基于反相高效液相色谱法的面团黏性与小麦醇溶蛋白组成关系研究

以74份不同黏性等级的小麦品种(系)为研究材料,采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法分离不同黏性小麦品种的醇溶蛋白特征图谱,并进行面团黏性、醇溶蛋白组分含量与小麦面粉品质性状的相关性分析,以期建立采用少样本量快速准确识别面团黏性的方法。结果表明,经RP-HPLC分离后,ω-、α/β-和γ-醇溶蛋白3个组分在图谱上清晰可见;不同黏性等级小麦材料的醇溶蛋白得到了不同的特征图谱,黏性较大的小麦ω-醇溶蛋白的组分峰数较多,总峰面积较大;ω-醇溶蛋白在不同黏性等级小麦材料间存在显著差异。相关性分析结果表明,面团黏性与ω-醇溶蛋白相对含量呈极显著正相关,与α/β-和γ-醇溶蛋白相对含量相关性不显著;ω-醇溶蛋白相对含量与沉淀值、形成时间、稳定时间、能量、拉伸阻力和最大拉伸阻力均呈极显著负相关,与蛋白质、湿面筋含量均呈显著正相关,与弱化度呈极显著正相关;ɑ/β-醇溶蛋白相对含量与蛋白质、湿面筋含量均呈极显著正相关;γ-醇溶蛋白相对含量与小麦各品质性状均无显著相关性。可见,面团黏性主要与ω-醇溶蛋白相对含量有关,ω-醇溶蛋白对面团质量有弱化作用。

反相高效液相色谱法同时测定五味香连丸中10种成分含量

目的建立同时测定五味香连丸中盐酸小檗碱、黄连碱、巴马汀、延胡索乙素、木香烃内酯、去氢木香内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素、芍药苷10种成分含量的反相高效液相色谱法。方法色谱柱为Waters SunFire C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5µm),流动相为含0.02%三乙胺的0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调pH至3.5)-乙腈(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,柱温为35℃,检测波长为225 nm,进样量为10µL。结果盐酸小檗碱、黄连碱、巴马汀、延胡索乙素、木香烃内酯、去氢木香内酯、吴茱萸碱、吴茱萸次碱、柠檬苦素、芍药苷的质量浓度分别在6.852~51.39µg/mL、2.956~22.17µg/mL、2.918~21.88µg/mL、4.643~34.82µg/mL、4.871~36.53µg/mL、4.007~30.05µg/mL、4.519~33.89µg/mL、4.482~33.62µg/mL、2.724~20.43µg/mL、2.809~21.07µg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.9992,n=6);定量限分别为0.66,0.31,0.29,0.45,0.48,0.41,0.42,0.46,0.27,0.28µg/mL;精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于2.0%(n=6);回收率分别为100.36%,98.74%,98.71%,99.67%,99.86%,99.59%,98.70%,98.38%,98.25%,98.72%,RSD分别为0.89%,1.02%,1.04%,1.17%,0.84%,1.15%,1.33%,1.20%,1.07%,1.23%(n=6)。3批样品中上述成分的平均含量分别为1.165~1.192 mg/g、0.5231~0.5276 mg/g、0.4997~0.5011 mg/g、0.6814~0.6889 mg/g、0.6977~0.7002 mg/g、0.6068~0.6134 mg/g、0.5801~0.5837 mg/g、0.4277~0.4422 mg/g、0.4101~0.4165 mg/g、0.4002~0.4013 mg/g(n=2)。结论所建立的方法简便可行、结果准确可靠、稳定性好,可用于同时测定五味香连丸中10种成分的含量。

