱联用法(GC/MS)分析比较了湖北、新疆、内蒙古、四川、江西和广西不同产地的小茴香挥发油成分组成,并采用气相色谱法(GC)测定其中反式茴香脑含量。结果表明:不同产地小茴香挥发油含量在1.29~2.24mL/100g之间,分析其化学成分发现反式茴香脑的含量相对较高,但差异较大。反式茴香脑浓度在12.5~200μL/mL范围内与峰面积呈良好线性关系(R2=0.9999),检出限为0.015μL/mL,平均回收率为99.76%,峰面积的RSD值为0.50%(n=5)。

假单胞菌BT-13生物催化反式茴脑合成茴香酸的条件优化

开展了假单胞菌BT-13在改良M9培养基上转化反式茴脑合成茴香酸的研究,考察了培养基配方、底物加入量、摇床转速、温度和培养基初始pH值对茴香酸生成的影响。结果表明:在改良M9培养基中添加碳源的浓度高于1 g·L-1时,明显抑制反式茴脑的转化。生成茴香酸的优化条件是,培养基配方为麦芽糖0.5 g·L-1,NH4Cl 0.5 g·L-1,FeSO4.7H2O 0.01 g·L-1,MgSO4.7H2O 2.0 g·L-1,NaCl 0.5 g·L-1,Na2HPO4 6.8 g·L-1,KH2PO4 3.0 g·L-1,CaCl2 0.02 g·L-1;反式茴脑加入量为9.83 g·L-1,摇床转速为200 r·min-1,转化温度为30℃,转化培养基的初始pH为7.0。在优化条件下,茴香酸积累的浓度为3.49 g·L-1,摩尔转化率为34.6%,比优化前结果提高了92.8%。假单胞菌BT-13转化反式茴脑的主要产物为茴香酸,还含有茴香醛、茴香二醇或茴脑环氧化物等中间产物。利用5 L机械搅拌发酵罐进行放大试验,茴香酸浓度最高可达3.57 g·L-1,摩尔转化率为36.1%。

反相高效液相色谱法同时测定生物转化液中的反式茴脑、茴香醛和茴香酸

建立了同时测定生物转化液中反式茴脑、茴香醛和茴香酸3种化合物的反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析方法。采用Kromasil-100A C18色谱柱(250 mm×4.6 mm×5μm),流动相为V(乙腈)∶V(水)∶V(冰醋酸)=70∶30∶0.02,等度洗脱,流速0.8 mL/min,检测波长为260 nm,进样量5μL,柱温室温,15 min内3种物质得到了较好的分离。该方法中各标准品质量浓度与色谱峰面积线性关系良好,具有较好的精确度和重现性。反式茴脑、茴香醛和茴香酸线性范围分别为4.080～2.652×102 mg/L(R2=0.9999)、4.580～64.12 mg/L(R2=0.9997)、3.780～52.92 mg/L(R2=0.9993);平均加标回收率分别为100.34%、101.18%、100.31%;相对标准偏差RSD分别为0.92%、1.75%、0.53%。用于实际样品测定时,RSD均小于1.1%。该方法简便、快速、准确,能同时定量分析反式茴脑生物转化液等复杂体系中的反式茴脑、茴香醛和茴香酸。

反式茴脑生物合成茴香酸体系紫外分光光度法的测定方法研究

根据反式茴脑和茴香酸及其混合物的紫外光谱特性,利用等吸收点建立了一种监测生物合成过程的紫外定量分析方法。混合物在250.0 nm处的吸光度与其总摩尔浓度的标准曲线A250.0=16.931Ct+0.012 8,线性范围为0.01～0.06 mmol/L;当总摩尔浓度为0.04 mmol/L时,混合物在268.5 nm处的吸光度与反式茴脑的摩尔分数的标准曲线为A268.5=0.342 7X+0.311 2。据某样品稀释前后的A250.0、A'268.5、A'250.0和A''268.5及光谱模拟得到该样品浓度为0.04 mmol/L的A268.5=(0.675 6-A'250.0)(A'268.5-A''268.5)/(A250.0-A'250.0)+A''268.5。反式茴脑和茴香酸的平均回收率分别为98.40%和96.47%,相对标准偏差分别为0.68%和0.80%,与高效液相色谱法比较的t值均小于结果的临界值1.724 7(α=0.05),表明该方法与高效液相色谱法无显著性差异,准确可靠,可为紫外分光光度法监测生物合成过程提供参考。

高效液相色谱法测定广西不同产地八角茴香中反式茴香脑的含量

[目的]建立高效液相色谱法测定广西不同产地八角茴香中反式茴香脑的含量。[方法]采用Phenomenex C18色谱柱（4.6mm×150mm,5μm）,流动相为甲醇-水,流速为1.0ml/min,检测波长为254nm,柱温为30℃。[结果]反式茴香脑浓度在0.0885-0.885mg/ml范围内线性关系良好,平均回收率为99.50%,RSD为2.51%（n=6）。[结论]HPLC方法简单,准确,重复性好,可用于测定八角茴香中反式茴香脑的含量。

