基于反相高效液相色谱法的面团黏性与小麦醇溶蛋白组成关系研究

以74份不同黏性等级的小麦品种(系)为研究材料,采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法分离不同黏性小麦品种的醇溶蛋白特征图谱,并进行面团黏性、醇溶蛋白组分含量与小麦面粉品质性状的相关性分析,以期建立采用少样本量快速准确识别面团黏性的方法。结果表明,经RP-HPLC分离后,ω-、α/β-和γ-醇溶蛋白3个组分在图谱上清晰可见;不同黏性等级小麦材料的醇溶蛋白得到了不同的特征图谱,黏性较大的小麦ω-醇溶蛋白的组分峰数较多,总峰面积较大;ω-醇溶蛋白在不同黏性等级小麦材料间存在显著差异。相关性分析结果表明,面团黏性与ω-醇溶蛋白相对含量呈极显著正相关,与α/β-和γ-醇溶蛋白相对含量相关性不显著;ω-醇溶蛋白相对含量与沉淀值、形成时间、稳定时间、能量、拉伸阻力和最大拉伸阻力均呈极显著负相关,与蛋白质、湿面筋含量均呈显著正相关,与弱化度呈极显著正相关;ɑ/β-醇溶蛋白相对含量与蛋白质、湿面筋含量均呈极显著正相关;γ-醇溶蛋白相对含量与小麦各品质性状均无显著相关性。可见,面团黏性主要与ω-醇溶蛋白相对含量有关,ω-醇溶蛋白对面团质量有弱化作用。

反相高效液相色谱法同时测定五味香连丸中10种成分含量

目的建立同时测定五味香连丸中盐酸小檗碱、黄连碱、巴马汀、延胡索乙素、木香烃内酯、去氢木香内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素、芍药苷10种成分含量的反相高效液相色谱法。方法色谱柱为Waters SunFire C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5µm),流动相为含0.02%三乙胺的0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调pH至3.5)-乙腈(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,柱温为35℃,检测波长为225 nm,进样量为10µL。结果盐酸小檗碱、黄连碱、巴马汀、延胡索乙素、木香烃内酯、去氢木香内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素、芍药苷的质量浓度分别在6.852~51.39µg/mL、2.956~22.17µg/mL、2.918~21.88µg/mL、4.643~34.82µg/mL、4.871~36.53µg/mL、4.007~30.05µg/mL、4.519~33.89µg/mL、4.482~33.62µg/mL、2.724~20.43µg/mL、2.809~21.07µg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.9992,n=6);定量限分别为0.66,0.31,0.29,0.45,0.48,0.41,0.42,0.46,0.27,0.28µg/mL;精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%(n=6);回收率分别为100.36%,98.74%,98.71%,99.67%,99.86%,99.59%,98.70%,98.38%,98.25%,98.72%,RSD分别为0.89%,1.02%,1.04%,1.17%,0.84%,1.15%,1.33%,1.20%,1.07%,1.23%(n=6)。3批样品中上述成分的平均含量分别为1.165~1.192 mg/g、0.5231~0.5276 mg/g、0.4997~0.5011 mg/g、0.6814~0.6889 mg/g、0.6977~0.7002 mg/g、0.6068~0.6134 mg/g、0.5801~0.5837 mg/g、0.4277~0.4422 mg/g、0.4101~0.4165 mg/g、0.4002~0.4013 mg/g(n=2)。结论所建立的方法简便可行、结果准确可靠、稳定性好,可用于同时测定五味香连丸中10种成分的含量。

反相高效液相色谱法同时测定清脑降压片中黄芩苷、阿魏酸和藁本内酯的含量

目的:建立测定清脑降压片中黄芩苷、阿魏酸和藁本内酯含量的反相高效液相色谱法。方法:色谱柱采用ODS-C 18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.5%磷酸水梯度洗脱;黄芩苷、阿魏酸、藁本内酯检测波长为326 nm;流速为1.0 mL·min-1;柱温35℃。结果:黄芩苷在221.62~3324.30 ng范围内与峰面积线性关系良好(Y=0.0654X-0.0021,γ=1.0000)。平均加样回收率为98.6%,RSD为1.42%(n=6),阿魏酸在20.07~401.40 ng范围内与峰面积线性关系良好(Y=1.0469X-0.9536,γ=1.0000)。平均加样回收率为97.8%,RSD为1.05%(n=6)。藁本内酯在20.13~402.60 ng范围内与峰面积线性关系良好(Y=0.6333X-0.6877,γ=1.0000)。平均加样回收率为98.2%,RSD为1.42%(n=6)。结论:本方法可行、准确、重复性好,可作为清脑降压片中黄芩苷、阿魏酸和藁本内酯的质量控制方法。

