浅析反相高效液相色谱中样品溶剂对中药成分色谱保留行为的影响

目的探究反相高效液相色谱(RP-HPLC)中样品溶剂对中药成分色谱保留行为的影响。方法选取2020版《中国药典》一部收载的5种中药,参照各药材含量测定项下要求进行HPLC法测定,初步研究龙胆苦苷-龙胆、紫丁香苷-刺五加、松脂醇二葡萄糖苷-杜仲、秦皮甲素-秦皮、腺苷-冬虫夏草受样品溶剂影响产生的色谱峰异常行为,深入探讨溶剂效应的机理,并提出解决方案。结果5种中药化学成分的色谱异常行为表现为保留时间漂移、色谱峰展宽、前延及裂分,产生上述异常现象的根本原因是溶解样品的溶剂和流动相存在某种不匹配,导致样品在溶剂与流动相中所处状态出现差异(溶剂效应)。消除溶剂效应的首选方法是用流动相或相近的溶剂溶解样品,此外,减小进样量和使用溶剂效应消除器可作为辅助手段。结论溶剂效应容易引起色谱峰异常,影响对化学成分定性和定量的准确性,应该在日常中药分析工作中予以重视。

反相高效液相色谱法测定抗体药物中组氨酸的含量

目的建立并验证用于抗体药物中组氨酸含量测定的反相高效液相色谱法(reverse-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)。方法利用柱前衍生法建立组氨酸含量检测方法,并对该方法的专属性、准确度、重复性、中间精密度、线性、工作范围和耐用性进行验证。结果该方法专属性良好,在组氨酸的保留时间范围内,无基质缓冲液组分和分析溶剂的干扰,且供试品和对照品的组氨酸保留时间偏差为0.45%,符合可接受标准(≤5%)。5个水平的加标溶液(70%,85%,100%,115%和130%)的回收率在93.0%~102.4%之间,且3次独立测定各水平浓度的变异系数均小于5%,符合准确度、线性和检测范围的验证要求(回收率在95%~105%之间,变异系数≤5%)。组氨酸浓度在2.170~4.033 mg/ml(相当于每次进样10.85~20.15μg)范围内,进样量与峰面积呈良好的线性关系(R 2=0.995),且y轴截距的95%置信区间包含原点。同一份供试品溶液的6次独立测定浓度的变异系数为1.2%,符合重复性的可接受标准(≤5%);两名实验人员分别在3个工作日对同一份供试品溶液的18次独立测定的浓度的变异系数为3.1%,符合中间精密度的可接受标准(≤10%)。衍生后的待测品和对照品溶液分别在(5±3)℃密封瓶条件下在自动进样器中暂存24 h和26 h后的回收率分别为100.3%和100.2%,符合耐用性的可接受标准(95%~105%)。结论建立了柱前衍生RP-HPLC检测抗体药物中组氨酸含量的方法,该方法重现性好、专属性强、精密度及准确度高,可对其组氨酸进行质量控制。

反相超高效液相色谱分析小麦麦谷蛋白组分研究

为利用反相超高效液相色谱(RP-UPLC)分离、定量分析小麦麦谷蛋白组分,研究了流动相比例、洗脱时间、柱温、流速和进样量对色谱分离结果的影响,并利用新建立的分离麦谷蛋白亚基的方法分析了基因型及环境对麦谷蛋白组分的影响。结果表明,最优的洗脱程序为79%的流动相A(含0.08%三氟乙酸的超纯水)和21%的流动相B(含0.08%三氟乙酸的乙腈溶液)洗脱5 min,在25 min内,流动相A逐渐降低至48%,流动相B逐渐增加至52%,最后维持5 min,柱温、流速和进样量分别为55℃、0.5 mL·min^(-1)和16μL,该方法可以精确分离至少11种高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)。单个HMW-GS的相对含量和HMW-GS与低分子量麦谷蛋白亚基(LMW-GS)的比值均受基因型和环境的影响,且基因型的影响大于环境。

反相高效液相色谱法测定大豆磷脂中磷脂酰胆碱含量

建立一种通过反相高效液相色谱-紫外测定大豆磷脂中磷脂酰胆碱含量的方法。结果表明:方法的流动相为异丙醇-甲醇-水,且大豆磷脂酰胆碱在0.4615~2.3075 mg/mL范围内线性关系良好(R^(2)=0.9977);方法的检出限为1.4 mg/g、平均回收率为99.8%、相对标准偏差(RSD)为2.41%。方法的精确度高、重复性好,适用于大豆磷脂中磷脂酰胆碱含量的测定。

