反相高效液相梯度洗脱法同时测定鼻泰滴鼻液中的3组分

目的 建立鼻泰滴鼻液中盐酸麻黄碱、山莨菪碱及地塞米松磷酸钠的含量测定方法。方法 采用RP -HPLC法 ,以梯度洗脱 ,色谱柱为SymmetryC18柱 (2 5 0mm× 4 .6mm ,5 μm) ,流动相A为 0 0 2mol·L-1磷酸二氢钾缓冲液 (0 3%三乙胺磷酸调pH 3 0 ) ;流动相B为乙腈 ,梯度条件为 6→ 15min ,乙腈 12 %→ 5 5 % ;流速 1 2ml·min-1,检测波长为 2 2 0nm。结果 盐酸麻黄碱、山莨菪碱和地塞米松磷酸钠在此条件下实现基线分离 ,3组分线性范围分别为 3 1～ 0 0 2 5、0 8～ 0 0 0 5、1 2～ 0 0 0 3mg·ml-1(r=0 9999) ;平均回收率分别为 99 5 2 % (RSD =1 34% )、98 94 % (RSD =1 6 3% )、10 0 4 % (RSD =1 76 % )。结论 所用方法简便快速、结果准确可靠 ,适用于该复方制剂中 3组分的同时测定。

反相高效液相梯度洗脱法测定脑通络口服液中阿魏酸的含量

目的建立高效液相色谱梯度洗脱法测定脑通络口服液中阿魏酸的含量。方法采用Lichrospher C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相A为0.1%磷酸水溶液、流动相B为甲醇,pH4.15±0.02,检测波长为316 nm,流速为1.0 ml/min,柱温25℃。结果阿魏酸在8.112～64.896μg/ml范围内具有良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率98.15%,RSD=1.79%(n=9)。结论反相高效液相梯度洗脱法简便,准确,重复性好,适用于脑通络口服液中阿魏酸的含量测定。

反相高效液相梯度洗脱法测定药材中雷公藤甲素的含量

[目的]通过高效液相色谱法建立测定雷公藤甲素含量的方法,控制药材质量,为保证临床用药的有效性和安全性提供依据。[方法]采用反相高效液相层析(RP-HPLC)梯度洗脱法建立雷公藤药材中雷公藤甲素的定量方法。采用AgilentC18柱(2.1mm×150mm,3μm);乙腈-水二元梯度洗脱,0～8min(10:90～25:75,V:V),8～33min(25:75～35:65,V:V),33～40min(35:65～95:5,V:V),40～48min(95:5,V:V),48～55min(10:90,V:V);流速:1.0ml/min;检测波长:220nm。[结果]采用RP-HPLC梯度洗脱法不仅快速有效地实现了药材中雷公藤甲素的良好分离,而且能够有效防止分析过程中的拖尾现象,较准确地测定雷公藤甲素的含量。雷公藤甲素的线性范围为25～2000μg/ml(r=0.9999),该方法回收率为97.48%(RSD=1.55%)。[结论]该方法灵敏度高,准确可靠,重现性好,结果稳定。

七叶神安片中人参皂苷Rb_3含量的反相高效液相梯度洗脱法测定

七叶神安片是以中药三七叶为原料,经提炼精制并加工成七叶神安片。其主要成分为人参二醇型皂苷。临床主要用于益气安神,活血止痛,止血。用于心气不足,失眠,心悸,胸痹心痛,或肿瘤,痈肿疮毒及出血症。本文以人参皂苷为指标性成分,采用反相高效液相梯度洗脱法测定七叶神安片含量。

反相高效液相色谱梯度洗脱法测定注射用氨苄西林钠舒巴坦钠有关物质

目的建立用反相高效液相色谱梯度洗脱法测定注射用氨苄西林钠舒巴坦钠有关物质。方法色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱(UltimateTM AQ-C18,4.6mm×250mm,5μm),检测波长为254nm,采用A相[12%乙酸溶液:0.2mol/L磷酸二氢钾溶液:乙腈:水(0.5:50:50:900)]—B相[(12%乙酸溶液:0.2mol/L磷酸二氢钾溶液:乙腈:水(0.5:50:400:550)]为流动相进行梯度洗脱(A相起始比例为90%,保持15min,25min内下降至0,保持该比例10min),流速为1.0ml/min,柱温为25℃,进样量为20μl。结果舒巴坦的碱性降解产物(舒巴坦青霉胺)、舒巴坦、氨苄西林的碱性降解产物、氨苄西林、头孢拉定和氨苄西林二聚物等相关物质在本色谱条件下均能实现较好分离,杂质相对检出率较高。结论本法基线稳定,重现性好,准确度高,可同时测定氨苄西林钠舒巴坦钠的有关物质。

