基于反相高效液相色谱法的面团黏性与小麦醇溶蛋白组成关系研究

以74份不同黏性等级的小麦品种(系)为研究材料,采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法分离不同黏性小麦品种的醇溶蛋白特征图谱,并进行面团黏性、醇溶蛋白组分含量与小麦面粉品质性状的相关性分析,以期建立采用少样本量快速准确识别面团黏性的方法。结果表明,经RP-HPLC分离后,ω-、α/β-和γ-醇溶蛋白3个组分在图谱上清晰可见;不同黏性等级小麦材料的醇溶蛋白得到了不同的特征图谱,黏性较大的小麦ω-醇溶蛋白的组分峰数较多,总峰面积较大;ω-醇溶蛋白在不同黏性等级小麦材料间存在显著差异。相关性分析结果表明,面团黏性与ω-醇溶蛋白相对含量呈极显著正相关,与α/β-和γ-醇溶蛋白相对含量相关性不显著;ω-醇溶蛋白相对含量与沉淀值、形成时间、稳定时间、能量、拉伸阻力和最大拉伸阻力均呈极显著负相关,与蛋白质、湿面筋含量均呈显著正相关,与弱化度呈极显著正相关;ɑ/β-醇溶蛋白相对含量与蛋白质、湿面筋含量均呈极显著正相关;γ-醇溶蛋白相对含量与小麦各品质性状均无显著相关性。可见,面团黏性主要与ω-醇溶蛋白相对含量有关,ω-醇溶蛋白对面团质量有弱化作用。

反相高效液相色谱法同时测定五味香连丸中10种成分含量

目的建立同时测定五味香连丸中盐酸小檗碱、黄连碱、巴马汀、延胡索乙素、木香烃内酯、去氢木香内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素、芍药苷10种成分含量的反相高效液相色谱法。方法色谱柱为Waters SunFire C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5µm),流动相为含0.02%三乙胺的0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调pH至3.5)-乙腈(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,柱温为35℃,检测波长为225 nm,进样量为10µL。结果盐酸小檗碱、黄连碱、巴马汀、延胡索乙素、木香烃内酯、去氢木香内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素、芍药苷的质量浓度分别在6.852~51.39µg/mL、2.956~22.17µg/mL、2.918~21.88µg/mL、4.643~34.82µg/mL、4.871~36.53µg/mL、4.007~30.05µg/mL、4.519~33.89µg/mL、4.482~33.62µg/mL、2.724~20.43µg/mL、2.809~21.07µg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.9992,n=6);定量限分别为0.66,0.31,0.29,0.45,0.48,0.41,0.42,0.46,0.27,0.28µg/mL;精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%(n=6);回收率分别为100.36%,98.74%,98.71%,99.67%,99.86%,99.59%,98.70%,98.38%,98.25%,98.72%,RSD分别为0.89%,1.02%,1.04%,1.17%,0.84%,1.15%,1.33%,1.20%,1.07%,1.23%(n=6)。3批样品中上述成分的平均含量分别为1.165~1.192 mg/g、0.5231~0.5276 mg/g、0.4997~0.5011 mg/g、0.6814~0.6889 mg/g、0.6977~0.7002 mg/g、0.6068~0.6134 mg/g、0.5801~0.5837 mg/g、0.4277~0.4422 mg/g、0.4101~0.4165 mg/g、0.4002~0.4013 mg/g(n=2)。结论所建立的方法简便可行、结果准确可靠、稳定性好,可用于同时测定五味香连丸中10种成分的含量。

反相高效液相色谱法同时测定清脑降压片中黄芩苷、阿魏酸和藁本内酯的含量

目的:建立测定清脑降压片中黄芩苷、阿魏酸和藁本内酯含量的反相高效液相色谱法。方法:色谱柱采用ODS-C 18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.5%磷酸水梯度洗脱;黄芩苷、阿魏酸、藁本内酯检测波长为326 nm;流速为1.0 mL·min-1;柱温35℃。结果:黄芩苷在221.62~3324.30 ng范围内与峰面积线性关系良好(Y=0.0654X-0.0021,γ=1.0000)。平均加样回收率为98.6%,RSD为1.42%(n=6),阿魏酸在20.07~401.40 ng范围内与峰面积线性关系良好(Y=1.0469X-0.9536,γ=1.0000)。平均加样回收率为97.8%,RSD为1.05%(n=6)。藁本内酯在20.13~402.60 ng范围内与峰面积线性关系良好(Y=0.6333X-0.6877,γ=1.0000)。平均加样回收率为98.2%,RSD为1.42%(n=6)。结论:本方法可行、准确、重复性好,可作为清脑降压片中黄芩苷、阿魏酸和藁本内酯的质量控制方法。

