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反硝化细菌法测定土壤NO_(2)^(-)-^(15)N丰度的方法优化
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作者 郭茹 温腾 +1 位作者 曹亚澄 张金波 《土壤学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期535-545,共11页
NO_(2)^(-)是土壤中多个氮转化过程的关键中间产物,具有浓度低、转化快的特点。反硝化细菌法与质谱技术相结合,已广泛用于NO_(3)^(-)或NO_(2)^(-)的^(15)N同位素分析。本文旨在优化现有Stenotrophomonas nitritireducens反硝化细菌法的... NO_(2)^(-)是土壤中多个氮转化过程的关键中间产物,具有浓度低、转化快的特点。反硝化细菌法与质谱技术相结合,已广泛用于NO_(3)^(-)或NO_(2)^(-)的^(15)N同位素分析。本文旨在优化现有Stenotrophomonas nitritireducens反硝化细菌法的培养和反应条件,实现对土壤浸提液中NO_(2)^(-)^(15)N-丰度的专一、快速、准确测定。结果表明,使用种子液好氧摇培与单菌落微氧培养对NO_(2)^(-)样品的^(15)N同位素测定无显著差异,种子液可保证不同批次菌体的稳定性,好氧培养可将培养时间从7~8 d缩短至12~15 h。高纯N_(2)或He气吹扫0.5 h均能有效去除O_(2)和空白杂质氮,但N_(2)吹扫成本更低。转移N_(2)O气体至干燥气瓶,不影响测定结果的准确性和精密度,还能延长样品保存时间,减少碱蒸汽腐蚀仪器管路。使用处于对数生长期的菌体,调节反应体系的菌体浓度OD600值为0.3~0.9,可保证其反硝化效率,减少不同批次菌体的差异。使用不超过1 mol·L^(-1)的KCl浸提土壤,既可保证提取效率,也能减少对菌体活力的影响。优化后的方法不仅能准确测定不同类型土壤中NO_(2)^(-)的^(15)N丰度,对5~20 nmol自然丰度NO_(2)^(-)的δ^(15)N值测量精度为0.1‰~0.9‰,且大部分<0.5‰,还大幅简化了步骤、缩短了实验周期、节约了成本。 展开更多
关键词 反硝化细菌法 亚硝酸盐 15N 土壤浸提液
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硝酸盐氮同位素反硝化细菌法测试技术的建立 被引量:9
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作者 张翠云 张俊霞 +3 位作者 马琳娜 张胜 殷密英 李政红 《核技术》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期237-240,共4页
根据实验室条件,建立了反硝化细菌法测试技术,用于地下水和沉积物硝酸盐氮同位素测试。利用国际同位素参考物质和实际样品开展了一系列条件试验。两个国际同位素标准IAEA-N3和USGS34的分析结果显示,δ15N分析具有很好的重复性,精度变化... 根据实验室条件,建立了反硝化细菌法测试技术,用于地下水和沉积物硝酸盐氮同位素测试。利用国际同位素参考物质和实际样品开展了一系列条件试验。两个国际同位素标准IAEA-N3和USGS34的分析结果显示,δ15N分析具有很好的重复性,精度变化在0.09‰–0.48‰之间,均值为0.25‰;实际样品的δ15N分析也是可重复的,精度优于0.5‰。结果显示我们建立的反硝化细菌法测试技术可用于地下水和沉积物硝酸盐氮同位素测试。利用该技术对一个厚层包气带沉积物硝酸盐氮同位素测试结果显示,在包气带下部δ15N值不存在随深度增加的趋势,指示包气带下部很少反硝化作用发生。 展开更多
关键词 反硝化细菌法 氮同位素 地下水 沉积物
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土壤浸提液中硝酸盐氮氧同位素组成的反硝化细菌法测定 被引量:6
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作者 徐春英 李玉中 +4 位作者 李巧珍 毛丽丽 林伟 强晓晶 郑欠 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1829-1836,共8页
