藏药湿生扁蕾药材反相高效液相层析指纹图谱的研究

目的建立藏药湿生扁蕾药材反相高效液相色谱指纹图谱分析方法,为有效控制湿生扁蕾药材的质量奠定基础。方法采用反相高效液相层析(RP-HPLC)技术,选用ZORBAX SB-C18色谱柱,甲醇-0.4%磷酸水溶液梯度洗脱,紫外检测波长为260nm,流速为1.0mL/min,记录时间为60min,分析了10批湿生扁蕾药材的HPLC指纹图谱。结果在选定的色谱条件下通过相似度分析,确定10个色谱峰构成湿生扁蕾药材指纹图谱的特征峰。结论采用RP-HPLC所建立的指纹图谱具有稳定、重复性好的特点,可用于湿生扁蕾药材的质量控制。

反相高效液相层析法测定血浆中氯雷他定浓度及药动学研究

目的:建立测定血浆中氯雷他定浓度的反相高效液相层析方法,并对其在人体内的药动学进行研究.方法:血浆中氯雷他定用正己烷-甲基叔丁基醚(1:1)作液-液萃取挥干后,加流动相进样分析.反相高效液相层析方法采用Hypersil-BDS层析柱,流动相为乙腈-水(65:35,磷酸调pH 3.8),流速1.0 ml/min;紫外检测波长为248 nm.结果:氯雷他定在0.506 0～50.60 ng/ml血浆浓度范围内线性良好(r=0.999 5),平均相对回收率＞95.0%,日间和日内RSD＜15.0%.主要药代动力学参数:t1/2为(1.57±0.18)h;MRT为(2.46±0.19)h;Cl/F为(583.7±215.0)L/h cmax为(37.40±8.92)ng/ml;tmax为(1.0±0.20)h;AUC0～8 h为(73.24±21.30)ng·h/ml AUC0～∞为(75.57±21.70)ng·h/ml.结论:该方法操作方便,结果准确,可用于血浆中氯雷他定药代动力学研究.

反相高效液相梯度洗脱法测定药材中雷公藤甲素的含量

[目的]通过高效液相色谱法建立测定雷公藤甲素含量的方法,控制药材质量,为保证临床用药的有效性和安全性提供依据。[方法]采用反相高效液相层析(RP-HPLC)梯度洗脱法建立雷公藤药材中雷公藤甲素的定量方法。采用AgilentC18柱(2.1mm×150mm,3μm);乙腈-水二元梯度洗脱,0～8min(10:90～25:75,V:V),8～33min(25:75～35:65,V:V),33～40min(35:65～95:5,V:V),40～48min(95:5,V:V),48～55min(10:90,V:V);流速:1.0ml/min;检测波长:220nm。[结果]采用RP-HPLC梯度洗脱法不仅快速有效地实现了药材中雷公藤甲素的良好分离,而且能够有效防止分析过程中的拖尾现象,较准确地测定雷公藤甲素的含量。雷公藤甲素的线性范围为25～2000μg/ml(r=0.9999),该方法回收率为97.48%(RSD=1.55%)。[结论]该方法灵敏度高,准确可靠,重现性好,结果稳定。

液相色谱法分离纯化固相合成的胸腺素α1

本文为以Fmoc(Nα-芴甲氧羰基 )固相合成法制备的胸腺素α1粗品提出了一条实验室规模的液相色谱法纯化路线 ,共分两步 :第一步采用DEAESepharoseFastFlow填料进行离子交换层析操作 ,分离除去粗品中的大部分杂质 ;第二步用制备型反相高效液相色谱 (用C1 8色谱柱 )进行最后的纯化。终产物纯度可达 95% ,生物活性符合实验指标。

吸附无细胞百白破联合疫苗中游离甲醛含量柱前衍生反相高效液相色谱检测方法的建立及验证

目的建立检测吸附无细胞百白破联合疫苗中游离甲醛含量的柱前衍生反相高效液相色谱法,并进行验证。方法以2,4二硝基苯肼（DNPH）为衍生剂,采用ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,以70%乙睛溶液为流动相进行等度洗脱,流速为1 ml/min,检测波长为360 nm,进样量为10μl。对该方法的专属性、线性范围、精密度、准确度进行验证。用建立的方法检测10批吸附无细胞百白破联合疫苗中的游离甲醛含量。结果DNPH、甲醛、戊二醛的保留时间分别为3.148、4.178和11.058 min,甲醛的拖尾因子为1.07,与戊二醛的分离度为26.8;甲醛浓度在20-100μg/ml范围内,与峰面积呈良好的线性关系,相关系数（r）为0.998 3;同一人员连续重复检测6次结果的相对标准偏差（RSD）为0.5%,2名人员于不同时间重复检测6次结果的RSD为0.6%;9份加标供试品溶液甲醛含量的回收率为101.0%-106.0%。10批吸附无细胞百白破联合疫苗中的游离甲醛含量均符合规定。结论建立的柱前衍生反相高效液相色谱法具有良好的精密度及准确性,可用于测定吸附无细胞百白破联合疫苗中的游离甲醛含量。

柱前衍生反相高效液相色谱法测定猴免疫缺陷病毒基因治疗产品中盐酸组氨酸含量

目的建立柱前衍生反相高效液相色谱法（reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC）测定猴免疫缺陷病毒（simian immunodeficiency virus,SIV）基因治疗产品中盐酸组氨酸含量的方法。方法以正亮氨酸为内标,异硫氰酸苯酯（phenyl isothiocyanate,PITC）为柱前衍生化试剂,采用ZORBAX Eclipse XDB-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,以醋酸钠缓冲液（pH 6.5）和80%乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长254 nm,进样量10μl,流速1.0 ml/min。用建立的方法检测样品中盐酸组氨酸含量,绘制标准曲线,并验证该方法的精密度、稳定性、专属性和准确性。结果盐酸组氨酸在12.54-31.35μg范围内,进样量与峰面积呈良好的线性关系（r2=0.999 9）;3份供试品溶液,每份连续进样5次,盐酸组氨酸峰面积平均RSD值为1.77%;同1份供试品溶液0、3、6、12 h进样,盐酸组氨酸峰面积平均RSD值为1.03%;该方法可将甘氨酸、精氨酸和丝氨酸对照品有效分离;高、中、低浓度样品的平均回收率分别为103.37%、102.28%和102.91%。SIV基因治疗产品中盐酸组氨酸3次检测的平均含量为9.66 mg/ml。结论建立了柱前衍生RP-HPLC检测SIV基因治疗产品中盐酸组氨酸含量的方法,该方法重现性好,专属性强,精密度及准确度高,可对基因治疗产品中的盐酸组氨酸进行质量控制。

RP-HPLC紫外、荧光检测法测定虎杖中白藜芦醇及其苷含量的比较研究

目的:比较虎杖药材中白藜芦醇及其苷的两种含量测定方法。方法:采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)串联紫外-荧光检测器法同时测定虎杖乙醇提取物中白藜芦醇及其苷的含量。C18色谱柱,乙腈-水为流动相,紫外检测波长λ=290 nm,荧光波长λEx/λEm=334/404。结果:两种方法线性范围、回收率、精密度等试验的比较结果基本一致,但荧光检测法灵敏度相对较高。结论:两种检测方法均能准确测定虎杖中白藜芦醇及其苷的含量。