高效液相色谱法测定β-内酰胺抗生素中残留乙酸的含量

目的建立测定β-内酰胺类抗生素原料中乙酸残留量的HPLC方法。方法采用多因素组内设计方法,确定色谱流动相的组成、比例和pH值。参考ICH Q2,从专属性、检出限和定量限、线性、准确度、精密度和耐用性等6个方面对方法进行验证。用所建立的方法对19种β-内酰胺类抗生素原料进行了测定。结果采用C_(18)色谱柱,流动相:甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钾,梯度洗脱;柱温25℃;检测波长220 nm。供试品、溶剂和流动相对乙酸测定没有明显干扰;乙酸的最低检出限约为0.029μg,最低定量限约0.12μg;从定量限到限度2倍浓度范围内,方法的线性关系良好,拟合直线方程为y=388866.7186x-177.5720,r2=0.9999;低中高浓度加样回收率平均分别为93%,96%和99%;方法的重复性和中间精密度分别为2.37%和2.11%;在3根不同C_(18)色谱柱上的耐用性良好。19种β-内酰胺抗生素原料中有3种筛查出残留乙酸。结论所建方法可以实现对β-内酰胺类抗生素原料中残留乙酸的准确定量,为该类原料的生产过程控制和标准物质研制提供了依据。

反相高效液相色谱法检测金线莲中槲皮素、山奈酚含量

金线莲质量评价标准的缺乏导致市场上金线莲产品质量参次不齐,严重影响消费者利益。为了缓解这一状况,本文建立了一套反相高效液相色谱法提取及检测金线莲中槲皮素、山奈酚的方法,并分析了槲皮素、山奈酚在不同栽培时间和不同组织中分布。研究结果表明,0.1g金线莲粉末按料液比1∶40加入90%甲醇∶盐酸10∶1溶液中,静置40 min, 70℃水浴中超声90 min时,槲皮素、山奈酚的提取率最高。该方法精确度高,可用于金线莲中槲皮素、山奈酚定性和定量分析。利用该方法分析槲皮素、山奈酚在金线莲中时空分布,金线莲中槲皮素含量随着移栽时间呈现先上升后下降趋势,在3个月时含量最高,4个月后连续下降,且槲皮素特异性积累于叶中。金线莲中山奈酚含量随着移栽时间也呈现先上升后下降趋势,在移栽3个月时含量最高,4个月后连续下降,但山奈酚含量在不同月龄、不同组织中差异不大。

反相高效液相色谱法测定头孢地尼及制剂中的聚合物类杂质

目的建立反相高效液相色谱法测定头孢地尼及制剂中的聚合物杂质。方法以CAPCELL PAK C_(18)MGⅡ为色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),0.25%四甲基氢氧化铵溶液(p H 5.5)[每1000mL中加入0.1 mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液0.4 mL]-甲醇-乙腈为流动相系统,梯度洗脱,建立了头孢地尼聚合物类杂质的分析方法并进行了方法学验证。采用二维液质联用法对检出的聚合物类杂质进行定性分析。结果在该色谱条件下头孢地尼及已知杂质均与头孢地尼聚合物间分离良好,头孢地尼检测浓度的线性范围为0.30~30.1μg/mL(r=1.0000),方法的检测限与定量限分别为1.5 ng和4.5 ng。所建立的方法能够检出头孢地尼二聚体,头孢地尼二聚体的多个同分异构体及头孢地尼三聚体。结论本方法专属性好,灵敏度高,耐用性好,可用于头孢地尼及其制剂中聚合物杂质的控制。