本研究优化了采用反硝化细菌法同时测定土壤浸提液中硝酸盐氮氧同位素组成的方法。在已有研究结果的基础上,通过采用5000~8000 r·min-1的转速离心、高纯氮气吹扫1 h、减少加样量及改造仪器自动进样器等措施对已发表方法进行了优化... 本研究优化了采用反硝化细菌法同时测定土壤浸提液中硝酸盐氮氧同位素组成的方法。在已有研究结果的基础上,通过采用5000~8000 r·min-1的转速离心、高纯氮气吹扫1 h、减少加样量及改造仪器自动进样器等措施对已发表方法进行了优化。对国际标准样品USGS34的分析表明,0.1~0.8μg NO-3-N样品量即可以得到较稳定、准确的测定值和校正值;同一时间内制备的硝酸盐δ15N的SD介于0.05‰~0.09‰之间,δ18O的SD介于0.28‰~0.48‰之间;在三个月之内δ15N和δ18O的测定值基本一致,表明该方法具有较好的准确度、精密度和稳定性。通过研究浸提剂、保存条件以及加热对测定土壤浸提液中硝酸盐氮氧同位素组成的影响,结果表明:常用的去离子水、KCl、Ca Cl2可能都含有微量的硝酸盐,随着加样量增大,浸提剂中含有的硝酸盐可能就会影响δ15N和δ18O的测定;对于土壤硝酸盐的浸提液,冷冻保存效果较好,保证了土壤硝酸盐氮氧同位素的准确性和稳定性;尽管加热对硝酸盐标准样品USGS34和IAEA-NO3的δ15N没有显著影响,但δ18O显著升高,说明加热易引起氧同位素分馏;而土壤硝酸盐浸提液样品加热前后的δ15N和δ18O的测定值没有显著变化,因此为避免产生氧同位素分馏和节省测试时间,建议同时测定土壤浸提液硝酸盐δ15N和δ18O时直接和反硝化细菌反应。应用本方法对不同肥料处理田间土壤浸提液硝酸盐的氮氧同位素组成进行了测定。 展开更多
关键词 反硝化细菌法 土壤浸提液 硝酸盐 氮氧同位素组成
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利用反硝化细菌法测试水体硝酸盐氮氧同位素 被引量:14
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作者 岳甫均 李思亮 +2 位作者 刘丛强 安宁 蔡虹明 《生态学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期2152-2157,共6页
反硝化细菌方法作为测试硝酸盐氮氧同位素组成的最新方法,具有可测试低浓度水样、对样品无需特殊处理、不会交叉污染和需样量少等诸多优点而得到迅速发展。本研究率先在国内实验室利用反硝化细菌法成功测试了硝酸盐氮氧同位素组成,将经... 反硝化细菌方法作为测试硝酸盐氮氧同位素组成的最新方法,具有可测试低浓度水样、对样品无需特殊处理、不会交叉污染和需样量少等诸多优点而得到迅速发展。本研究率先在国内实验室利用反硝化细菌法成功测试了硝酸盐氮氧同位素组成,将经过5~10d培养的反硝化细菌Pseudomonas aureofaciens离心,然后将菌液浓缩5倍,再向顶空进样瓶注入3mL菌液,密封后利用高纯氮气吹扫3h以上,注入50nmolNO3-水样经过夜培养灭活后,使用TraceGasPre-concentrator-Isoprime测试N2O同位素组成,结果表明,重现性和测试精度与国际上类似研究接近。该方法的建立对于国内开展河流及湖泊(水库)、降水等氮的生物地球化学循环将起到促进作用。 展开更多
关键词 反硝化细菌法 硝酸盐 氮同位素 氧同位素
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硝酸盐氮氧同位素反硝化细菌法测试研究 被引量:9
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作者 张翠云 张俊霞 +3 位作者 马琳娜 张胜 殷密英 李政红 《地球科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期360-364,共5页
进入21世纪,硝酸盐氮氧同位素测试技术的显著进展是反硝化细菌法测试技术的建立。反硝化细菌法具有可同时分析浓度低至μg/L的硝酸盐氮氧同位素组成、免去复杂的样品预处理、分析时间大大缩短以及从复杂溶液中只转化NO3-为N2O等优点。... 进入21世纪,硝酸盐氮氧同位素测试技术的显著进展是反硝化细菌法测试技术的建立。反硝化细菌法具有可同时分析浓度低至μg/L的硝酸盐氮氧同位素组成、免去复杂的样品预处理、分析时间大大缩短以及从复杂溶液中只转化NO3-为N2O等优点。实验过程由细菌挑选和培养、样品NO3-转化为N2O、N2O提取纯化、同位素测试以及同位素测试结果校正等几个关键步骤组成。国外研究结果显示该技术不仅可用于海水和淡水中硝酸盐同位素测试,而且还可用于土壤样品,并得到不断的完善和应用;国内建立了这一技术,在包气带和地下水硝酸盐污染研究中取得重要进展。由于该技术诸多优点,建议大力促进这一技术在我国的研究和应用,希望有关部门加大支持力度,进一步完善该技术并推广应用。 展开更多
关键词 氮氧同位素 反硝化细菌法 测试技术
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细菌反硝化法测定10^-6级硝酸盐的氮和三氧同位素 被引量:1
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作者 范昌福 曲冬梅 +4 位作者 秦燕 胡斌 高建飞 武晓珮 李延河 《地球学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第5期591-604,共14页
