混合型离子交换反相吸附固相萃取-超高效液相色谱-三重四极杆质谱法测定水中23种非甾体抗炎药的残留

非甾体抗炎药(NSAIDs)作为一种新型有机污染物,在环境水体中普遍检出,对生态系统及人体健康造成潜在的威胁,开发准确、可靠的测定水中痕量非甾体抗炎药的检测方法至为重要.本文采用Oasis MCX固相萃取柱对水样进行富集,建立测定水中23种非甾体抗炎药的超高效液相色谱-三重四极杆质谱分析方法.采用酸性条件(pH=4)萃取水样,上样的流速为2 mL·min^(−1),用4 mL甲醇-4 mL5%氨水甲醇进行洗脱,浓缩定容后用ACQUITY UPLCTM BEH C18柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以2 mmol·L^(−1)乙酸铵+0.05%(V/V)甲酸水溶液-乙腈作为流动相进行梯度洗脱,多反应选择离子监测(MRM)模式进行检测,内标法定量.23种NSAIDs在相关线性范围内线性良好(r=0.9951—0.9992),回收率为80.2%—120%,相对标准偏差为0.4%—12.5%,方法检出限为0.20—4.84 ng·L^(−1).将该方法应用于10份地表水的检测,结果显示有10种NSAIDs检出,质量浓度在ND—83.5 ng·L^(−1)之间.该方法简单、灵敏、高效,可应用于环境水体中NSAIDs的检测.

浅析反相高效液相色谱中样品溶剂对中药成分色谱保留行为的影响

目的探究反相高效液相色谱(RP-HPLC)中样品溶剂对中药成分色谱保留行为的影响。方法选取2020版《中国药典》一部收载的5种中药,参照各药材含量测定项下要求进行HPLC法测定,初步研究龙胆苦苷-龙胆、紫丁香苷-刺五加、松脂醇二葡萄糖苷-杜仲、秦皮甲素-秦皮、腺苷-冬虫夏草受样品溶剂影响产生的色谱峰异常行为,深入探讨溶剂效应的机理,并提出解决方案。结果5种中药化学成分的色谱异常行为表现为保留时间漂移、色谱峰展宽、前延及裂分,产生上述异常现象的根本原因是溶解样品的溶剂和流动相存在某种不匹配,导致样品在溶剂与流动相中所处状态出现差异(溶剂效应)。消除溶剂效应的首选方法是用流动相或相近的溶剂溶解样品,此外,减小进样量和使用溶剂效应消除器可作为辅助手段。结论溶剂效应容易引起色谱峰异常,影响对化学成分定性和定量的准确性,应该在日常中药分析工作中予以重视。

高效液相色谱-质谱技术在蛋白质组学中的应用

蛋白质组学研究在生物医学领域发挥了重要作用,然而研究面临的主要难点在于其研究对象的复杂性和多样性。随着质谱技术的快速发展,高效液相色谱-质谱(HPLC-MS)分离分析复杂生物样品已经成为蛋白质组学研究的基础工具。蛋白质组学的研究从肽段分离,延伸到蛋白质和蛋白质复合物的分离,随着分析物的分子质量不断增大,其结构和组成复杂性也持续增加,分子特性也发生改变。面对不同的蛋白质组学研究对象,选择不同的分离模式、分离条件以及固定相参数是进行深度蛋白质组学研究的关键。本文综述了实验室常用的液相色谱分离模式,包括反相色谱(RPLC)、亲水相互作用色谱(HILIC)、疏水相互作用色谱(HIC)、离子交换色谱(IEC)和体积排阻色谱(SEC),以及其不同的组合模式与质谱联用在自下而上(bottom-up)分析、自上而下(top-down)分析、蛋白-蛋白相互作用分析中应用的研究。具体分析了色谱流动相与被分析对象之间的兼容性问题、色谱流动相与质谱兼容性问题,以及多维色谱中不同色谱模式之间流动相的兼容性问题。重点关注存在不兼容问题时研究者所提出的解决方案。此外,本文还评述了HPLC-MS结合样本前处理的方法在外泌体和单细胞蛋白质组学中的应用研究。总之,文章聚焦于近年来HPLC-MS技术在蛋白质组学中的研究进展,旨在为未来蛋白质组学领域的研究提供参考。