假单胞菌Pseudomonas sp.AT39反式茴脑氧化酶基因(tao)对产茴香酸的影响

tao基因编码反式茴脑氧化酶,参与反式茴脑的降解过程。通过自杀质粒pK18mob及广宿主表达质粒pBBR1MCS-5分别构建突变菌AT39/btao、重组菌AT39/tao-pBBR1MCS5及互补菌HAT39/btao。对构建的菌株进行TAO酶比活力测定,结果发现重组菌AT39/tao-pBBR1MCS5的酶比活力显著增加,比野生菌AT39提升了35.23%。茴香酸转化量检测结果显示,重组菌AT39/tao-pBBR1MCS5代谢生成的茴香酸产量为3.55 g/L,同比野生菌AT39增加了约4倍。结果为下一步利用和改造tao基因构建工程菌生产茴香酸奠定了基础。

GC法测定八角枝叶中反式茴香脑的含量

目的:建立八角茴香枝叶中反式茴香脑的含量测定方法。方法:采用气相色谱法,HP-INNOWax毛细管柱(0.32mm×30m,0.50μm),分流比10∶1程序升温,FID检测器,环己酮为内标物,以内标法定量。结果:反式茴香脑在0.2037～2.0367μg范围内,峰面积与其浓度呈良好线性关系(r=0.9994),平均回收率为98.67%,RSD为1.38%(n=6)。结论:该方法简便、准确、重复性好,可作为八角枝叶的质量控制方法。

一株转化反式茴香脑产茴香酸菌株的筛选鉴定

经过梯度驯化及富集筛选,从环境样品中分离获得348株能以反式茴香脑为唯一碳源的菌株。通过薄层层析法和反相高效液相法对转化液中的残余反式茴香脑和茴香酸进行定量分析,最后得到一株对反式茴香脑耐受能力和茴香酸产量都较高菌株WGBF9。在含体积分数为10%的反式茴香脑的种子培养基中,菌体的生物量为空白对照的37.42%,在含体积分数为20%反式茴香脑时,生物量也能达到空白对照的26.57%,说明WGBF9对反式茴香脑具有很高的耐受能力。将该菌株接种到复筛培养基中,30℃、转速200r/min的条件下发酵36h,茴香酸的摩尔生成率为17.9%。经形态学观察、生理生化等实验分析,初步鉴定WGBF9为恶臭假单胞菌A类变种(Pseudomonas putida biotype A)中的一个亚种。

饲粮中添加反式茴香脑对肉鸡体内外抗氧化能力的影响

本试验旨在探究反式茴香脑(AN)对肉鸡体内外抗氧化能力的影响。体外试验:选用强抗氧化剂二丁基羟基甲苯(BHT)作为阳性对照,采用1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)自由基清除法、2,2′-联氮双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)自由基清除法、羟基自由基清除法和铁离子还原能力(FRAP)法系统评价AN的抗氧化能力,AN纯品的抗氧化能力表示为半抑制浓度(IC50)。体内试验:选取1日龄爱拔益加(AA)肉仔鸡256只,随机分为4组,每组8个重复,每个重复8只鸡。4个组在基础饲粮中分别添加0、200、400和600 mg/kg的AN(分别为AN 0、AN 200、AN 400和AN 600组)。试验期共42 d,分为生长前期(1~21日龄)和生长后期(22~42日龄)。结果表明:1)AN清除DPPH、ABTS和羟自由基的IC50分别为16.26、6.98和7.82 mg/mL,对三价铁离子的还原能力较弱。2)与AN 0组相比,AN 400组22~42日龄平均日采食量(ADFI)显著提高(P<0.05),AN 200组1~42日龄ADFI显著提高(P<0.05);AN对平均日增重(ADG)和料重比(F/G)无显著影响(P>0.05)。21日龄抗氧化能力,与AN 0组相比,AN 200、AN 400和AN 600组血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性均显著升高(P<0.05),AN400和AN 600组血清丙二醛(MDA)含量显著降低(P <0.05);AN 600组肝脏过氧化氢酶(CAT)活性显著升高(P<0.05),AN 200和AN 400组肝脏T-SOD活性显著升高(P<0.05);AN200、AN 400和AN 600组肝脏CAT的基因相对表达量显著提高(P<0.05),AN 400和AN 600组肝脏超氧化物歧化酶1(SOD1)的基因相对表达量显著升高(P<0.05),AN 600组肝脏血红素加氧酶-1(HO-1)的基因相对表达量显著升高(P<0.05)。42日龄抗氧化能力,与AN 0组相比,AN 400和AN 600组血清总抗氧化能力(T-AOC)显著升高(P<0.05);AN 200和AN 400组肝脏CAT活性显著升高(P<0.05),AN 200组胸肌谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、T-AOC显著提高(P<0.05);AN 200组胸肌谷胱甘肽过氧化酶1(GPx1)的基因相对表达量显著提高(P<0.05)。综上所述,AN有一定的清除DPPH、ABTS和羟自由基的作用,但总体抗氧化效果弱于强抗氧化剂BHT。AN可提高AA肉鸡血清、肝脏和胸肌抗氧化能力,减少血清和肝脏MDA的生成。本试验条件下,AN作为抗氧化剂在AA肉鸡饲粮中的适宜添加水平为400 mg/kg。