反相高效液相色谱法同时测定清脑降压片中黄芩苷、阿魏酸和藁本内酯的含量

目的:建立测定清脑降压片中黄芩苷、阿魏酸和藁本内酯含量的反相高效液相色谱法。方法:色谱柱采用ODS-C 18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.5%磷酸水梯度洗脱;黄芩苷、阿魏酸、藁本内酯检测波长为326 nm;流速为1.0 mL·min-1;柱温35℃。结果:黄芩苷在221.62~3324.30 ng范围内与峰面积线性关系良好(Y=0.0654X-0.0021,γ=1.0000)。平均加样回收率为98.6%,RSD为1.42%(n=6),阿魏酸在20.07~401.40 ng范围内与峰面积线性关系良好(Y=1.0469X-0.9536,γ=1.0000)。平均加样回收率为97.8%,RSD为1.05%(n=6)。藁本内酯在20.13~402.60 ng范围内与峰面积线性关系良好(Y=0.6333X-0.6877,γ=1.0000)。平均加样回收率为98.2%,RSD为1.42%(n=6)。结论:本方法可行、准确、重复性好,可作为清脑降压片中黄芩苷、阿魏酸和藁本内酯的质量控制方法。

高效液相色谱法测定β-内酰胺抗生素中残留乙酸的含量

目的建立测定β-内酰胺类抗生素原料中乙酸残留量的HPLC方法。方法采用多因素组内设计方法,确定色谱流动相的组成、比例和pH值。参考ICH Q2,从专属性、检出限和定量限、线性、准确度、精密度和耐用性等6个方面对方法进行验证。用所建立的方法对19种β-内酰胺类抗生素原料进行了测定。结果采用C_(18)色谱柱,流动相:甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钾,梯度洗脱;柱温25℃;检测波长220 nm。供试品、溶剂和流动相对乙酸测定没有明显干扰;乙酸的最低检出限约为0.029μg,最低定量限约0.12μg;从定量限到限度2倍浓度范围内,方法的线性关系良好,拟合直线方程为y=388866.7186x-177.5720,r2=0.9999;低中高浓度加样回收率平均分别为93%,96%和99%;方法的重复性和中间精密度分别为2.37%和2.11%;在3根不同C_(18)色谱柱上的耐用性良好。19种β-内酰胺抗生素原料中有3种筛查出残留乙酸。结论所建方法可以实现对β-内酰胺类抗生素原料中残留乙酸的准确定量,为该类原料的生产过程控制和标准物质研制提供了依据。

高效液相色谱法测定异烟酸辛酰肼含量

目的:异烟肼及其衍生物作为治疗肺结核的一线药物,其含量测定在药物的研发及应用中至关重要。然而,异烟肼的含量测定方法虽常有报道,但是针对异烟肼衍生物的含量测定方法却鲜有报道。因此本研究构建一种适用于测定异烟酸辛酰肼(INH-CHO)的反相高效液相色谱法(reverse-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC),用于INH-CHO的含量检测。方法:采用Capcell Pak C18 MG II S5色谱柱,柱温为30℃,以pH=6.0磷酸盐缓冲液:甲醇=30:70为流动相进行洗脱,流速为1 mL/min,进样0.02 mL,在262 nm处检测,考察该方法学的线性关系、精密度、准确度及定量限。结果:INH-CHO的保留时间为9.2 min,在1~240μg/mL、0.1~1μg/mL浓度范围内都具有较好的线性关系(R~2>0.9990),在该色谱条件下测定INH-CHO的日内精密度、日间精密度、准确度较好,定量限为0.1μg/mL。结论:在实验浓度范围内,该方法线性良好、操作简便、结果精确、可重现,适用于INH-CHO的含量检测。

反相高效液相色谱法测定血浆中同型半胱氨酸的含量

本文建立了在等度洗脱下高效液相色谱法(HPLC)测定血清中同型半胱氨酸含量的方法。血浆同型半胱氨酸经巯基乙醇还原后用H2O2氧化巯基,与邻苯二甲醛(OPA)衍生,经C18色谱柱在45℃分离,荧光检测。方法简便、快速,线性范围为0.685～148.0μmol·L-1,r=0.9998;方法回收率为96.4%～100.1%。日内相对标准偏差小于5%,日间相对标准偏差小于6%。

反相高效液相色谱法测定半枝莲中原儿茶酸的含量

目的建立半枝莲药材中原儿茶酸的含量测定方法。方法样品用30%的乙醇回流提取,提取液滤过,以反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定。用DiamonsilTMC18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,以甲醇-0.05%磷酸为流动相,流速为1.0 ml·min^1,检测波长为258 nm。结果原儿茶酸的保留时间约为7 min,且与其它峰的分离度大于1.5。原儿茶酸的线性范围为0.018-0.184μg（r=0.999 8）,最低检测限为3 ng,平均回收率和RSD分别为99.7%和0.27%。结论该方法简便快速,结果准确可靠,可为半枝莲药材的质量评价提供有效手段。