反相高效液相色谱法测定加味四妙勇安汤中绿原酸和梓醇的含量

目的:建立反相高效液相色谱法测定加味四妙勇安汤浸膏中绿原酸和梓醇含量的方法。方法:色谱柱为Merck Purospher STARLP RP-18 endcapped柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流速为1.0 mL/min,柱温为35℃。(1)绿原酸的色谱条件,流动相为乙腈-0.4%磷酸(V∶V=11∶89),检测波长为327 nm。(2)梓醇的色谱条件,流动相A为乙腈,流动相B为0.1%磷酸,梯度洗脱(0~15 min,0.8%A;15~60 min,2%A),检测波长为210 nm。结果:绿原酸在4.420~442.0μg/mL(r=0.9998)范围内质量浓度与峰面积成良好线性关系;平均回收率为99.38%(RSD=1.26%)。梓醇在9.760~488.0μg/mL(r=0.9999)范围内质量浓度与峰面积成良好线性关系,平均回收率为99.34%(RSD=1.43%)。绿原酸和梓醇的最低检测限分别为0.40和0.82 ng,定量限分别为1.20和2.44 ng,精密度RSD分别为0.71%(n=6)和0.45%(n=6)。结论:本方法操作简便,分离效果和重复性好,准确度高,可用于加味四妙勇安汤提取物的质量评价。

反相高效液相色谱法测定Fmoc-L-His(Trt)-OH中光学异构体Fmoc-D-His(Trt)-OH的含量

目的结合外标法和面积归一化法,建立反相高效液相色谱法测定Fmoc-L-His(Trt)-OH中的光学异构体Fmoc-D-His(Trt)-OH的含量。方法采用Chiral MX(2)-RH色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm);以乙腈-水-乙酸(500∶500∶1)为流动相,等度洗脱;流速为0.8 mL·min^(-1);紫外检测器检测,波长为220 nm;柱温为30℃;进样体积为10μL。结果Fmoc-L-His(Trt)-OH和Fmoc-D-His(Trt)-OH分离良好;Fmoc-D-His(Trt)-OH在0.15~2.93 mg·mL^(-1)与峰面积呈良好的线性关系(相关系数为0.9999);定量限为0.15μg·mL^(-1),检测限为0.049μg·mL^(-1)。回收率在95%~100%内,RSD为0.96%。结论本方法操作简单,专属性强,灵敏度高,为Fmoc-L-His(Trt)-OH中光学异构体Fmoc-D-His(Trt)-OH研究提供参考。

分子排阻色谱-反相高效液相色谱法测定阿莫西林颗粒中高分子聚合物含量

目的建立测定阿莫西林颗粒中高分子聚合物含量的分子排阻色谱-反相高效液相色谱法。方法色谱柱为Cef-SEC球状亲水硅胶柱(300 mm×7.8 mm,5μm),流动相为磷酸盐缓冲液[pH 7.0,0.005 mol/L磷酸氢二钠-0.005 mol/L磷酸二氢钠(50∶50,V/V)]-乙腈(90∶10,V/V),流速为0.6 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为25℃,进样量为20μL。结果阿莫西林质量浓度在2.51~35.07μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9993,n=8);定量限为5.00 ng,检测限为1.60 ng;精密度、稳定性、重复性、中间精密度、耐用性试验结果均符合要求。国内A公司5批阿莫西林颗粒中高分子聚合物的含量均低于国外L公司的原研阿莫西林细粒。结论该方法专属性强、结果准确、重复性好,可用于测定阿莫西林颗粒中高分子聚合物含量。

反相高效液相色谱法测定呋喃西林中有关物质

建立反相高效液相法测定呋喃西林含量和有关物质的方法。采用Phenomenex Synergi Max-RP C12色谱柱(250 mm×4.6 mm,4μm)为分离柱,以乙腈-水(30∶70)为流动相,流量为1.0 mL/min,检测波长为375 nm,色谱柱温度为30℃。在该色谱条件下,呋喃西林色谱峰与相邻杂质峰的分离度大于1.5,呋喃西林的质量浓度在1.04~104.0μg/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好(r=0.999 2),检出限为0.3μg/mL。样品中单一杂质测定值的相对标准偏差为6.5%(n=6),杂质总和测定值的相对标准偏差为4.6%(n=6),平均加标回收率为100.4%~101.3%。该方法操作简单,专属性强,准确性好,可有助于控制呋喃西林的质量。