抗苹果轮纹病菌植物筛选及反式茴香脑抑菌机理

[目的]筛选抑制苹果轮纹病菌的杀菌植物,明确反式茴香脑作用苹果轮纹病菌的初步机理,为开发新型安全高效的植物源苹果轮纹病菌防治剂提供思路。[方法]采用生长速率法测定17种植物提取物和反式茴香脑对苹果轮纹病菌的抑制效果,同时使用分光光度法研究该病菌菌丝体被反式茴香脑作用后体内的可溶性蛋白、丙酮酸、还原糖含量。[结果]当供试浓度为2 g·L-1时,八角茴香、博落回提取物对苹果轮纹病菌具有最强的离体抑制活性,处理后96 h的抑制率达到100%。分别对八角茴香和博落回提取物进行毒力测定,八角茴香提取物EC 50为0.2650 g·L-1,小于博落回的提取物的EC 50值。八角茴香提取物中的主要抑菌成分为反式茴香脑,反式茴香脑供试浓度为1 g·L-1,处理后96 h离体抑制率为100%。同时在不同浓度反式茴香脑处理下,菌丝体内可溶性蛋白、丙酮酸、还原糖的含量随着其浓度升高而持续降低。表明在离体培养条件下八角茴香提取物及反式茴香脑对苹果轮纹病菌有明显的抑制作用,并对菌丝体物质代谢产生显著影响。[结论]该研究可为开发以反式茴香脑为原材料的植物源杀菌剂以及病害绿色防控提供一定理论依据。

黄绿绿僵菌与反式茴香脑的相容性及其对菜青虫的联合毒力

为了明确植物次生代谢产物反式茴香脑与高毒力昆虫病原真菌黄绿绿僵菌Mf82菌株的相容性以及其对菜青虫的联合毒力,本文在室内评价了半致死浓度(LC_(50))反式茴香脑与黄绿绿僵菌Mf82不同浓度孢子悬浮液以不同体积比混合后对菌株生长的影响,并测定了菌药联合使用对2龄菜青虫的毒杀效果。结果表明,黄绿绿僵菌与反式茴香脑对菜青虫均有良好的毒杀活性;反式茴香脑LC_(50)剂量与黄绿绿僵菌Mf82混合对菌株的菌落生长有一定促进作用,两者以体积比5:5、4:6和3:7处理后明显促进菌丝生长,且随着反式茴香脑在混剂中所占比例增大促进作用增强,孢子萌发率也比两者以2:8和1:9混合后的孢子萌发率高;混剂对菜青虫的致死率随二者混合比例的不同而变化,其中反式茴香脑LC_(50)分别与孢子悬浮液(1.5×10^(4)~1.5×10^(8)孢子/mL)以体积比5:5、4:6和3:7混合处理试虫的死亡率高于两者以2:8和1:9混合处理的死亡率,共毒系数分别为287、108和83,表明具增效与相加作用;以体积比5:5、4:6和3:7混合处理的致死中时(LT_(50))也比单用黄绿绿僵菌的短。因此,在防治菜青虫时应选择相容性好、共毒系数高的混合比例,即5:5、4:6或3:7。黄绿绿僵菌和反式茴香脑联合应用对菜青虫的高毒力表明其具有开发成生物制剂用于对害虫进行高效安全绿色防控的潜力。

油浸法提取大、小茴香中反式茴香脑的研究

研究以大、小茴香为材料,食用菜籽油为媒介,采用热油浸提的方法制备大、小茴香油。制备的茴香油用甲醇萃取得到萃取液,以反式茴香脑为评价指标,经气相色谱测定反式茴香脑。通过单因素试验确定最佳浸提温度、浸提时间,得到大、小茴香中反式茴香脑的最佳浸提工艺条件分别为:物料比1∶2,浸提温度140℃,浸提50min;物料比1∶2,浸提温度140℃,浸提30min。在此条件下反式茴香脑浓度分别为24.56,2.07mg/mL。