反相高效液相色谱法测定抗体药物中组氨酸的含量

目的建立并验证用于抗体药物中组氨酸含量测定的反相高效液相色谱法(reverse-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)。方法利用柱前衍生法建立组氨酸含量检测方法,并对该方法的专属性、准确度、重复性、中间精密度、线性、工作范围和耐用性进行验证。结果该方法专属性良好,在组氨酸的保留时间范围内,无基质缓冲液组分和分析溶剂的干扰,且供试品和对照品的组氨酸保留时间偏差为0.45%,符合可接受标准(≤5%)。5个水平的加标溶液(70%,85%,100%,115%和130%)的回收率在93.0%~102.4%之间,且3次独立测定各水平浓度的变异系数均小于5%,符合准确度、线性和检测范围的验证要求(回收率在95%~105%之间,变异系数≤5%)。组氨酸浓度在2.170~4.033 mg/ml(相当于每次进样10.85~20.15μg)范围内,进样量与峰面积呈良好的线性关系(R 2=0.995),且y轴截距的95%置信区间包含原点。同一份供试品溶液的6次独立测定浓度的变异系数为1.2%,符合重复性的可接受标准(≤5%);两名实验人员分别在3个工作日对同一份供试品溶液的18次独立测定的浓度的变异系数为3.1%,符合中间精密度的可接受标准(≤10%)。衍生后的待测品和对照品溶液分别在(5±3)℃密封瓶条件下在自动进样器中暂存24 h和26 h后的回收率分别为100.3%和100.2%,符合耐用性的可接受标准(95%~105%)。结论建立了柱前衍生RP-HPLC检测抗体药物中组氨酸含量的方法,该方法重现性好、专属性强、精密度及准确度高,可对其组氨酸进行质量控制。

反相超高效液相色谱分析小麦麦谷蛋白组分研究

为利用反相超高效液相色谱(RP-UPLC)分离、定量分析小麦麦谷蛋白组分,研究了流动相比例、洗脱时间、柱温、流速和进样量对色谱分离结果的影响,并利用新建立的分离麦谷蛋白亚基的方法分析了基因型及环境对麦谷蛋白组分的影响。结果表明,最优的洗脱程序为79%的流动相A(含0.08%三氟乙酸的超纯水)和21%的流动相B(含0.08%三氟乙酸的乙腈溶液)洗脱5 min,在25 min内,流动相A逐渐降低至48%,流动相B逐渐增加至52%,最后维持5 min,柱温、流速和进样量分别为55℃、0.5 mL·min^(-1)和16μL,该方法可以精确分离至少11种高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)。单个HMW-GS的相对含量和HMW-GS与低分子量麦谷蛋白亚基(LMW-GS)的比值均受基因型和环境的影响,且基因型的影响大于环境。

反相高效液相色谱法测定大豆磷脂中磷脂酰胆碱含量

建立一种通过反相高效液相色谱-紫外测定大豆磷脂中磷脂酰胆碱含量的方法。结果表明:方法的流动相为异丙醇-甲醇-水,且大豆磷脂酰胆碱在0.4615~2.3075 mg/mL范围内线性关系良好(R^(2)=0.9977);方法的检出限为1.4 mg/g、平均回收率为99.8%、相对标准偏差(RSD)为2.41%。方法的精确度高、重复性好,适用于大豆磷脂中磷脂酰胆碱含量的测定。

碱性药物反相高效液相色谱分析的挑战以及改进方法

反相高效液相色谱(RP-HPLC)是广泛应用于小分子药物分析的一种有效方法。然而占药物类型多数的碱性化合物药物在反相色谱分析中经常会出现色谱峰形差、拖尾严重、载样量低现象,而且碱性越强,拖尾发生频率越大,这为碱性化合物的检测带来了难度。结合分析实验和相关文献,从高效液相色谱分析的两个关键因素(固定相、流动相)入手,总结碱性化合物在RP-HPLC分析中出现这些问题的原因和解决的方法,为今后的分离纯化制备工作提供相关经验。

反相高效液相色谱法测定饲料及饲料添加剂中阿朴酯的含量

研究旨在建立一种反相高效液相色谱(RP-HPLC)法检测饲料及饲料添加剂中阿朴酯含量的方法。饲料或饲料添加剂样品经水、甲基叔丁基醚-甲醇溶液提取,样液在50℃水浴中经氮气吹干(添加剂样品直接稀释),使用流动相稀释,定容,上机检测。结果显示,采用C30色谱柱、流动相甲基叔丁基醚-甲醇比例为15∶85时,阿朴酯能够与其他类胡萝卜素很好地分离。试验所用方法在0.04~10.00 mg/L浓度范围内线性关系良好,相关系数为0.999 98。样品中添加阿朴酯的加标回收率为86.0%~99.8%,方法检出限为0.15 mg/kg,方法定量限为0.40 mg/kg。研究表明,试验所用方法操作简单、灵敏度高,能够检测饲料及饲料添加剂中的阿朴酯。