反相高效液相色谱法检测金线莲中槲皮素、山奈酚含量

金线莲质量评价标准的缺乏导致市场上金线莲产品质量参次不齐,严重影响消费者利益。为了缓解这一状况,本文建立了一套反相高效液相色谱法提取及检测金线莲中槲皮素、山奈酚的方法,并分析了槲皮素、山奈酚在不同栽培时间和不同组织中分布。研究结果表明,0.1g金线莲粉末按料液比1∶40加入90%甲醇∶盐酸10∶1溶液中,静置40 min, 70℃水浴中超声90 min时,槲皮素、山奈酚的提取率最高。该方法精确度高,可用于金线莲中槲皮素、山奈酚定性和定量分析。利用该方法分析槲皮素、山奈酚在金线莲中时空分布,金线莲中槲皮素含量随着移栽时间呈现先上升后下降趋势,在3个月时含量最高,4个月后连续下降,且槲皮素特异性积累于叶中。金线莲中山奈酚含量随着移栽时间也呈现先上升后下降趋势,在移栽3个月时含量最高,4个月后连续下降,但山奈酚含量在不同月龄、不同组织中差异不大。

反相高效液相色谱法同时测定半夏中尿苷鸟苷和腺苷

目的 建立同时测定半夏中尿苷、鸟苷和腺苷含量的反相高效液相色谱（RP-HPLC）梯度洗脱法.方法 采用ZORBAX-SB-C18色谱柱（150 mm ×4.6 mm,5 μm）;以水-甲醇为流动相,梯度洗脱,流速为0.6 mL·min-1,柱温为25 ℃,检测波长260 nm.结果 尿苷在0.078 4～0.784 0 μg范围内线性关系良好,r＝0.999 5;鸟苷在0.079 8～0.798 0 μg范围内线性关系良好,r＝0.999 5;腺苷在0.085 2～0.852 0 μg范围内线性关系良好,r＝0.999 4.结论 该方法操作简便,方法可靠,重复性好,可以作为半夏的质量控制方法之一.

反相高效液相色谱法测定生物介质中泼尼松龙及泼尼松龙琥珀酸半酯

目的 :建立生物介质测定泼尼松龙及其琥珀酸半酯药物浓度的分析方法。方法 :采用反相高效液相色谱法 ,内容物及血浆样品均用正戊烷 -甲基叔丁醚 (2∶3)混合液提取 ,挥干后以乙腈 -柠檬酸缓冲液 (33∶67)为流动相 ,经过反相C18 柱 (250mm×4 6mm ,5μm )分离后在254nm波长处检测。结果 :两种药物提取回收率高于80 % ,日内、日间精密度均低于3 %。结论 :本方法具有快速、简便、灵敏、准确的特点 ,适用于泼尼松龙新剂型药代动力学研究 ,也可推广应用于泼尼松龙其它剂型及同类药物。

反相高效液相色谱法测定家兔体内乙酰半胱氨酸血药浓度

目的建立乙酰半胱氨酸血药浓度的测定方法。方法色谱柱为EclipseXDB-C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.01mol/L磷酸-甲醇(47∶53),柱温为30℃,流速为1.0 mL/min,检测波长为257nm。结果乙酰半胱氨酸高、中、低质量浓度的日内精密度RSD分别为0.90%,1.36%和2.15%,日间精密度RSD分别为1.15%,2.31%和4.98%。乙酰半胱氨酸质量浓度在4～80μg/mL范围内与峰面积有良好的线性关系(r2=0.999 7)。结论该方法简便、准确,重现性好,可用于测定家兔体内乙酰半胱氨酸的血药浓度。