碱性药物反相高效液相色谱分析的挑战以及改进方法

反相高效液相色谱(RP-HPLC)是广泛应用于小分子药物分析的一种有效方法。然而占药物类型多数的碱性化合物药物在反相色谱分析中经常会出现色谱峰形差、拖尾严重、载样量低现象,而且碱性越强,拖尾发生频率越大,这为碱性化合物的检测带来了难度。结合分析实验和相关文献,从高效液相色谱分析的两个关键因素(固定相、流动相)入手,总结碱性化合物在RP-HPLC分析中出现这些问题的原因和解决的方法,为今后的分离纯化制备工作提供相关经验。

反相高效液相色谱法测定饲料及饲料添加剂中阿朴酯的含量

研究旨在建立一种反相高效液相色谱(RP-HPLC)法检测饲料及饲料添加剂中阿朴酯含量的方法。饲料或饲料添加剂样品经水、甲基叔丁基醚-甲醇溶液提取,样液在50℃水浴中经氮气吹干(添加剂样品直接稀释),使用流动相稀释,定容,上机检测。结果显示,采用C30色谱柱、流动相甲基叔丁基醚-甲醇比例为15∶85时,阿朴酯能够与其他类胡萝卜素很好地分离。试验所用方法在0.04~10.00 mg/L浓度范围内线性关系良好,相关系数为0.999 98。样品中添加阿朴酯的加标回收率为86.0%~99.8%,方法检出限为0.15 mg/kg,方法定量限为0.40 mg/kg。研究表明,试验所用方法操作简单、灵敏度高,能够检测饲料及饲料添加剂中的阿朴酯。

反相高效液相色潽法测定巴豆中木兰花碱的含量

目的:建立巴豆中木兰花碱的含量测定方法。方法:采用反相高效液相色潽法,Agilent EclipseXDB-C18色谱柱,以甲醇-0.1%磷酸水溶液为流动相,柱温30℃;体积流量1.0 mL.min-1;检测波长220 nm。结果:木兰花碱在(0.098～1.223)μg范围内线性关系良好(r=0.999 7),平均加样回收率为99.2%,RSD为3.2%(n=6)。结论:该法简便快速,准确实用,可用于巴豆药材的质量控制。

反相高效液相色谱法测定铁叶酸片中叶酸含量

依据《2020版中国药典》二部叶酸片项下含量测定检测复方铁叶酸片中叶酸含量,叶酸结果由于受到亚铁离子的影响,检测结果会比理论值显著偏低。本文对药典方法进行优化,通过采用加入乙二胺四乙酸二钠(EDTA)络合剂将亚铁离子掩蔽排除亚铁离子的影响,采用超声提取和高效液相色谱-二极管阵列检测器(High Performance Liquid Chromatography with Diode-Array Detection, HPLC-DAD)检测叶酸含量,可以显著改善叶酸的检测结果准确性。方法简单、重复性好,可以满足含铁叶酸片中叶酸含量的检测。

反相高效液相色谱法测定东方草莓中儿茶素的含量

建立东方草莓中（＋）-儿茶素的含量测定方法。采用AgilentZORBAXSB—C18色谱柱（4．6mm×150mm，5μm）分离；以乙腈-0．1％磷酸水为流动相进行梯度洗脱，流速为1mL／min，检测波长为280nm，对10批东方草莓中的（＋）-儿茶素进行了含量测定。结果表明：（＋）-儿茶素的保留时间为14．543min，其线性范围为0．0512～0．6400μg（R2=0．9999）；加样回收率为99．70％（RSD2．67％）。所建方法操作简单，稳定可靠，可用于东方草莓的质量评价。

灯盏花素脂质体含量测定及包封率测定的反相高效液相色谱法分析

目的 分析灯盏花素脂质体含量及包封率的反相高效液相色谱法测定效果。方法 采用反透析法测定灯盏花素纳米脂质体的包封率。色谱柱：Hypersil C18柱（4.6mm×250mm,5μm）;柱温：40℃;流动相：乙腈—水—冰醋酸—三乙胺（16∶80∶2∶1）;流速：1ml/min;紫外线检测波长：300nm;进样量：20μl。结果 在此色谱条件下,灯盏花素与辅料之间得到良好的分离,灯盏花乙素在1.0~50μl/ml浓度范围内线性关系良好（r=0.9999,n=6）,平均回收率为100.2%,日内以及日间RSD均〈2.0%（n=5）。结论 反相高效液相色谱法具有灵敏度高、加样回收率好、线性范围宽、简便快速以及结果精确可靠等优点,可以用来测定灯盏花素纳米脂质体药物含量以及包封率。

