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用逆转录多聚酶链式反应从凡纳对虾中检出传染性皮下组织和造血器官坏死病毒 被引量:13
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作者 刘荭 高隆英 +1 位作者 史秀杰 江育林 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期185-188,共4页
A reverse transcription polymerase chain reaction (RT PCR) was used for detection of infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus (IHHNV) from the gills and subcutaneous tissue of Penaeus vannamei (10-15cm ... A reverse transcription polymerase chain reaction (RT PCR) was used for detection of infectious hypodermal and haematopoietic necrosis virus (IHHNV) from the gills and subcutaneous tissue of Penaeus vannamei (10-15cm in body size) without clinical signs. With primers 77012R and 77353F, a fragment of 356bp of IHHNV was amplified in RT PCR. The amplified product was sequenced and showed more than 98% homologue with the sequences of other IHHNV strains in Gene Bank. 展开更多
关键词 传染性 皮下组织 造血器官 坏死病毒 凡纳对虾 转录多聚 链式反应 高密度养殖 核酸抽取 PCR产物
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鉴别猪瘟强毒和弱毒的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)检测方法的建立 被引量:26
2
作者 李艳 仇华吉 +5 位作者 王秀荣 张守发 朱庆虎 李娜 李国新 童光志 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1907-1914,共8页
【目的】建立一种能区分猪瘟病毒(classicalswinefever,CSFV)强毒和弱毒的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)检测方法。【方法】根据GenBank上登录的现有CSFV基因组全序列,选择高度保守区设计了一对CSFV通用引物,并在该对引物跨... 【目的】建立一种能区分猪瘟病毒(classicalswinefever,CSFV)强毒和弱毒的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)检测方法。【方法】根据GenBank上登录的现有CSFV基因组全序列,选择高度保守区设计了一对CSFV通用引物,并在该对引物跨越区域的内部设计了猪瘟兔化弱毒疫苗和强毒特异性引物,建立了一种能区分猪瘟强毒和弱毒的RT-nPCR鉴别诊断方法。【结果】应用该方法从猪瘟兔化弱毒疫苗和石门强毒株基因组中扩增出了大小分别为447和343bp的一条特异性片段,从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为447和343bp的两条特异性片段,但对牛病毒性腹泻病毒和其它常见猪源病毒细胞培养物以及正常细胞基因组进行检测时均为阴性。该方法可以检测出0.04pg的CSFVRNA。对从黑龙江省采集的15份疑似猪瘟病料进行了检测,结果表明,有14份类似猪瘟强毒,1份类似弱毒疫苗。限制性片段长度多态性和种系发生分析证实了RT-nPCR的检测结果。【结论】本研究建立的RT-nPCR可以有效区分猪瘟强毒和弱毒,减少了未感染的免疫猪被误杀的可能性。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 转录-复合套式聚合链式反应 限制性片段长度多态性分析
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反转录聚合酶链式反应检测猪繁殖与呼吸综合征持续性感染 被引量:10
3
作者 李华 杨汉春 +3 位作者 高云 黄芳芳 陈海涛 郭玉璞 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2001年第1期3-4,共2页
猪繁殖与呼吸综合征感染的特点之一是持续性的感染和病毒血症。本研究利用反转录聚合酶链式反应检测了PRRSV BJ- 4株单独感染 SPF仔猪和接种 PRRSV BJ- 4后再接种猪瘟疫苗不同时间的血清中病毒的存在。结果显示在感染2 4h后的血清样品... 猪繁殖与呼吸综合征感染的特点之一是持续性的感染和病毒血症。本研究利用反转录聚合酶链式反应检测了PRRSV BJ- 4株单独感染 SPF仔猪和接种 PRRSV BJ- 4后再接种猪瘟疫苗不同时间的血清中病毒的存在。结果显示在感染2 4h后的血清样品中就发现有病毒 RNA存在 ,病毒血症至少持续到感染后 37天 ,到第 5 0天时已经消失。 PRRSV BJ- 4感染后再接种猪瘟疫苗的仔猪的 PRRSV病毒血症没有受到影响。这些结果提供了 PRRSV持续性感染的直接证据 ,解释了实际生产中通过引进临床正常但已经感染了猪繁殖与呼吸综合征病毒的猪群造成猪场内病毒的传播和长期感染的存在 。 展开更多