反相高效液相色谱梯度洗脱法测定氨苄西林丙磺舒分散片含量

目的：研究相同色谱条件下同时测定氨苄西林丙磺舒分散片中氨苄西林与丙磺舒的含量。方法：色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱(4．6mm×15mm，填料：Discovery，粒度：5μm)，检测波长为232nm，采用A相(含20％B相的乙腈溶液)-B相(pH3．5的0．01mol·L^-1磷酸二氢钾溶液)为流动相进行梯度洗脱(A相起始比例为5％，6．5min内上升至55％，保持该比例至丙磺舒洗脱)，流速为1．2mL·min-1，柱温为40℃，进样量为10μL。结果：氨苄西林在0．08-2．5mg·mL-1范围内，浓度与峰面积呈良好线性关系(r＝0．9991，n＝6)；丙磺舒在0．03-1．1mg·mL-1范围内，浓度与峰面积呈良好线性关系(r＝1．000，n＝6)。平均回收率分别为：氨苄西林99．5％，丙磺舒99．4％。结论：本法快速、准确，可同时测定氨苄西林与丙磺舒的含量。

超高效液相色谱在洗洁精表面活性剂检测中的应用

为了能够更加精准地检测洗洁精表面活性剂含量,提出超高效液相色谱在洗洁精表面活性剂检测中的应用研究。考虑到大部分洗洁精应用的表面活性物质均为甜菜碱或氧化胺类物质,设置了以甜菜碱和氧化胺类物质为核心的超高效液相色谱试剂,选择U3000高效液相色谱仪,日本新宇宙XP-302M电雾式检测器以及Acclaim Surfactant Plus分析柱作为具体的测试装置,对测试环境温度和U3000高效液相色谱仪的流速进行定值设置后,按照乙腈洗脱执行梯度对色谱柱进行处理后,将满足线性范畴的数据作为计算洗洁精表面活性剂含量的基础参数,带入到回归方程中,确定各表面活性剂含量,对应的检测结果误差稳定在0.015%以内,单一类别洗洁精表面活性剂含量检测结果误差稳定在0.003%以内。

离子对反相高效液相色谱梯度洗脱法分析测定硫酸博莱霉素

目的:研究应用反相离子对色谱梯度洗脱法以较快速度分离硫酸博莱霉素组分,并尝试梯度洗脱条件下测定其有效成分A_2、B_2的含量。方法:色谱柱为八烷基硅烷键合硅胶柱(4.6mm×150 mm,填料:Eclipse XDB,粒度:5μm),检测波长为254nm,采用甲醇-庚烷磺酸钠溶液为流动相进行梯度洗脱(甲醇起始比例为30％,35 min内上升至40％),流速为1.2mL·min^(-1),柱温为30℃,进样量为10μL。结果:博莱霉素A_2、B_2、A_5、B_4、去甲基A_2等组分在此条件下基本实现基线分离,A_2、B_2在0.1～2.0 mg·mL^(-1)范围内,浓度与峰面积均呈良好线性关系(r均为0.999 9)。结论:本法可在较短时间内使博莱霉素组分得到良好分离。

反相高效液相色谱梯度洗脱法测定安神补心片中丹参酮Ⅱ_A和丹酚酸B含量

目的测定安神补心片中丹参酮ⅡA和丹酚酸B的含量。方法采用Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),梯度洗脱,流动相A为乙腈、B为水、C为甲醇、柱温35℃,检测波长为270 nm。结果丹参酮ⅡA进样量在0.013 21～0.264 2μg范围内,丹酚酸B进样量在0.061 10～1.222 0μg范围内与峰面积均有较好的线性关系,加样回收率丹参酮ⅡA为98.60%,丹酚酸B为98.58%。结论该方法结果准确、快速,可作为安神补心片中丹参酮ⅡA和丹酚酸B的含量测定方法。

反相高效液相色谱梯度洗脱法测定制剂中的硝酸异山梨酯及其降解产物

硝酸异山梨酯(ISDN)为血管扩张药物,用于治疗心绞痛。其降解产物5-硝酸异山梨酯(5-ISMN)比其它冠状血管扩张剂更有效,且毒性小。Mizuno等用HPLC法研究了ISDN及其降解产物在水溶液中的稳定性,但分离时间较长。Dimov等报道用梯度HPLC法在18min内分离了硝酸单取代异山梨酯、醋酸单取代异山梨酯和硝酸。