反相高效液相色谱法测定呋喃西林中有关物质

建立反相高效液相法测定呋喃西林含量和有关物质的方法。采用Phenomenex Synergi Max-RP C12色谱柱(250 mm×4.6 mm,4μm)为分离柱,以乙腈-水(30∶70)为流动相,流量为1.0 mL/min,检测波长为375 nm,色谱柱温度为30℃。在该色谱条件下,呋喃西林色谱峰与相邻杂质峰的分离度大于1.5,呋喃西林的质量浓度在1.04~104.0μg/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好(r=0.999 2),检出限为0.3μg/mL。样品中单一杂质测定值的相对标准偏差为6.5%(n=6),杂质总和测定值的相对标准偏差为4.6%(n=6),平均加标回收率为100.4%~101.3%。该方法操作简单,专属性强,准确性好,可有助于控制呋喃西林的质量。

反相高效液相色谱法测定铁叶酸片中叶酸含量

依据《2020版中国药典》二部叶酸片项下含量测定检测复方铁叶酸片中叶酸含量,叶酸结果由于受到亚铁离子的影响,检测结果会比理论值显著偏低。本文对药典方法进行优化,通过采用加入乙二胺四乙酸二钠(EDTA)络合剂将亚铁离子掩蔽排除亚铁离子的影响,采用超声提取和高效液相色谱-二极管阵列检测器(High Performance Liquid Chromatography with Diode-Array Detection, HPLC-DAD)检测叶酸含量,可以显著改善叶酸的检测结果准确性。方法简单、重复性好,可以满足含铁叶酸片中叶酸含量的检测。

反相高效液相色谱法测定化妆品中的24种防腐剂

建立了同时检测化妆品中24种防腐剂含量的反相高效液相色谱法（RP—HPLC）。采用KromasilC18（4．6mm×250mm，5μm）色谱柱，以磷酸盐缓冲溶液（pH=4．26）为流动相，梯度洗脱。样品经甲醇超声提取，然后采用RP—HPLC-二极管阵列检测法测定，对样品前处理和色谱条件进行研究和优化。方法的相对标准偏差为1．3％～3．3％；回收率为90．6％～97．8％；各种防腐剂的线性相关系数≥0．9997，具有较高的准确度和精密度，可用于化妆品中24种防腐剂含量的分析。

反相高效液相色谱法测定山楂中的有机酸

采用Hypersil ODS2（4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱,以磷酸盐缓冲溶液（pH=2.6）为流动相,流速0.8 mL/min,检测波长210 nm,建立了山楂中柠檬酸、苹果酸等有机酸的高效液相色谱分析方法.其中柠檬酸和苹果酸的线性范围分别为0.50～50.04 μg、0.10～10.00 μg;3个浓度水平的回收率分别为95.5%～96.6%、100.2%～103.7%,RSD分别为0.11%～0.38%、0.41%～2.53%;检出限分别为0.04 μg、0.03 μg（S/N=3）.测定了5种不同产地山楂果肉及山楂核中的柠檬酸、苹果酸的含量.所建立的方法快速﹑灵敏度高、重复性好,可用于山楂中有机酸的测定.

反相高效液相色谱/质谱法同时测定鸡肉中5种喹诺酮药物残留

采用反相高效液相色谱／四级杆串联质谱（RP-HPLC／MS／MS）同时测定鸡肉中的5种喹诺酮药物（quinolones，QNs）。均质后的鸡肉样品采用磷酸盐缓冲溶液和乙腈的混和溶液提取。提取液经正己烷液-液分配（LLP）去除脂肪后，用C18固相萃取（SPE）柱净化，氨化甲醇洗脱，洗脱液用氮气吹干，流动相定容后，分析物采用LC／MS／MS电喷雾电离（ESI），正离子，多反应监测（MRM）模式检测，外标法定量。在添加浓度2．5～10μg/kg范围内，5种QNs的回收率在79．8％～95．1％之间；相对标准偏差（RSD）均小于11．7％。环丙沙星、丹诺沙星、恩诺沙星检出限（LOD）为0．5μg／kg，沙托沙星为1．0μg／kg，氟甲喹为0．1μg／kg。

反相高效液相色谱在发酵制备琥珀酸中的应用

对于生物法制备琥珀酸的微生物发酵体系,利用Alltech反相PrevailC18色谱柱,以2 5mmol/L磷酸二氢钾(pH 2 5 )作为流动相,在流速1mL/min时,于2 10nm处紫外检测器检测,能将发酵液中琥珀酸、甲酸、乙酸和乳酸完全分离并准确定量。琥珀酸等有机酸的回收率在96 %～10 4 %之间。本方法能够快速、精确测定发酵样品中主产物琥珀酸与其它有机酸含量。