高效液相色谱法测定β-内酰胺抗生素中残留乙酸的含量

目的建立测定β-内酰胺类抗生素原料中乙酸残留量的HPLC方法。方法采用多因素组内设计方法,确定色谱流动相的组成、比例和pH值。参考ICH Q2,从专属性、检出限和定量限、线性、准确度、精密度和耐用性等6个方面对方法进行验证。用所建立的方法对19种β-内酰胺类抗生素原料进行了测定。结果采用C_(18)色谱柱,流动相:甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钾,梯度洗脱;柱温25℃;检测波长220 nm。供试品、溶剂和流动相对乙酸测定没有明显干扰;乙酸的最低检出限约为0.029μg,最低定量限约0.12μg;从定量限到限度2倍浓度范围内,方法的线性关系良好,拟合直线方程为y=388866.7186x-177.5720,r2=0.9999;低中高浓度加样回收率平均分别为93%,96%和99%;方法的重复性和中间精密度分别为2.37%和2.11%;在3根不同C_(18)色谱柱上的耐用性良好。19种β-内酰胺抗生素原料中有3种筛查出残留乙酸。结论所建方法可以实现对β-内酰胺类抗生素原料中残留乙酸的准确定量,为该类原料的生产过程控制和标准物质研制提供了依据。

反相高效液相色谱法制备松果菊苷标准品

利用反相制备高效液相色谱结合溶剂萃取、大孔吸附树脂柱色谱和葡聚糖凝胶LH 2 0柱色谱方法 ,从管花肉苁蓉的乙醇提取物中纯化制备了苯乙醇苷类化合物松果菊苷的标准品 ,纯度达到 98%以上。方法操作简便 ,重现性好 。

反相高效液相色谱法制备延胡索乙素

目的:利用反相高效液相色谱制备延胡索乙素。方法:结合溶剂萃取法,从延胡索的乙醇提取物中纯化制备延胡索乙素。结果:纯度不低于99%。方法具有进样量大,一次制备量多的优点,一次可进样800μL,几次进样就可制备mg级样品。结论:方法操作简便,重现性好,可用于实验中延胡索乙素的制备。

高效液相色谱法测定异烟酸辛酰肼含量

目的:异烟肼及其衍生物作为治疗肺结核的一线药物,其含量测定在药物的研发及应用中至关重要。然而,异烟肼的含量测定方法虽常有报道,但是针对异烟肼衍生物的含量测定方法却鲜有报道。因此本研究构建一种适用于测定异烟酸辛酰肼(INH-CHO)的反相高效液相色谱法(reverse-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC),用于INH-CHO的含量检测。方法:采用Capcell Pak C18 MG II S5色谱柱,柱温为30℃,以pH=6.0磷酸盐缓冲液:甲醇=30:70为流动相进行洗脱,流速为1 mL/min,进样0.02 mL,在262 nm处检测,考察该方法学的线性关系、精密度、准确度及定量限。结果:INH-CHO的保留时间为9.2 min,在1~240μg/mL、0.1~1μg/mL浓度范围内都具有较好的线性关系(R~2>0.9990),在该色谱条件下测定INH-CHO的日内精密度、日间精密度、准确度较好,定量限为0.1μg/mL。结论:在实验浓度范围内,该方法线性良好、操作简便、结果精确、可重现,适用于INH-CHO的含量检测。

反相高效制备液相色谱法制备洋川芎内酯H和I

从川芎中分离制备洋川芎内酯H和洋川芎内酯I对照品.用8倍量80%乙醇回流提取川芎药材,得到川芎浸膏经D-101大孔吸附树脂、硅胶柱色谱及反相高效制备液相色谱分离,获得两个化合物单体.经核磁共振波谱分析,确定其分别为洋川芎内酯H和洋川芎内酯I,两者纯度均高于98%,可作为对照品进行定量分析.该方法操作简单,重现性好,上样量大,能够同时获得大量的高纯度的目标成分,为洋川芎内酯H和洋川芎内酯I单体的制备研究提供了一种新的方法.