反相高效液相色谱法测定发酵乳中赤藓红含量

建立发酵乳中赤藓红的反相高效液相色谱分析方法。使用酶法分解蛋白,无水乙醇作为提取剂,碱性条件下使用HLB固相萃取小柱净化,以C_(18)反相色谱柱分离,20 mmoL/L乙酸铵缓冲溶液(pH 6.5)-甲醇为流动相,采用梯度洗脱,检测波长520 nm,外标法定量。结果表明:赤藓红在0.05~20.00μg/mL线性良好,发酵乳样品中赤藓红的定量限为0.2 mg/kg,检出限为0.1 mg/kg;发酵乳中赤藓红的添加量为0.2~2.0 mg/kg时,加标回收率为96.5%~105.6%,相对标准偏差为1.87%~2.21%。本方法操作简便、结果准确、回收率高、重复性好,适用于发酵乳中赤藓红的含量测定。

反相高效液相色谱法测定葡萄糖酸钙锌口服溶液中葡萄糖酸根的含量

目的建立反相高效液相色谱法测定葡萄糖酸钙锌口服溶液中葡萄糖酸根的含量。方法色谱柱为赛默飞Thermo Acclaim Mixed-Mode WAX-1柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相A为0.025 mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液(用三乙胺调节pH至6.0);流动相B为乙腈,梯度洗脱;流速为0.6 mL·min^(-1);柱温为35℃;检测波长为210 nm;进样体积为10μL。结果空白溶液、空白溶剂均不干扰葡萄糖酸根的测定,葡萄糖酸根在0.0545~0.5448 mg·mL^(-1)(r=1.000)内与峰面积线性关系良好,平均回收率在99.39%~101.2%,RSD<2.0%。结论本法灵敏度高,专属性强,可准确测定葡萄糖酸钙锌口服溶液中葡萄糖酸根的含量。

反相高效液相色谱法测定乳粉中6S-5-甲基四氢叶酸钙含量

建立乳粉中6S-5-甲基四氢叶酸钙的反相高效液相色谱分析方法。使用三氯乙酸溶液沉淀蛋白,抗坏血酸溶液加热提取后,以C_(18)反相色谱柱分离,三氟乙酸溶液(0.1%)-甲醇为流动相,采用梯度方式洗脱,检测波长280 nm,单标法定量。结果表明:乳粉样品中6S-5-甲基四氢叶酸钙的定量限为150μg/100 g,检出限为50μg/100 g;乳粉中6S-5-甲基四氢叶酸钙的添加量为150~600?μg/100 g时,加标回收率为95.0%~109.1%,相对标准偏差为1.26%~4.04%。本方法操作简便、准确、回收率高、重复性好,适用于乳粉中6S-5-甲基四氢叶酸钙的含量测定。

反相高效液相色谱法同时测定9种食品中乙酰磺胺酸钾、苯甲酸、山梨酸、糖精钠方法的研究

目的:建立一种准确、适用的反相高效液相色谱法同时分离测定9种不同类型食品中常用甜味剂乙酰磺胺酸钾、糖精钠和防腐剂苯甲酸、山梨酸的分析方法。方法:不同类型样品应用不同的前处理方法,用Inertsil ODS-C18反相柱分离,HPLC-486UV测定,外标法定量。结果:乙酸磺胺酸钾、苯甲酸、山梨酸、糖精钠在各种样品中的回收率平均值分别为89.6%,92.4%,90.2%,88.8%,其精密度分别为4.56%,0.0015%,1.32%,2.86%,最小检出限在取样量为10.0 g时,分别为0.00012,0.0002,0.0001,0.0004 mg/g。结论:本方法能满足9种食品中乙酰磺胺酸钾、苯甲酸、山梨酸、糖精钠的同时分析测定要求。

反相高效液相色谱法测定刺五加叶中绿原酸和金丝桃苷含量

目的:建立HPLC法定量分析东北地区不同产地刺五加叶中绿原酸和金丝桃苷的含量。方法:采用三种不同品牌C18色谱柱,流动相A为0.3%磷酸溶液,流动相B为乙腈,梯度洗脱:0~3 min,95%A;3~10 min,95%~80%A;10~40 min,80%A;40~50 min,80%~10%A;流速1.0 m L/min;柱温35℃;进样量5μL;检测波长为354 nm。结果:绿原酸和金丝桃苷分别在0.39~5.9μg、0.08~1.2μg范围内呈良好的线性关系;精密度、稳定性、重复性试验RSD<1.1%,绿原酸和金丝桃苷的加样回收率分别为102.3%、98.4%。不同产地样品绿原酸含量范围为1.01 mg/g~10.71 mg/g;金丝桃苷含量范围为0.25 mg/g~1.49 mg/g。结论:建立的HPLC法可有效考察刺五加叶中多成分含量,不同地区间刺五加叶中绿原酸和金丝桃苷含量有差异。