茵陈蒿汤水提液中各成分的反相高效液相色谱梯度洗脱法分析

目的:确定茵陈蒿汤水提液的高效液相色谱分析方法。方法:色谱柱为LichrospherC18柱(4.6mm×25cm,5臁m),采用A相(0.5磷酸水溶液)、B相(0.5‰磷酸甲醇溶液)为流动相进行非线性梯度洗脱(A相起始比例为90%,50min内下降至40%,其后的5min内下降至28.5%);流速1ml/min,检测波长为254nm,柱温:25℃,进样量:5臁L=果:运用该梯度洗脱方法能较好的分离茵陈蒿汤水提液中的各个成分。结论:本方法较完整的呈现了茵陈蒿汤水提液的化学成分组成,能为茵陈蒿汤的指纹图谱研究提供参考。

反相高效液相色谱梯度洗脱法测定七叶神安胶囊中人参皂苷Rb_3的含量

目的建立反相高效液相色谱梯度洗脱法测定七叶神安胶囊中人参皂苷Rb3的含量。方法色谱柱为Hypersil C18（5μm，4．6mm×200mm），流动相为乙腈-0．2％磷酸溶液梯度洗脱：0～14min，19→33；14-16min，33→49，流速为1．0ml／min，检测波长为203nm，柱温为30℃。结果人参皂苷Rb3进样量在1．7696～10．6176μg（r=0．9999）的范围内线性关系良好，平均回收率为98．22％，RSD=1．26％。结论该方法简便、准确、重现性好，可用于七叶神安胶囊的质量控制。

反相高效液相色谱梯度洗脱法同时测定三七不同饮片中人参皂苷Rg_1,Rb_1含量

目的 建立三七中人参皂苷Rg1，Rb1的含量测定方法，并比较加工炮制对三七不同饮片中人参皂苷Rg1，Rb1含量的影响。方法 Zorbax SB-C18分析柱（4．6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈-0．05％磷酸溶液梯度洗脱：0～7min．25：75；7～10min，35：65，流速为1．1ml／min，柱温为室温，检测波长为205nm。结果 人参皂苷Rg1，Rb1回收率分别为99.46％，98.79％，RSD分别为1．87％，2．13％。各样品中，以三七生药粉中人参皂苷Rg1，Rb1含量为高。结论 该方法稳定、准确、简便、快速，为三七质量评价提供参考。三七临床以生品打粉入药为宜。

反相高效液相色谱中流动相线性梯度洗脱条件下溶质保留时间预测的新方法

在计算溶质的梯度保留时间时 ,根据流动相在色谱柱内的分布规律 ,对溶质在色谱柱内的迁移距离和流动相梯度同时进行校正 ,从而建立了一种预测溶质线性梯度洗脱条件下保留时间的新方法。该方法在不同的仪器系统中 ,对于弱保留和强保留溶质在不同线性梯度洗脱条件下保留时间的预测 ,都具有良好的准确度。以 15种氨基酸和 8种苯的同系物为例 ,该方法对于弱保留溶质保留时间的预测 ,相对平均误差分别为 3 70 %和 4 90 % ,远小于文献方法得到的结果 (2 3 6 1%和 31 16 % ) ;对于强保留溶质保留时间的预测 ,相对平均误差分别为 0 2 1%和6 0 1% ,略小于文献方法得到的结果 (0 81%和 6 6 9% )。

反相高效液相色谱双梯度洗脱分离肽混合物及质谱分析

复杂肽段混合物的有效分离是高覆盖率地鉴定蛋白质混合物的前提。"鸟枪法"(Shotgun)蛋白质组学研究策略通常采用蛋白酶切、二维液相色谱-串联质谱分析肽段混合物从而鉴定蛋白质,其中高效率地分离肽段混合物是关键步骤之一。本文通过pH梯度结合有机溶剂梯度的反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行一维液相色谱分离,按等时间间隔收集馏分并将一个梯度的前段的一个馏分与后段一个馏分混合,然后进行纳升级液相色谱-质谱联用(nanoRPLC-MS/MS)分析。将该方法应用于酵母蛋白质的分离和鉴定,实验结果为:与常规的强阳离子色谱-反相液相色谱-质谱分离鉴定方法相比,采用pH梯度结合有机相梯度的RP-HPLC-RPLC-MS分离鉴定方法多鉴定到567个酵母蛋白质(簇,含有3 035个唯一肽段);其中鉴定到肽段的pI分布范围为3.42～12.01,相对分子质量范围为587.67～3 499.79;蛋白质的pI分布范围为3.82～12.19,相对分子质量范围为3 446.55～432 905。该结果表明这种方法在复杂体系蛋白质组分离鉴定中具有明显的优势,在蛋白质组学研究中有较好的应用前景。