反相高效液相色谱法制备洋川芎内酯Ⅰ

建立了一种快速、高效制备洋川芎内酯Ⅰ的工艺路线。以醋酸铵为改性剂,利用台阶梯度洗脱和MCI树脂柱脱盐的方式,通过反相高效液相色谱法制备,从川芎的95%(体积分数)乙醇提取物中快速分离到目标产物洋川芎内酯Ⅰ和副产物阿魏酸。经检测,二者的纯度均达到98%以上。该方法操作简便,能够排除由样品中阿魏酸所引起的峰交叉干扰,上样量大,适合于洋川芎内酯Ⅰ的大量制备。

反相高效液相色谱法制备纯化大豆异黄酮糖苷

利用制备高效液相色谱法从大豆总异黄酮提取物中制备出了3种大豆异黄酮糖苷。在N ova-Pak HR C18色谱柱(100mm×25mm i.d.,6μm)上,以甲醇-体积分数为0.1%的乙酸水溶液(体积比为23∶77)为流动相,流速为20m L/m in,采用等度洗脱方式,制备了3种大豆异黄酮糖苷,经质谱分析,确认它们分别为大豆苷、黄豆苷和染料木苷。高效液相色谱分析表明,所制备的3种化合物的纯度均达到了99%以上。

反相高效液相色谱法分离和制备虫草素的方法研究

采用反相高效液相色谱法检测和制备了北冬虫夏草子实体中的虫草素,并对自制晶体与虫草素标准品进行了紫外和红外谱图比较。结果表明,子实体虫草素含量为2.82‰,在所设定条件下,虫草素与样品中的非目的成分达到了预期分离,重现性好,保证了流出曲线的峰对称性及基线的全分离。结果还表明,自制晶体的紫外特征与标准品比值的文献值相近,红外光谱规律一致,两者结构相同,为同一物质,制备虫草素纯度为99.7%。

反相高效液相色谱法分离制备蜂毒肽类似物

应用高效制备液相色谱法 ,对 5种合成的蜂毒肽类似物分离制备。当用极性较强的洗脱液做流动相时 ,主峰的保留时间短 ,且主峰和前后的杂质峰不能很好的分开 ;随着洗脱液极性减弱至某一值时 ,主峰和杂质峰的保留时间均向后延长 ,且时间间隔加大 ,可以成功地对多肽样品进行分离制备。用多肽分子中各氨基酸保留常数加和值的方法可以预测不同多肽的保留时间 ,为选择分离纯化多肽所需的流动相提供了参考作用。经半制备分离纯化后的产物用分析型RP HPLC测定达到了很高的纯度 ,氨基酸分析结果表明得到了所需的肽段 。

反相高效液相色谱法制备银杏叶中聚戊烯醇同系物单体

利用制备高效液相色谱法从银杏叶中分离制备了聚戊烯醇同系物单体。在HiQsilC18柱上,以异丙醇 甲醇 正己烷 水(体积比为50∶25∶15∶4)为流动相,流速10mL/min,采用等度洗脱方式,制备了8种化合物,经紫外光谱、红外光谱及质谱分析,确认它们分别为C70,C75,C80,C85,C90,C95,C100和C105聚戊烯醇,其中主要成分为C85及C90聚戊烯醇。高效液相色谱分析表明,制备的C75～C105聚戊烯醇化合物的纯度均在96%(质量分数)以上。在该色谱条件下,各色谱峰达到了基线分离,且分离时间短,溶剂用量少。

反相高效液相色谱法检测金线莲中槲皮素、山奈酚含量

金线莲质量评价标准的缺乏导致市场上金线莲产品质量参次不齐,严重影响消费者利益。为了缓解这一状况,本文建立了一套反相高效液相色谱法提取及检测金线莲中槲皮素、山奈酚的方法,并分析了槲皮素、山奈酚在不同栽培时间和不同组织中分布。研究结果表明,0.1g金线莲粉末按料液比1∶40加入90%甲醇∶盐酸10∶1溶液中,静置40 min, 70℃水浴中超声90 min时,槲皮素、山奈酚的提取率最高。该方法精确度高,可用于金线莲中槲皮素、山奈酚定性和定量分析。利用该方法分析槲皮素、山奈酚在金线莲中时空分布,金线莲中槲皮素含量随着移栽时间呈现先上升后下降趋势,在3个月时含量最高,4个月后连续下降,且槲皮素特异性积累于叶中。金线莲中山奈酚含量随着移栽时间也呈现先上升后下降趋势,在移栽3个月时含量最高,4个月后连续下降,但山奈酚含量在不同月龄、不同组织中差异不大。

