反相离子对-高效液相色谱法测定河豚毒素

目的 :建立了反相离子对 -高效液相色谱法测定河豚毒素含量的方法。方法 :选用 SHIMADZU ODS色谱柱 (15 0× 6 mm5 μm) ,以 0 .2 % (v/v)醋酸液为流动相 ,流速为 1.2 m L/m in,检测波长为 2 30 nm。结果 :河豚毒素线性范围 2 0～ 10 0 μg/m L,r= 0 .996 0 (n=5 ) ;回收率为 93.32 % ,RSD=5 .41% (n=5 ) ;日内精密度为 6 .10 % ,日间精密度为 7.42 % (n=5 ) :最低检测限5 0 ng。结论 :方法准确、快速、简便 。

κ-卡拉胶寡糖的反相离子对-超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱研究

建立反相离子对-超高效液相色谱(RPIP-UPLC)和电喷雾离子源-四极杆-飞行时间质谱(ESI-Q-TOF-MS)联用技术快速分离鉴定硫酸寡糖的方法。以20mmol/L庚胺(pH4)为离子对试剂,25%庚胺甲酸盐纯水溶液(A)和25%庚胺甲酸盐甲醇溶液(B)为梯度洗脱溶剂,κ-卡拉胶寡糖通过BEHC18反相柱分离后,分别在正、负离子模式下进行四极杆-飞行时间质谱分析。结果表明,聚合度为3～45的κ-卡拉胶寡糖在BEH C18柱上得到很好的分离,从每一个色谱峰对应的质谱图中可以准确获得直至27糖的各寡糖结构信息,均为奇数糖,与聚丙烯凝胶电泳结果吻合。所得的寡糖断裂规律对卡拉胶寡糖的快速鉴定和结构解析具有重要意义。

离子对-反相高效液相色谱法同时测定解磷注射液中氯磷定、盐酸苯那辛、硫酸阿托品的含量

研究建立了离子对 -反相高效液相色谱法 ( IP- HPLC)同时测定解磷注射液中氯磷定、硫酸阿托品、盐酸苯那辛含量的分析方法及其有关物质和降解产物检查法。采用 ZORBAXSB C18色谱柱 ,流动相 :甲醇 -乙腈 - 1mol· L-1磷酸 (用三乙胺调 p H=3.0 ) - 0 .2 mol· L-1磷酸二氢钠 (用磷酸调 p H=3.0 ) - 0 .9%十二烷基硫酸钠水溶液 ( 2 0 0∶ 4 0 0∶ 10∶ 90∶ 30 0 ) ,在流速 1.0 m L· min-1下 ,检测波长 2 2 0 nm处 ,测定氯磷定、硫酸阿托品、盐酸苯那辛 ,其回收率分别为 10 0 .36% ( RSD 0 .90 % )、99.4 4 % ( RSD 1.0 9% )、99.82 %( RSD 1.2 3% )。该方法简便、快速 。

离子对-反相高效液相色谱法测定布洛伪麻分散片的溶出度

目的:建立离子对-反相高效液相色谱法(IP-RPHPLC)测定布洛伪麻分散片溶出度的方法。方法:采用溶出度第三法(小杯法),以醋酸盐冲液(pH=7.2)为溶出介质。色谱柱为KromasilC18柱(4.6mm×150mm,5μm);流动相为醋酸-醋酸钠缓冲液-乙腈(4∶6),每1000mL流动相溶解十二烷基硫酸钠1.0g;检测波长为257nm。以外标法测定布洛伪麻分散片溶出液中布洛芬和盐酸伪麻黄碱的浓度,并计算相应时间内的累积溶出百分率。结果:布洛芬和盐酸伪麻黄碱分别在0.15～1.5mg/mL和0.025～0.25mg/mL范围内,浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999和0.9993),平均回收率分别为100.1%(RSD=0.7%,n=9)和100.6%(RSD=0.8%,n=9)。结论:IP-RPHPLC法简便,重现性好。

离子对-反相高效液相色谱法测定布洛伪麻分散片的含量

目的:建立布洛伪麻分散片含量的测定方法。方法:色谱柱为KromasilC18柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为醋酸-醋酸钠缓冲液∶乙腈(4∶6),每1000mL流动相溶解十二烷基硫酸钠1.0g;检测波长为257nm。结果:布洛芬和盐酸伪麻黄碱含量测定的线性范围分别为0.8～8mg/mL(r=0.9998)和0.12～1.2mg/mL(r=0.9999),平均回收率分别为101.7%(RSD=0.53%,n=9)和100.2%(RSD=0.8%,n=9)。结论:该方法简便、重现性好,适用于布洛伪麻分散片的质量控制。