反相高效液相色谱法用于地钱中黄酮类化合物的分离与测定

采用反相高效液相色谱 ,在RP C1 8柱上以乙酸 甲醇 乙腈 磷酸 水为多元流动相 ,等度洗脱 ,在 30min内对地钱的黄酮提取物进行分离与测定 ,检测波长 35 0nm ,流速 0 .60mL/min ,采用校准曲线法对实际样品中的芹菜素、槲皮素和木犀草素进行定量分析。结果表明 :平均加标回收率 96.79%～ 1 0 1 .1 3% ,相对标准偏差 0 .66%～ 1 .5 2 %。

反相高效液相色谱法同时测定植物油中四种生育酚

建立了反相液相色谱法同时测定植物油中4种生育酚的方法。样品用甲醇超声提取,离心后取上清液氮吹至干,甲醇定容后过有机相滤膜,反相C30柱(4.6 mm i.d.×250 mm,5μm)分离,甲醇-水-叔丁基甲醚(60∶15∶25)作流动相等度洗脱,荧光检测(λex=290 nm,λem=340 nm)。结果表明,4种生育酚的质量浓度在0.050～100.0 mg/L范围内与峰面积呈良好的线性关系,线性相关系数(r2)大于0.999。在加标水平为0.50、50.0、500.0 mg/kg时,4种生育酚的平均加标回收率为81.3%～93.2%,相对标准偏差(RSD)小于6%,α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚及δ-生育酚的方法检出限(LOD)分别为0.10、0.05、0.05、0.02mg/kg。方法准确、灵敏、可靠,可应用于实际样品的分析。

用反相高效液相色谱-紫外检测法测定1-脱氧野尻霉素的含量

以0.05 mol/L HC l为溶剂提取蚕粉和桑叶粉中的1-脱氧野尻霉素(DNJ),并用9-芴基氯甲酸甲酯(FMOC)为衍化剂,在pH 8.5的硼酸盐缓冲液中进行衍生化反应,生成具有紫外吸收的DNJ-FMOC络合物,再用反相高效液相色谱-紫外检测法对其分离测定。结果表明,反应产物的色谱图分离效果良好,DNJ-FMOC的峰面积与DNJ浓度呈高度正相关关系,加样回收率平均为100.7%。精密度试验、稳定性试验、重现性试验、回收率试验表明,该方法稳定可靠,可以作为测定家蚕、桑叶及有关药物样品中DNJ含量的有效方法。

柱前衍生-反相高效液相色谱法测定不同方法煮制的猪肉及其汤汁中的游离氨基酸

建立了反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离检测用不同方法煮制的猪肉及其汤汁中17种游离氨基酸的方法。样品经6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生后,采用Nova-PakTM C18色谱柱分离,以AccQ.Tag Eluent A稀释液、乙腈和超纯水为流动相,梯度洗脱,检测波长为248 nm,在47 min内实现了17种氨基酸衍生物的基线分离。各氨基酸在1～100μmol/L(胱氨酸在0.5～50μmol/L)范围内呈现出良好的线性关系,相应的线性相关系数(r2)均大于0.99;17种氨基酸的检出限(以信噪比为3计)为0.29～0.96μmol/L;在汤汁中的加标回收率为86.5%～101.0%。该方法前处理过程简单,分离效果好,是检测肉及其汤汁中氨基酸的有效手段,可应用于肉制品的质量评定和工艺优化。

反相高效液相色谱法测定黄酒中的有机酸

建立了1种利用反相高效液相色谱法同时测定黄酒中9种有机酸的方法。应用反相C18色谱柱(AgilentZorbaxSB-C18250×4.6mm),以0.08mol/LKH2PO4为流动相,紫外检测波长215nm,将黄酒中草酸、酒石酸、丙酮酸、苹果酸、α-酮戊二酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、琥珀酸一次性分离;并测定了国内市售的3种黄酒中的有机酸含量。除丙酮酸外各种有机酸的回收率>90%,变异系数<4%。该方法简便、快速、准确。

反相高效液相色谱法测定丙酸发酵液中的有机酸

对于生物法制备丙酸的微生物发酵体系，利用Waters Atlantis dC18反相色谱柱，以0．01mol／LKH2PO4缓冲液（pH2．8）-乙腈（95：5，V/V）作流动相，在流速为1．0mL／min，柱温为25℃时，于紫外波长215nm处检测，9min内发酵液中的草酸、甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸和丙酸能得到良好分离。6种有机酸线性相关系数均在0．9992-1．0000之间；方法的回收率为99％～102％；RSD为0．56～1．66。本方法能够简便、快速测定丙酸发酵体系中主产物丙酸与其它有机酸含量，适于指导整个发酵过程条件的优化及发酵产物的监控。