反相高效液相色谱法制备HMC毒素纯品

本文采用反相高效液相色谱纯化制备了从玉米小斑病病菌Ｃ小种（ＨｅｌｍｉｎｔｈｏｓｐｒｉｕｍｍａｙｄｉｓＲａｃｅＣ）分离出来的毒素ＴｏｘｉｎＩ，经ＮＭＲ的结构分析证实此制备物纯度较高，达到结构分析要求。用氯仿提取含有ＨＭＣ的毒素培养滤液，经过多次ＴＬＣ展层层析（ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ＝９：１），刮取具有侵染活性的部分（Ｒ_ｆ＝０．４）溶解在小体积甲醇中备用。色谱柱为Ｗａｔｅｒｓ（制备型２５０ｍｍ×１０ｍｍ）填料为ＹＷＧ－Ｃ１８反相柱，粒度１０ｕｍ，流动相选用甲醇：水５５：４５，流速为０．８ｍｌ／ｍｉｎ，检测波长２７２ｎｍ，进样量每次１００ｕｌ，当主要峰出现时，收集合并冻干保存（保留时间９.５ｍｉｎ）。

反相高效液相色谱法制备喜树细胞内生物碱单体

利用制备高效液相色谱法从喜树细胞中分离制备了在原植株内不存在的两种全新的生物碱单体喜树异碱A和喜树异碱B。在C18柱上,以乙腈水(体积比为35∶65)为流动相,流速为5mL/min,采用等度洗脱方式,制备了这两种化合物。经紫外光谱、红外光谱及质谱分析,对这两种化合物进行了确认。高效液相色谱分析表明,制备的喜树异碱A和喜树异碱B的纯度均在97% (质量分数)以上。在该色谱条件下,各色谱峰达到了基线分离,且分离时间短,溶剂用量少。

半制备反相高效液相色谱法分离珍珠菜中木脂素类成分

对珍珠菜(Lysimachia clethroideDuby)中的木脂素类化学成分,采用Sephadex LH-20和半制备反相高效液相色谱法联用分离化合物,从中分离并鉴定了两个化合物,通过波谱技术鉴定其化合物的结构分别是:(+)-Isolar-ic iresinol-9′-β-D-glucopyranoside(1).Urolignoside(2).化合物1和2均为首次从该属植物中分离得到.

反相高效液相色谱法测定头孢地尼及制剂中的聚合物类杂质

目的建立反相高效液相色谱法测定头孢地尼及制剂中的聚合物杂质。方法以CAPCELL PAK C_(18)MGⅡ为色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),0.25%四甲基氢氧化铵溶液(p H 5.5)[每1000mL中加入0.1 mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液0.4 mL]-甲醇-乙腈为流动相系统,梯度洗脱,建立了头孢地尼聚合物类杂质的分析方法并进行了方法学验证。采用二维液质联用法对检出的聚合物类杂质进行定性分析。结果在该色谱条件下头孢地尼及已知杂质均与头孢地尼聚合物间分离良好,头孢地尼检测浓度的线性范围为0.30~30.1μg/mL(r=1.0000),方法的检测限与定量限分别为1.5 ng和4.5 ng。所建立的方法能够检出头孢地尼二聚体,头孢地尼二聚体的多个同分异构体及头孢地尼三聚体。结论本方法专属性好,灵敏度高,耐用性好,可用于头孢地尼及其制剂中聚合物杂质的控制。

反相高效液相色谱法制备桃叶珊瑚苷标准品

利用反相高效液相色谱结合大孔吸附树脂柱色谱和硅胶干柱色谱法 ,从车前草的 70 %甲醇提取物中纯化制备了环烯醚萜苷类化合物———桃叶珊瑚苷的标准品 ,纯度达到 98%以上。该方法为桃叶珊瑚苷及其他环烯醚萜苷类化合物的制备提供了参考。

反相高效液相色谱法测定加味四妙勇安汤中绿原酸和梓醇的含量

目的:建立反相高效液相色谱法测定加味四妙勇安汤浸膏中绿原酸和梓醇含量的方法。方法:色谱柱为Merck Purospher STARLP RP-18 endcapped柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流速为1.0 mL/min,柱温为35℃。(1)绿原酸的色谱条件,流动相为乙腈-0.4%磷酸(V∶V=11∶89),检测波长为327 nm。(2)梓醇的色谱条件,流动相A为乙腈,流动相B为0.1%磷酸,梯度洗脱(0~15 min,0.8%A;15~60 min,2%A),检测波长为210 nm。结果:绿原酸在4.420~442.0μg/mL(r=0.9998)范围内质量浓度与峰面积成良好线性关系;平均回收率为99.38%(RSD=1.26%)。梓醇在9.760~488.0μg/mL(r=0.9999)范围内质量浓度与峰面积成良好线性关系,平均回收率为99.34%(RSD=1.43%)。绿原酸和梓醇的最低检测限分别为0.40和0.82 ng,定量限分别为1.20和2.44 ng,精密度RSD分别为0.71%(n=6)和0.45%(n=6)。结论:本方法操作简便,分离效果和重复性好,准确度高,可用于加味四妙勇安汤提取物的质量评价。