反相高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液中的乙酰半胱氨酸和乙酰酪氨酸

目的建立一种等度洗脱反相高效液相色谱法测定复方氨基酸注射液中的N 乙酰 L 半胱氨酸和N 乙酰 L 酪氨酸。方法KromasilC1 8柱 (2 0 0mm× 4 .6mm ,5 μm) ,流动相为 2 0mmol L磷酸二氢钠溶液 (用 5 0 %H3PO4 溶液调pH 2 .5 ) 乙腈 (94∶6 ) ,流速为 1.0ml min ,进样量 10 μl,检测波长 2 10nm。 结果N 乙酰 L 半胱氨酸和N 乙酰 L 酪氨酸均在 6 0～ 14 0 μg ml浓度范围内呈良好的线性关系 (r=0 .9999) ,平均回收率分别为 10 2 .2 %、99.9% ,RSD(n =9)分别为 0 .6 %、0 .5 %。结论此法简便实用 。

高效液相色谱法测定复方半夏片中橙皮苷含量

目的建立测定复方半夏片中橙皮苷含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为Capcell PAK C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液(20∶80,V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为283 nm,进样量为5μL。结果橙皮苷进样量在0.2066~2.0660μg范围内与峰面积线性关系良好(r=1.000,n=5);精密度、重复性、稳定性试验的RSD分别为0.06%,0.44%,0.03%;平均加样回收率为99.66%,RSD为0.30%(n=6)。结论所建立的方法操作简便、结果准确、稳定性好,可用于复方半夏片的质量控制。

反相高效液相色谱法测定头孢地尼及制剂中的聚合物类杂质

目的建立反相高效液相色谱法测定头孢地尼及制剂中的聚合物杂质。方法以CAPCELL PAK C_(18)MGⅡ为色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),0.25%四甲基氢氧化铵溶液(p H 5.5)[每1000mL中加入0.1 mol/L乙二胺四乙酸二钠溶液0.4 mL]-甲醇-乙腈为流动相系统,梯度洗脱,建立了头孢地尼聚合物类杂质的分析方法并进行了方法学验证。采用二维液质联用法对检出的聚合物类杂质进行定性分析。结果在该色谱条件下头孢地尼及已知杂质均与头孢地尼聚合物间分离良好,头孢地尼检测浓度的线性范围为0.30~30.1μg/mL(r=1.0000),方法的检测限与定量限分别为1.5 ng和4.5 ng。所建立的方法能够检出头孢地尼二聚体,头孢地尼二聚体的多个同分异构体及头孢地尼三聚体。结论本方法专属性好,灵敏度高,耐用性好,可用于头孢地尼及其制剂中聚合物杂质的控制。

半制备反相高效液相色谱法分离珍珠菜中木脂素类成分

对珍珠菜(Lysimachia clethroideDuby)中的木脂素类化学成分,采用Sephadex LH-20和半制备反相高效液相色谱法联用分离化合物,从中分离并鉴定了两个化合物,通过波谱技术鉴定其化合物的结构分别是:(+)-Isolar-ic iresinol-9′-β-D-glucopyranoside(1).Urolignoside(2).化合物1和2均为首次从该属植物中分离得到.

反相高效液相色谱法测定加味四妙勇安汤中绿原酸和梓醇的含量

目的:建立反相高效液相色谱法测定加味四妙勇安汤浸膏中绿原酸和梓醇含量的方法。方法:色谱柱为Merck Purospher STARLP RP-18 endcapped柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流速为1.0 mL/min,柱温为35℃。(1)绿原酸的色谱条件,流动相为乙腈-0.4%磷酸(V∶V=11∶89),检测波长为327 nm。(2)梓醇的色谱条件,流动相A为乙腈,流动相B为0.1%磷酸,梯度洗脱(0~15 min,0.8%A;15~60 min,2%A),检测波长为210 nm。结果:绿原酸在4.420~442.0μg/mL(r=0.9998)范围内质量浓度与峰面积成良好线性关系;平均回收率为99.38%(RSD=1.26%)。梓醇在9.760~488.0μg/mL(r=0.9999)范围内质量浓度与峰面积成良好线性关系,平均回收率为99.34%(RSD=1.43%)。绿原酸和梓醇的最低检测限分别为0.40和0.82 ng,定量限分别为1.20和2.44 ng,精密度RSD分别为0.71%(n=6)和0.45%(n=6)。结论:本方法操作简便,分离效果和重复性好,准确度高,可用于加味四妙勇安汤提取物的质量评价。