关键词 繁殖呼吸综合征 转录聚合链式反应 血清 持续性感染
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微流控振荡流反转录聚合酶链式反应快速检测烟草花叶病毒 被引量:7
4
作者 王海英 章春笋 李彧媛 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第9期1286-1290,共5页
建立了一种基于毛细管的振荡流反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的微流控装置检测烟草花叶病毒(TMV)的新方法。根据TMV移动蛋白基因设计一对PCR引物,对粗提纯TMV颗粒直接进行RT-PCR。用0.025%小牛血清蛋白(BSA)对反应毛细管内壁进行静力学... 建立了一种基于毛细管的振荡流反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的微流控装置检测烟草花叶病毒(TMV)的新方法。根据TMV移动蛋白基因设计一对PCR引物,对粗提纯TMV颗粒直接进行RT-PCR。用0.025%小牛血清蛋白(BSA)对反应毛细管内壁进行静力学和动力学钝化,提高了PCR效率。在此微流控装置上进行RT-PCR,流速为70μL/min时,检出限为0.01μg cDNA;可以在17min内成功扩增出179bp的目的DNA片段。 展开更多
关键词 微流控 振荡流 转录聚合链式反应 烟草花叶病毒
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检测和鉴别犬瘟热病毒强、弱毒株的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的建立及初步应用 被引量:5
5
作者 司微 崔尚金 +1 位作者 张洪英 刘立奎 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期222-226,共5页
根据GenBank上登录的犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)基因组全序列,选择CDV强、弱毒株间有区别保守区设计了一对通用引物P1和P4,并在该对引物跨越区域的内部设计了CDV强毒株特异性引物P2及弱毒株特异性引物P3,用引物P1/P4进行RT... 根据GenBank上登录的犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)基因组全序列,选择CDV强、弱毒株间有区别保守区设计了一对通用引物P1和P4,并在该对引物跨越区域的内部设计了CDV强毒株特异性引物P2及弱毒株特异性引物P3,用引物P1/P4进行RT-PCR,然后用引物P2/P3/P4进行复合套式PCR,建立了一种能区分CDV强、弱毒株的复合反转录-套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)的鉴别诊断方法。应用该方法从CDV强、弱毒株的基因组中分别扩增出了大小为247bp和177bp的特异性片段,从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为247bp和177bp的两条特异性片段,与犬细小病毒、犬腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒、新城疫病毒的细胞培养物以及正常细胞对照组进行复合RT-nPCR扩增时均为阴性。对从黑龙江省和吉林省采集的20份疑似CDV病料进行的检测结果表明,有15份类似CDV强毒,5份类似CDV弱毒。本研究建立的复合RT-nPCR可以有效检测CDV感染,能够将强、弱毒株区分开,可用于临床快速检测、流行病学监测以及追踪疫苗免疫效果等。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 复合转录-套式聚合链式反应 鉴别诊断
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荧光半定量逆转录-聚合酶链式反应检测大鼠死后肾mRNA 被引量:4
6
作者 朱方成 蔡成忠 +3 位作者 王树法 刘良 任亮 朱少华 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1628-1630,共3页
目的探讨荧光半定量逆转录-聚合酶链式反应(fluorescencesemi-quantitativereversetranscrip-tase-polymerasechainreaction,RT-PCR)技术检测大鼠死后不同时间肾3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA含量变化对死亡时间(postmorteminterval,P... 目的探讨荧光半定量逆转录-聚合酶链式反应(fluorescencesemi-quantitativereversetranscrip-tase-polymerasechainreaction,RT-PCR)技术检测大鼠死后不同时间肾3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA含量变化对死亡时间(postmorteminterval,PMI)推断的应用价值。方法28只大鼠断颈处死后置于20℃温控系统内,利用荧光标记半定量RT-PCR技术检测大鼠肾GAPDHmRNA在死后48h内相对表达量的变化情况。结果在死后即刻至40h内大鼠肾均可检测出GAPDHmRNA,且其扩增产物呈规律性下降。结论荧光半定量RT-PCR技术检测大鼠死后肾GAPDHmRNA含量变化对PMI推断具有一定的应用价值。 展开更多
关键词 死亡时间(PMI) 荧光半定量技术 转录-聚合链式反应(rt-pcr) 3-磷酸甘油醛脱氢(GAPDH)