反相高效液相色谱法测定化妆品中的24种防腐剂

建立了同时检测化妆品中24种防腐剂含量的反相高效液相色谱法（RP—HPLC）。采用KromasilC18（4．6mm×250mm，5μm）色谱柱，以磷酸盐缓冲溶液（pH=4．26）为流动相，梯度洗脱。样品经甲醇超声提取，然后采用RP—HPLC-二极管阵列检测法测定，对样品前处理和色谱条件进行研究和优化。方法的相对标准偏差为1．3％～3．3％；回收率为90．6％～97．8％；各种防腐剂的线性相关系数≥0．9997，具有较高的准确度和精密度，可用于化妆品中24种防腐剂含量的分析。

反相高效液相色谱/质谱法同时测定鸡肉中5种喹诺酮药物残留

采用反相高效液相色谱／四级杆串联质谱（RP-HPLC／MS／MS）同时测定鸡肉中的5种喹诺酮药物（quinolones，QNs）。均质后的鸡肉样品采用磷酸盐缓冲溶液和乙腈的混和溶液提取。提取液经正己烷液-液分配（LLP）去除脂肪后，用C18固相萃取（SPE）柱净化，氨化甲醇洗脱，洗脱液用氮气吹干，流动相定容后，分析物采用LC／MS／MS电喷雾电离（ESI），正离子，多反应监测（MRM）模式检测，外标法定量。在添加浓度2．5～10μg/kg范围内，5种QNs的回收率在79．8％～95．1％之间；相对标准偏差（RSD）均小于11．7％。环丙沙星、丹诺沙星、恩诺沙星检出限（LOD）为0．5μg／kg，沙托沙星为1．0μg／kg，氟甲喹为0．1μg／kg。

天然酚酸类化合物的反相高效液相色谱分析

采用反相高效液相色谱法梯度洗脱 ,对 12种天然酚酸进行定性定量分析研究。通过色谱条件的优化 ,确定了最佳的分离条件 ;同时探讨了流动相的酸度对分离结果的影响 ,以及酚酸结构与保留行为之间的关系。实验中以确定的最佳分离条件对 12种天然酚酸进行了定量分析 ,测定了各个化合物的回归方程、相关系数、线性范围、检测限和相对标准偏差。实验结果显示 ,各个化合物回归方程的相关系数r为 0 9980～ 0 9999,检测限为 0 96ng～ 4 10ng ,相对标准偏差RSD≤ 2 6 4 % ,满足定量分析要求。

反相高效液相色谱在发酵制备琥珀酸中的应用

对于生物法制备琥珀酸的微生物发酵体系,利用Alltech反相PrevailC18色谱柱,以2 5mmol/L磷酸二氢钾(pH 2 5 )作为流动相,在流速1mL/min时,于2 10nm处紫外检测器检测,能将发酵液中琥珀酸、甲酸、乙酸和乳酸完全分离并准确定量。琥珀酸等有机酸的回收率在96 %～10 4 %之间。本方法能够快速、精确测定发酵样品中主产物琥珀酸与其它有机酸含量。

用反相高效液相色谱-紫外检测法测定1-脱氧野尻霉素的含量

以0.05 mol/L HC l为溶剂提取蚕粉和桑叶粉中的1-脱氧野尻霉素(DNJ),并用9-芴基氯甲酸甲酯(FMOC)为衍化剂,在pH 8.5的硼酸盐缓冲液中进行衍生化反应,生成具有紫外吸收的DNJ-FMOC络合物,再用反相高效液相色谱-紫外检测法对其分离测定。结果表明,反应产物的色谱图分离效果良好,DNJ-FMOC的峰面积与DNJ浓度呈高度正相关关系,加样回收率平均为100.7%。精密度试验、稳定性试验、重现性试验、回收率试验表明,该方法稳定可靠,可以作为测定家蚕、桑叶及有关药物样品中DNJ含量的有效方法。