高效液相色谱梯度洗脱法测定不同中国产西红花药材中西红花苷Ⅰ、Ⅱ的含量

目的建立高效液相色谱梯度洗脱法测定国产西红花中西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的含量。方法采用反相高效液相色谱法,以Agilent ZORBAX StableBond SB-Aq(4.6 mm×250 mm,5μm)柱为色谱柱;流动相为0.01%甲酸(A)-乙腈(B),进行梯度洗脱,0～8 min(75%～70%A),8～10 min(70%～60%A),10～25 min(60%～30%A);流速:1.0 mL.min-1;进样量:5μL;测定波长:440 nm;柱温:30℃。结果西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的保留时间大约分别为5.71 min和8.83 min。以峰面积对进样浓度线性回归,西红花苷Ⅰ回归方程:Y=24.93X-0.254 3,r=1.000,线性范围3.125～200μg.mL-1,西红花苷Ⅱ回归方程:Y=36.11X+8.370,r=1.000,线性范围3.125～200μg.mL-1。西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ的回收率分别为101.1%和100.2%,RSD分别为1.7%和1.4%。结论本方法可用于测定不同国产西红花药材中西红花苷Ⅰ、Ⅱ的含量,本方法操作简便,结果准确。

高效液相梯度洗脱法测定氨苄西林丙磺舒分散片中的有关物质

目的用高效液相色谱法测定氨苄西林丙磺舒分散片中的有关物质。方法色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱;检测波长232nm;采用A相(含20%磷酸盐缓冲液的乙腈溶液)B相磷酸盐缓冲液[水1mol·L-1磷酸二氢钾溶液1mol·L-1醋酸溶液(909∶10∶1)]为流动相进行梯度洗脱(A相的起始比例为10%,30min内上升至90%);流速为1mL·min-1;柱温为30℃;进样量为10μL。结果本法实现了在较短时间内将原料中引入的有关物质和强力破坏条件下产生的降解产物与主成分之间的基线分离。结论本色谱条件适合氨苄西林丙磺舒分散片中的有关物质的测定。

梯度洗脱反相高效液相色谱法测定头孢尼西钠有关物质

目的:建立梯度洗脱反相高效液相色谱法测定头孢尼西钠中的有关物质。方法:采用梯度洗脱方法,用 C_(18)BDS(Thermo Hypersil-Keystone,250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以0.01 mol·L^(-1)磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节 pH 值至3.5)-乙腈(95:5)为流动相 A,乙腈为流动相 B;以1.0 mL·min^(-1)的流速进行梯度洗脱,梯度洗脱条件:0～6 min,A 为94%;6～20 min,A 从94%→30%;20～27 min,A 为70%;27～28 min,A 从70%→94%;28～35 min,A 为94%;检测波长为272 nm。通过加热破坏的方法,制备系统适用性溶液,对已知杂质进行定位。结果:在选定的色谱条件下,3-TSA、7-ACA 2个相邻杂质分离度达到4.1,在等度洗脱时保留时间超过80 min 的甲酰头孢尼西缩短为21 min。通过加热破坏的方法,可以将不易得到对照品的3-TSA 进行准确定位。结论:该方法测定灵敏,选择性、重现性好,即可以将不易分离的相邻杂质进行有效分离,又可大大缩短分析时间,符合常规检验的要求。

高效液相色谱梯度洗脱法测定大鼠胆汁中9-硝基喜树碱含量

目的建立大鼠胆汁中 9 硝基喜树碱的高效液相色谱梯度洗脱方法。方法胆汁样品经乙腈 水 ( 1∶1 )稀释后 ,直接进样。检测波长为 370nm ,采用HypersilBDSC18柱 ( 5 μm,1 5 0mm× 4 6mmI D )分离 ,使用以乙腈 2 %甲酸水溶液为流动相的二元梯度洗脱方法。结果线性范围为 0 5～2 5 μg/mL,定量限为 0 5 μg/mL。结论本法操作简便 ,成功应用于胆汁中 9 硝基喜树碱的含量的测定及胆汁中 9 硝基喜树碱代谢物的初步研究。

梯度洗脱反相高效液相色谱法测定粉萆薢与绵萆薢中薯蓣皂苷含量

目的 建立粉萆薢和绵萆薢中薯蓣皂苷含量的高效液相色谱测定方法.方法 色谱柱：Gemini C18（250 mm×4.60 mm,5 μm）;流动相：乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;检测波长：203 nm;流速：0.8 ml/min;柱温：30 ℃.结果 薯蓣皂苷与其他成分分离良好,色谱峰面积与浓度呈良好的线性关系,线性范围为7.8～156.0 μg/ml（r=0.999 4）,平均回收率分别为97.99%、97.82%.结论 梯度洗脱反相高效液相色谱法准确、简便、重现性好,可用于萆薢类药材的质量评价.