反相高效液相色谱法测定呋喃西林中有关物质

建立反相高效液相法测定呋喃西林含量和有关物质的方法。采用Phenomenex Synergi Max-RP C12色谱柱(250 mm×4.6 mm,4μm)为分离柱,以乙腈-水(30∶70)为流动相,流量为1.0 mL/min,检测波长为375 nm,色谱柱温度为30℃。在该色谱条件下,呋喃西林色谱峰与相邻杂质峰的分离度大于1.5,呋喃西林的质量浓度在1.04~104.0μg/mL范围内与色谱峰面积线性关系良好(r=0.999 2),检出限为0.3μg/mL。样品中单一杂质测定值的相对标准偏差为6.5%(n=6),杂质总和测定值的相对标准偏差为4.6%(n=6),平均加标回收率为100.4%~101.3%。该方法操作简单,专属性强,准确性好,可有助于控制呋喃西林的质量。

反相高效液相色谱法半制备分离［T（4－MOP）PS_4］卟啉的研究

本文研究了新水溶性５，１０，１５，２０－四（４－甲氧基－３－磺酸苯基）卟啉［Ｔ（４－ＭＯＰ）ＰＳ４］的反相高效液相色谱（ＨＰＬＣ）分离条件。采用ＳｈｉｍｐａｃｋＰＲＥＰ－ＯＤＳ半制备色谱柱，用含有１０ｍｍｏｌ／Ｌ四乙基碘化铵的乙腈－水（体积比２５：７５）为流动相，流速１８ｍＬ／ｍｉｎ，于４１８ｎｍ波长下检测。［Ｔ（４－ＭＯＰ）ＰＳ４］与合成中生成的杂质组分完全分离。经此制备的卟啉纯度高，已成功地应用于自来水样中微量钴、锌、铜离子的ＨＰＬＣ测定中。

反相高效液相色谱法测定Fmoc-L-His(Trt)-OH中光学异构体Fmoc-D-His(Trt)-OH的含量

目的结合外标法和面积归一化法,建立反相高效液相色谱法测定Fmoc-L-His(Trt)-OH中的光学异构体Fmoc-D-His(Trt)-OH的含量。方法采用Chiral MX(2)-RH色谱柱(4.6 mm×250mm,5μm);以乙腈-水-乙酸(500∶500∶1)为流动相,等度洗脱;流速为0.8 mL·min^(-1);紫外检测器检测,波长为220 nm;柱温为30℃;进样体积为10μL。结果Fmoc-L-His(Trt)-OH和Fmoc-D-His(Trt)-OH分离良好;Fmoc-D-His(Trt)-OH在0.15~2.93 mg·mL^(-1)与峰面积呈良好的线性关系(相关系数为0.9999);定量限为0.15μg·mL^(-1),检测限为0.049μg·mL^(-1)。回收率在95%~100%内,RSD为0.96%。结论本方法操作简单,专属性强,灵敏度高,为Fmoc-L-His(Trt)-OH中光学异构体Fmoc-D-His(Trt)-OH研究提供参考。

分子排阻色谱-反相高效液相色谱法测定阿莫西林颗粒中高分子聚合物含量

目的建立测定阿莫西林颗粒中高分子聚合物含量的分子排阻色谱-反相高效液相色谱法。方法色谱柱为Cef-SEC球状亲水硅胶柱(300 mm×7.8 mm,5μm),流动相为磷酸盐缓冲液[pH 7.0,0.005 mol/L磷酸氢二钠-0.005 mol/L磷酸二氢钠(50∶50,V/V)]-乙腈(90∶10,V/V),流速为0.6 mL/min,检测波长为254 nm,柱温为25℃,进样量为20μL。结果阿莫西林质量浓度在2.51~35.07μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9993,n=8);定量限为5.00 ng,检测限为1.60 ng;精密度、稳定性、重复性、中间精密度、耐用性试验结果均符合要求。国内A公司5批阿莫西林颗粒中高分子聚合物的含量均低于国外L公司的原研阿莫西林细粒。结论该方法专属性强、结果准确、重复性好,可用于测定阿莫西林颗粒中高分子聚合物含量。