离子对-反相高效液相色谱法测定盐酸左氧氟沙星胶囊的含量

目的:研究盐酸左氧氟沙星胶囊的离子对-反相高效液相色谱测定法。方法:以AlltimaC184.6mm×150mm5μm为分析柱,以0.1mol/L醋酸钠溶液内含0.005mol/L四丁基溴化铵,用冰醋酸调pH至4.0-甲醇55∶45为流动相,流速为1.0mL/min,紫外检测波长为294nm。结果:盐酸左氧氟沙星浓度在6～32μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数r=0.9999,平均回收率为99.8%,RSD=0.5%n=5,日内、日间误差RSD分别为0.6%n=5和1.0%n=4。结论:方法快速、简便、准确,可用于该制剂的稳定性考察及成品质量控制。

反相液相色谱-电喷雾-离子阱-飞行时间质谱法定量分析N-非取代肝素/硫酸乙酰肝素

肝素和硫酸乙酰肝素由重复的二糖单元组成,其组分和结构与重要的生物病理、生理作用息息相关。这些二糖单元包括含量较高的N-硫酸化葡萄糖胺、N-乙酰化葡萄糖胺和含量较低的N-非取代葡萄糖胺残基。本研究采用2-氨基吖啶酮标记二糖,结合反相液相色谱-电喷雾-离子阱-飞行时间质谱法(RP-LC-ESI-IT-TOFMS)分析肝素/硫酸乙酰肝素中N-非取代二糖。通过优化检测条件,实现了12种肝素/硫酸乙酰肝素二糖的基线分离,并采用外标法相对定量分析各二糖组分。该方法适用于分析含有N-非取代二糖的肝素衍生物,可为进一步研究N-非取代葡萄糖胺的结构与功能提供检测方法,有助于更好地理解N-非取代葡萄糖胺残基在人类健康与疾病管理中的重要作用。

白菜DNA甲基化水平的反相离子对高效液相色谱法研究

建立了反相离子对液相色谱测定白菜的DNA甲基化水平的方法。采用的色谱柱为HypersilBDSC18柱(200mm×4.0mm,5μm),以pH4.0的甲醇-5mmol·L-1庚烷磺酸钠-三乙胺(10:90:0.2,体积比)的混合液为流动相,UV检测器波长为273nm。通过测定DNA水样所产生的胞嘧啶和甲基胞嘧啶的含量,即可得知DNA甲基化程度。胞嘧啶和甲基胞嘧啶回收率分别为99.6%及103.3%,RSD为3.7%(日内)及5.2%(日间)。

微波辅助萃取-反相液相色谱-电感耦合等离子体质谱法测定玉米中4种砷形态的含量

玉米样品经粉碎、过筛后,分取0.5g,加入0.15mol·L^(-1)硝酸溶液7mL,置于微波消解仪中,分别在80,100,120℃下消解10,10,15min。离心10min,上清液过0.22μm有机滤膜,滤液进入液相色谱仪,在Agilent ZORBAX SB-Aq反相色谱柱上用5mmol·L^(-1)己烷磺酸钠-20mmol·L^(-1)柠檬酸的混合溶液(pH 4.3)进行等度洗脱,分离后的4种砷形态{一甲基砷(MMA)、二甲基砷(DMA)、三价砷[As(Ⅲ)]和五价砷[As(Ⅴ)]}用电感耦合等离子体质谱仪测定。结果显示:4种砷形态可在4min分离完全,质量浓度在2~50μg·L^(-1)内与其对应的信号强度呈线性关系,检出限(3S/N)为0.041~0.054μg·L^(-1);对空白玉米样品进行3个浓度水平的加标回收试验,4种砷形态回收率为94.2%~102%,测定值的相对标准偏差(n=6)小于3.0%;方法用于3个天然污染玉米样品的分析,4种砷形态均有检出,其中As(Ⅲ)、As(Ⅴ)的检出量较高。

离子对反相高效液相色谱梯度洗脱法分析测定硫酸博莱霉素

目的:研究应用反相离子对色谱梯度洗脱法以较快速度分离硫酸博莱霉素组分,并尝试梯度洗脱条件下测定其有效成分A_2、B_2的含量。方法:色谱柱为八烷基硅烷键合硅胶柱(4.6mm×150 mm,填料:Eclipse XDB,粒度:5μm),检测波长为254nm,采用甲醇-庚烷磺酸钠溶液为流动相进行梯度洗脱(甲醇起始比例为30％,35 min内上升至40％),流速为1.2mL·min^(-1),柱温为30℃,进样量为10μL。结果:博莱霉素A_2、B_2、A_5、B_4、去甲基A_2等组分在此条件下基本实现基线分离,A_2、B_2在0.1～2.0 mg·mL^(-1)范围内,浓度与峰面积均呈良好线性关系(r均为0.999 9)。结论:本法可在较短时间内使博莱霉素组分得到良好分离。