高效液相色谱法测定异烟酸辛酰肼含量

目的:异烟肼及其衍生物作为治疗肺结核的一线药物,其含量测定在药物的研发及应用中至关重要。然而,异烟肼的含量测定方法虽常有报道,但是针对异烟肼衍生物的含量测定方法却鲜有报道。因此本研究构建一种适用于测定异烟酸辛酰肼(INH-CHO)的反相高效液相色谱法(reverse-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC),用于INH-CHO的含量检测。方法:采用Capcell Pak C18 MG II S5色谱柱,柱温为30℃,以pH=6.0磷酸盐缓冲液:甲醇=30:70为流动相进行洗脱,流速为1 mL/min,进样0.02 mL,在262 nm处检测,考察该方法学的线性关系、精密度、准确度及定量限。结果:INH-CHO的保留时间为9.2 min,在1~240μg/mL、0.1~1μg/mL浓度范围内都具有较好的线性关系(R~2>0.9990),在该色谱条件下测定INH-CHO的日内精密度、日间精密度、准确度较好,定量限为0.1μg/mL。结论:在实验浓度范围内,该方法线性良好、操作简便、结果精确、可重现,适用于INH-CHO的含量检测。

有机酸类化合物的反相高效液相色谱法的分离条件研究

研究了在用RP HPLC法测定有机酸时如何对流动相的酸度进行控制 ,给出了流动相最佳pH的选择通式 :色谱柱允许的最低 pH值≤pH≤pKa- 2 ;研究了流动相中甲醇、乙腈存在时对此通式的影响。用研究得出的结论选择了测定甲酸、乙酸、丙酸、丁酸和丙二酸、丁二酸、戊二酸、己二酸时的色谱条件 ,并且研究了每种酸在各自浓度范围内测定的线性关系、回归方程、相关系数以及相对标准偏差。实验显示 ,在选定的色谱条件下进行分析测试时 ,各种酸的线性相关系数r >0 9995 ,相对标准偏差RSD <0 90 %。

反相高效液相色谱法快速测定长春花中4种生物碱

采用反相高效液相色谱法同时分离测定 4种长春花吲哚类生物碱。以水∶二乙胺 =986∶14,用磷酸调节pH=7. 2(溶液A),甲醇∶乙腈 =4∶1(溶液B), 380mLA和 620mLB混合作为流动相,流速 2mL/min,进样量 10μL, 220nm下检测,以恒流洗脱方式在 25min内分离了长春碱等 4种成分。同时还研究了流动相组成、pH值等对分离效果的影响。对实际样品分析,取得了较好结果。

反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定啤酒中有机酸

建立了一种利用反相高效液相色谱法同时测定啤酒中 9种有机酸的方法。应用反相C18色谱柱Nucleosil 10 0C18 2 5 0× 4 0mm ,以 0 1mol/LKH2 PO4(用H3 PO4调 pH3 0 )为流动相 ,紫外检测 2 15nm ,将啤酒中草酸、丙酮酸、苹果酸、α 酮戊二酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、富马酸、琥珀酸一次性分离。除柠檬酸外各种有机酸的回收率在 85 %以上 ,变异系数 <5 %。该方法简便、快速、准确。此外 ,对影响有机酸分离的因素进行了研究 。

反相高效液相色谱法测定女贞子中红景天苷的含量

目的 测定女贞子中红景天苷的含量。方法 用反相高效液相色谱法 ,流动相为甲醇 水 (7.5∶92 .5 ) ,紫外检测波长2 78nm ,流速 1.6mL·min-1。结果 红景天苷对照品在 7～ 45 6mg·L-1浓度内线性关系良好 ,r=0 .9997。平均加样回收率97.2 % ,RSD为 3.4%。结论 该法简便 ,分离完全 ,结果可靠 ,适用于女贞子中红景天苷的测定。