反相高效液相色谱法测定山楂中的有机酸

采用Hypersil ODS2（4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱,以磷酸盐缓冲溶液（pH=2.6）为流动相,流速0.8 mL/min,检测波长210 nm,建立了山楂中柠檬酸、苹果酸等有机酸的高效液相色谱分析方法.其中柠檬酸和苹果酸的线性范围分别为0.50～50.04 μg、0.10～10.00 μg;3个浓度水平的回收率分别为95.5%～96.6%、100.2%～103.7%,RSD分别为0.11%～0.38%、0.41%～2.53%;检出限分别为0.04 μg、0.03 μg（S/N=3）.测定了5种不同产地山楂果肉及山楂核中的柠檬酸、苹果酸的含量.所建立的方法快速﹑灵敏度高、重复性好,可用于山楂中有机酸的测定.

反相高效液相色谱法同时测定植物油中四种生育酚

建立了反相液相色谱法同时测定植物油中4种生育酚的方法。样品用甲醇超声提取,离心后取上清液氮吹至干,甲醇定容后过有机相滤膜,反相C30柱(4.6 mm i.d.×250 mm,5μm)分离,甲醇-水-叔丁基甲醚(60∶15∶25)作流动相等度洗脱,荧光检测(λex=290 nm,λem=340 nm)。结果表明,4种生育酚的质量浓度在0.050～100.0 mg/L范围内与峰面积呈良好的线性关系,线性相关系数(r2)大于0.999。在加标水平为0.50、50.0、500.0 mg/kg时,4种生育酚的平均加标回收率为81.3%～93.2%,相对标准偏差(RSD)小于6%,α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚及δ-生育酚的方法检出限(LOD)分别为0.10、0.05、0.05、0.02mg/kg。方法准确、灵敏、可靠,可应用于实际样品的分析。

水产食品中组胺的丹磺酰氯柱前衍生反相高效液相色谱测定方法的建立及应用

建立一种快速测定水产食品中组胺的丹磺酰氯柱前衍生反相高效液相色谱方法.该方法中样品经三氯乙酸提取、丹磺酰氯衍生,C18反相色谱柱分离,以70％乙腈和30％超纯水为流动相进行等度洗脱,254 nm波长处紫外检测.结果显示,组胺保留时间为5.5 min,组胺在1～500μg/rnL范围内线性系数为0.999 9,仪器检出限（RSN=3）为0.5 μg/mL,定量限（RSN=10）为1.0 μg/mL,且重复性良好;采用该方法测定了16种水产品和19种水产加工食品中的组胺,结果显示含量在0～～682.22 mg/kg之间;样品添加不同质量浓度组胺的回收率为89.54％～101.92％.结果表明,该方法快速准确、灵敏度高、重复性好,适用于水产食品中组胺的测定.采用该方法检测了鲣鱼、鲭鱼和蓝圆鲹在不同温度条件下的组胺变化情况,结果发现,3种鱼在低温贮藏条件下的组胺含量明显低于高温贮藏条件下的含量,表明低温贮藏可有效抑制组胺产生.

反相高效液相色谱法用于地钱中黄酮类化合物的分离与测定

采用反相高效液相色谱 ,在RP C1 8柱上以乙酸 甲醇 乙腈 磷酸 水为多元流动相 ,等度洗脱 ,在 30min内对地钱的黄酮提取物进行分离与测定 ,检测波长 35 0nm ,流速 0 .60mL/min ,采用校准曲线法对实际样品中的芹菜素、槲皮素和木犀草素进行定量分析。结果表明 :平均加标回收率 96.79%～ 1 0 1 .1 3% ,相对标准偏差 0 .66%～ 1 .5 2 %。

反相高效液相色谱-化学发光法测定复合维生素片剂中的维生素B_1和B_2

基于水溶性维生素在碱性介质中只有维生素B1(VB1)和维生素B2(VB2)可以被K3Fe(CN)6直接氧化产生化学发光的原理,建立了反相高效液相色谱(RP HPLC)分离柱后化学发光检测VB1和VB2的新方法,并成功应用于复合维生素B片剂中VB1和VB2的测定。该方法测定VB1,VB2的线性范围分别为1 0×10-3～1 0g/L和1 0×10-3～0 1g/L,检出限分别为2×10-4g/L和8×10-4g/L。对1 0×10-2g/LVB1,VB2溶液连续11次测定的相对标准偏差分别为2 8%,0 9%。