硝酸盐的氮和三氧同位素(δ^15N,δ^17O和δ^18O)及氧同位素非质量分馏(△^17O)综合研究,可以更有效地示踪硝酸盐的来源和形成过程、制约硝酸盐的形成条件。本文详细描述了细菌反硝化法测定10^-6级硝酸盐氮和三氧同位素的分析测试方法... 硝酸盐的氮和三氧同位素(δ^15N,δ^17O和δ^18O)及氧同位素非质量分馏(△^17O)综合研究,可以更有效地示踪硝酸盐的来源和形成过程、制约硝酸盐的形成条件。本文详细描述了细菌反硝化法测定10^-6级硝酸盐氮和三氧同位素的分析测试方法和实验要点。综合优化改良的细菌反硝化前处理方法、全自动气体预浓缩富集纯化系统和测试流程,实现了实验室长期测定数据的稳定性,以及多批次标准样品测定的良好重现性。10 nmol NO3^-标准样品的δ^18O和δ15N测试精度分别是0.25‰(1σ)和0.40‰(1σ)。80 nmol NO3^-标准样品的δ^18O、δ^17O和δ15N的测试精度分别是0.5‰(1σ)、0.4‰(1σ)和0.1‰(1σ),据此计算出的Δ^17O精度为0.46‰(1σ)。 展开更多
关键词 反硝化细菌法 硝酸盐 氮同位素 三氧同位素
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Factors influencing the accuracy of the denitrifier method for determining the oxygen isotopic composition of nitrate
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作者 Man ZHANG Jia-chun SHI Lao-sheng WU 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2019年第1期49-58,共10页
The denitrifier method is widely used as a novel pretreatment method for the determination of nitrogen and oxygen isotope ratios as it can provide quantitative and high-sensitivity measurements. Nevertheless, the meth... The denitrifier method is widely used as a novel pretreatment method for the determination of nitrogen and oxygen isotope ratios as it can provide quantitative and high-sensitivity measurements. Nevertheless, the method is limited by relatively low measurement accuracy for δ18 O. In this study, we analyzed the factors influencing the accuracy of δ18 O determination, and then systematically investigated the effects of dissolved oxygen concentrations and nitrate sample sizes on estimates of the δ15 N and δ18 O of nitrate reference materials. The δ18 O contraction ratio was used to represent the relationship between the measured difference and true difference between two reference materials. We obtained the following main results:(1) a gas-liquid ratio of 3:10(v/v) in ordinary triangular flasks and a shaking speed of 120 r/min produced an optimal range(1.9 to 2.6 mg/L) in the concentration of dissolved oxygen for accurately determining δ18 O, and(2) the δ18 O contraction ratio decreased as nitrate sample size decreased within a certain range(1.0 to 0.1 μmol). Our results suggested that δ18 O contraction is influenced mainly by dissolved oxygen concentrations in pure culture, and provided a model for improving the accuracy of oxygen isotope analysis. 展开更多
关键词 Denitrifier method NITRATE δ^15N Δ^18O Dissolved oxygen δ^18O contraction
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