反相高效液相色谱法分离测定人发中痕量锌和铜

用二甲酚橙作柱前衍生试剂 ,在C18色谱柱上 ,以乙腈 水 (12∶88)作流动相 ,六次甲基四胺为对离子试剂 ,反相离子对高效液相色谱法快速分离测定人发中痕量锌和铜。配合物和试剂在8min内出峰完毕 ,于波长 5 75nm处检测 ,检出限分别为Zn2 + 0 .0 1ng·ml- 1,Cu2 + 1.3 0ng·ml- 1。用于人发样品中锌和铜的测定 ,结果满意。

RP-HPLC-ICP-MS技术用于西洋参中多元素溶出特性及形态分析

采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)和反相高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术(RP-HPLC-ICP-MS)对西洋参(Panaxquinque folium.L)及西洋参提取物中多种元素的含量及元素的形态进行了研究.对西洋参中的多种元素用水、乙醇和氯仿等不同极性的溶剂进行提取,考察了这些元素在不同溶剂中的溶出特性,采用ICP-MS法对其进行定量测定;并采用RP-HPLC-ICP-MS联用技术对西洋参水提取液中多种元素(P,Mg,Al,Ca,Mn,Fe,Zn,Ni,Cu和Sr)的形态进行了分析.结果表明,元素提取率随提取溶剂极性的增加而增大,特别表现在Mg,Ca,P,Mn,Sr,Mo和Pb等元素上;采用HPLC-ICP-MS技术在以0.1mol/L的稀硝酸和超纯水为流动相,流速为0.4mL/min,进样量为20μL的条件下,各元素的无机态和有机态均得到良好分离.

吡拉西坦对水浸-束缚应激大鼠脑内单胺类递质含量的影响

采用离子对反相液相色谱 电化学检测法 (HPLC EC)考察吡拉西坦对水浸 束缚应激大鼠脑内单胺类递质及其代谢产物含量的影响。结果显示 :吡拉西坦 1 0 0mg/kg、2 0 0mg/kg对应激大鼠额叶、纹状体、下丘脑的去甲肾上腺素 (NE)、多巴胺 (DA)、5 羟色胺 (5 HT)、5 羟吲哚乙酸 (5 HI AA)、高香草酸 (HVA)均有不同程度降低作用 。

黄连生物碱的反相高效液相-电喷雾离子阱串联质谱的研究

采用反相高效液相-电喷雾离子阱串联质谱法对由乙醇提取的黄连生物碱进行了研究.优化出了反相高效液相色谱分离黄连生物碱的条件:流动相为V(乙腈)∶V(H2O)(三乙胺2 mmol/L)=30∶70;柱温为30℃;流速为0.5 mL/min,并结合电喷雾串联质谱检测出了黄连生物碱中的小檗碱、药根碱、巴马汀、黄连碱以及微量的表小檗碱和木兰碱,利用小檗碱和表小檗碱的CID数据分析确证了它们的结构,并利用电喷雾离子阱串联质谱研究了木兰碱在正离子检测方式的多级串联质谱,对其碎裂机理进行了解释.

应用离子对-反相高效液相色谱法测定大鼠血浆中阿德福韦酯水解产物

目的:建立一种快速、简单的测定大鼠血浆中阿德福韦酯水解产物阿德福韦单特戊酸甲基酯和阿德福韦的离子对反相高效液相色谱方法。方法:用HypersilODSC18反相柱,乙腈50mmol/L醋酸铵缓冲液(2∶98和50∶50)为流动相,采用梯度洗脱,流速1.0ml/min,紫外检测波长为262nm。结果:测定血浆中阿德福韦浓度的线性范围为1.25～60.0μg/ml(r=0.9999),最低检测限为0.40μg/ml(S/N>3),绝对回收率为76.72%～80.61%。结论:本方法准确,灵敏度较高,重复性好,适于对阿德福韦酯结构类似物进行体外血浆稳定性评估筛选,并可为临床前/临床药代研究提供重要的方法学参考。

基于阳离子交换-反相混合分离模式的液相色谱-质谱联用检测河豚毒素新方法

目的建立一种可用于检测中毒生物医学样品中小分子生物毒素———河豚毒素的高灵敏度分析方法。方法选用阳离子交换-反相混合色谱柱,针对河豚毒素亲水性强的特点,建立了一种新型的液相色谱-飞行时间质谱方法对人血浆中河豚毒素进行检测,优化了液相色谱-质谱条件,考察了血浆中河豚毒素的提取方法。结果对于参考品溶液,河豚毒素的线性范围为0.1～50 mg/L,检测限为0.01 mg/L;对于染毒人血浆样品,河豚毒素的线性范围为0.5～10 mg/L,检测限为0.25 mg/L。结论所建立的液相色谱-飞行时间质谱方法专属性强、灵敏度高,可适用于实际测定河豚鱼头样品中mg/L水平的河豚毒素。