反式-茴香脑对叠氮钠诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨反式-茴香脑对叠氮钠诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)损伤的保护作用及作用机制。方法将叠氮钠(9～54 mmol·L^(-1))与PC12细胞共同孵育,采用CCK-8法检测细胞存活率;倒置显微镜观察细胞形态;Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡;比色法测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果叠氮钠对PC12细胞的损伤呈剂量依赖性。反式-茴香脑与PC12细胞孵育48 h对细胞的存活率无影响;利用10、60μmol·L^(-1)反式-茴香脑预处理PC12细胞8 h,可明显对抗叠氮钠致神经细胞存活率下降,明显降低细胞LDH的漏出率和细胞MDA含量,明显提高细胞SOD活力。结论反式-茴香脑对叠氮钠诱导的PC12细胞损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧化酶活性有关。

小茴香中反式茴香脑的含量测定及其变化规律研究

[目的]构建基于超高效液相色谱法(UPLC)的小茴香中反式茴香脑的含量测定方法,系统研究了小茴香药材(生品)及其粉末中反式茴香脑随放置不同时间的含量变化规律。[方法]色谱柱ACQUITY UPLC^■BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm),以甲醇0.1%-甲酸水(55∶45)为流动相,检测波长为254 nm,流速为0.3 m L/min,柱温为40℃,样品箱温度5℃,进样量为2μL。按规定时间采集小茴香药材(生品)及其粉末在室温条件下放置不同时间的样本,分析系列样品中反式茴香脑的含量。[结果]小茴香中反式茴香脑含量测定方法学研究符合2015年版《中华人民共和国药典》中《药品质量标准分析方法验证指导原则》的相关要求;小茴香药材(生品)与盐制品中反式茴香脑含量差异较大,合格率较低;盐制品在炮制过程中反式茴香脑含量略有变化。在室温条件下小茴香药材(生品)中反式茴香脑的含量在规定放置时间内基本稳定;药材粉碎后反式茴香脑含量随放置时间延长不断下降。[结论]本方法样品前处理简便,重现性良好,分析速度快,结果准确可靠,可用于小茴香中反式茴香脑的含量测定及其变化规律研究。

HPLC法测定八角茴香中莽草酸和反式茴香脑含量

目的:建立同时测定八角茴香中莽草酸和反式茴香脑的方法。方法:采用HPLC法,以Waters Sunfire C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,以乙腈-0.05%磷酸为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 ml·min^(-1),检测波长为210 nm,柱温为30℃。结果:莽草酸在进样量为0.078~1.558μg范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为101.38%,RSD=1.67%(n=6);反式茴香脑在进样量为0.093~1.868μg范围内线性关系良好(r=0.999 7),平均回收率为99.02%,RSD=1.47%(n=6)。结论:该方法简便、准确、重复性好,可以用于八角茴香中莽草酸和反式茴香脑的含量测定。

毛细管气相色谱法测定复方甘草片中樟脑和反式茴香脑的含量

目的建立毛细管气相色谱法同时测定复方甘草片中樟脑和反式茴香脑的含量。方法采用Agilent DB-WAX毛细管柱(30m×0.53mm,1.0μm),FID检测器;进样口温度为:150℃,分流比1∶1,载气(氮气)流量:3.0mL.min-1,检测器温度:250℃;柱温采用程序升温:145℃维持6min,以10℃.min-1升温至185℃维持5min,采用外标法测定。结果在该色谱条件下,樟脑和反式茴香脑分别在0.01030～0.06178mg.mL-1、0.002157～0.01294mg.mL-1的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(r值分别为0.9990,0.9991);加样平均回收率分别为97.9%,98.2%(n=9,RSD分别为1.31%,1.53%)。结论该方法简便、准确,重现性好,可用于测定复方甘草片中樟脑和反式茴香脑含量的质量控制。

GC法测定三香散中桂皮醛、反式茴香脑含量

目的建立三香散中桂皮醛、反式茴香脑的含量测定方法。方法经水蒸气蒸馏法提取药物中的挥发性成分,采用气相色谱法(GC)测定三香散中桂皮醛、反式茴香脑的含量。色谱柱为Agilent DB-WAX色谱柱(30 m×0.320 mm,0.25μm),程序升温,进样口温度250℃,FID检测器温度300℃,流速30 mL/min,进样量1μL,分流比为10∶1。结果桂皮醛在浓度0.00213~0.04256 mg/mL范围中呈现良好的线性关系,平均加样回收率为99.2%,RSD为1.50%。反式茴香脑在浓度0.0734~0.9180 mg/mL范围中呈现良好的线性关系,平均加样回收率为99.7%,RSD为1.80%。结论本研究所建立的方法重复性好,具有方便、易行、简便的特点,可用于三香散中桂皮醛和反式茴香脑的含量测定。