反相离子对-高效液相色谱法同时测定葛根芩连汤中13种有效成分及其在配伍机制研究中的应用

目的研究葛根芩连汤不同组方中活性成分含量的差异,揭示其药效物质的变化规律,进而从化学层面探究葛根芩连汤的配伍规律。方法采用反相离子对-高效液相色谱法测定葛根芩连汤不同组方配伍中13种有效成分(葛根素、大豆苷元、黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素、小檗碱、巴马汀、药根碱、黄连碱、甘草素、异甘草苷、甘草酸和甘草次酸)的含量。色谱柱为Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为3.5 mmol/L庚烷磺酸钠溶液(含体积分数0.1%甲酸)-乙腈(含体积分数0.1%甲酸),梯度洗脱,体积流量为1 mL/min;检测波长为270 nm;柱温35℃;进样量为20μL。结果葛根芩连汤中13种有效成分均基线分离、峰形对称,经方法学验证各项效能指标均符合定量分析要求。不同组方配伍中活性成分的含量变化规律:葛根与黄芩、黄连配伍时,葛根中的葛根素与大豆苷元以及黄芩中的黄芩苷含量均显著增加;黄芩、黄连与炙甘草配伍时,其中的黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素和小檗碱等有效成分均有增加,同时甘草中的甘草酸亦有显著增加;全方配伍时各有效成分均有不同程度增加。结论所建立的方法可用于葛根芩连汤及其组方的配伍规律研究。葛根芩连汤全方配伍对葛根与黄芩、黄连及炙甘草中有效成分的溶出均起到促进作用。其中,臣药黄芩、黄连能显著促进君药葛根中有效成分的溶出,起到辅佐君药的作用;而佐使药炙甘草不仅可促进臣药中有效成分的溶出,同时可在一定程度上增强臣药对君药的辅佐作用,起到协调全方、增效减毒的作用。

离子对-反相高效液相色谱-三重四级杆质谱法测定λ-卡拉胶寡糖

目的建立离子对-反相高效液相色谱(RPIP-HPLC)和电喷雾离子源-三重四级杆质谱(ESI-QqQ-MS)联用技术快速分离鉴定多阴离子λ-卡拉胶寡糖的方法。方法采用Hypersil GOLD C18色谱柱(100mm×2.1mm,3μm),流速0.2mL.min-1,柱温30℃,考察3种离子对试剂(庚胺、二丁胺、三丙胺)、不同离子对试剂浓度(3、5和8mmol/L)及流动相pH值(pH4.5、5.5、6.5)对λ-卡拉胶寡糖分离效果的影响。结果当流动相组成为5mmol.L-1庚胺乙酸盐水溶液(pH5.5)和5mmol.L-1庚胺乙酸盐甲醇溶液(pH 5.5)时,聚合度(DP)在2～15间的λ-卡拉胶寡糖分离效果较好,同时从相应的质谱数据中能准确获得各聚合度λ-卡拉胶寡糖的结构信息。结论该方法能较好地分离并鉴定多阴离子λ-卡拉胶寡糖,所得寡糖质谱信息对λ-卡拉胶寡糖的结构解析有借鉴作用。

蜂蜜中氯霉素残留的检测及净化方法研究

建立了反相高效液相色谱-离子阱质谱法检测蜂蜜中氯霉素残留的方法。前处理采用改良的QuEChERS方法进行快速提取和净化。采用初级次级胺进行固相分散净化,可有效吸附蜂蜜中的糖类及有机色素等杂质。提取物在流动相甲醇∶水(0.2%乙酸胺)=45∶55(体积比)中,用整体色谱柱进行快速分离和质谱检测。并对MS检测中2种离子化方式(电喷雾ESI及大气压化学APCI)、各种离子化方式下正负离子模式及离子检测方法(总离子检测TIC和选择性离子监测MRM)进行了综合比较,最终确定采用电喷雾电离法(ESI)负离子模式、多反应离子监测(MRM)对氯霉素进行定性定量分析。在0.2～200μg/kg添加浓度下,添加回收率水平在78%～93%间,变异系数在3.9%以下。该方法的检出限为0.1μg/kg,在0.1～100μg/L浓度范围内,线性方程为y=58.753x+34867,相关系数R2=0.9995。