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实时荧光反转录聚合酶链式反应检测甲型H1N1流感病毒RNA 被引量:4
7
作者 王晓东 王然 +1 位作者 李凤焕 陈兆拮 《检验医学与临床》 CAS 2017年第A01期57-59,共3页
目的 快速准确检测甲型H1N1流感病毒,提高流感亚型鉴别诊断水平.方法 采用实时荧光反转录聚合酶链式反应(real-time FQ RT-PCR)检测385例流感患者鼻咽拭子标本和血浆H1N1-RNA.结果 68例患者鼻咽拭子甲型H1N1-RNA阳性率为17.66%,治疗第... 目的 快速准确检测甲型H1N1流感病毒,提高流感亚型鉴别诊断水平.方法 采用实时荧光反转录聚合酶链式反应(real-time FQ RT-PCR)检测385例流感患者鼻咽拭子标本和血浆H1N1-RNA.结果 68例患者鼻咽拭子甲型H1N1-RNA阳性率为17.66%,治疗第3、5、7天后甲型H1N1流感患者鼻咽拭子甲型H1N1-RNA阳性阴转率分别为20.51%、66.67%和91.02%,鼻、咽拭子标本检测H1N1-RNA有差异(P〈0.01),血浆H1N1-RNA检出1例阳性.结论 real-time FQ RT-PCRneng能快速准确检测甲型H1N1流感病毒核酸,有利于早期治疗和疫情控制. 展开更多
关键词 聚合链式反应 转录 流感病毒A型 HIN1亚型 抗原 核酸
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一步法提取RNA反转录-多聚酶链反应检测汉坦病毒RNA 被引量:3
8
作者 李劲松 翟俊辉 +3 位作者 孟令英 陈梅玲 李军保 张松乐 《中国公共卫生》 CAS CSCD 1996年第10期438-440,共3页
用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测汉坦病毒(Hantavirus)的基因RNA,同时与细胞分离病毒的敏感性进行比较。用异硫氰酸胍-载体吸附法,一步提取汉坦病毒RNA。将脑腔接种汉坦病毒频临死亡的乳鼠脑制成10... 用反转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测汉坦病毒(Hantavirus)的基因RNA,同时与细胞分离病毒的敏感性进行比较。用异硫氰酸胍-载体吸附法,一步提取汉坦病毒RNA。将脑腔接种汉坦病毒频临死亡的乳鼠脑制成10%的悬液,并系列稀释,从10(-1)到10(-12)的12梯度。结果表明,该引物能够扩增出汉坦病毒H8205株的RNA,说明汉坦病毒H8205株与76-118株在M片段上具有共同的保守序列。RT-PCR可以检测出4.64×10(-3)TCLD(50)/ml的病毒,而用Vero-E6细胞只能分离检测出4.64×10(-2)TCLD(50)/ml,所以RT-PCR检测病毒比细胞分离检测病毒敏感。 展开更多
关键词 肾综合征出血热 汉坦病毒 转录-多聚反应
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集在线荧光分析的连续流动反转录-聚合酶链式反应快速扩增检测食源致病性轮状病毒 被引量:3
9
作者 章春笋 李彧媛 王海英 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2011年第5期645-651,共7页
采用含RNA反转录(Reverse transcription,RT)和在线荧光分析的连续流动聚合酶链式反应(Poly-merase chain reaction,PCR)微流控技术检测食源致病性轮状病毒。此RT-PCR微流控装置以加热铜块组成恒温带,以聚四氟乙烯毛细管微通道为反应体... 采用含RNA反转录(Reverse transcription,RT)和在线荧光分析的连续流动聚合酶链式反应(Poly-merase chain reaction,PCR)微流控技术检测食源致病性轮状病毒。此RT-PCR微流控装置以加热铜块组成恒温带,以聚四氟乙烯毛细管微通道为反应体系构建而成。采用循环水冷却退火区,此装置能获得低至31℃的退火温度,而且温度控制及其稳定性良好,因而能满足不同PCR的要求。为了充分体现PCR微流控技术的优越性,在线荧光分析被用于检测PCR产物。当流速为7.5 mm/s时,轮状病毒RNA的cDNA扩增和在线荧光分析能在约12 min完成(扩增约10 min,在线分析约2 min)。在此集成化的RT-PCR微流控装置上,1 h可完成轮状病毒RNA的RT-PCR以及其扩增产物的在线荧光分析,样品检出限达到6.4×104 copies/μL。 展开更多
关键词 连续流动转录-聚合链式反应 在线荧光分析 微流控技术 食源致病性轮状病毒
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反转录巢式多重聚合酶链式反应体系检测单细胞中时钟基因表达 被引量:1
10
作者 袁艳鹏 关云谦 +2 位作者 林庆玲 薛金花 蔡彦宁 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2011年第3期365-370,共6页
目的建立一种高度灵敏的能够在单细胞水平检测时钟基因表达的反转录巢式多重聚合酶链式反应(multiplex nestedreverse transcription-polymerase chain reaction,multiplex nested RT-PCR)体系。方法选取核心时钟基因bmal1,clock,per1,p... 目的建立一种高度灵敏的能够在单细胞水平检测时钟基因表达的反转录巢式多重聚合酶链式反应(multiplex nestedreverse transcription-polymerase chain reaction,multiplex nested RT-PCR)体系。方法选取核心时钟基因bmal1,clock,per1,per2,cry1和cry2,以及看家基因β-actin,分别设计和优化巢式引物对。以基因质粒为模板,检测巢式多重PCR体系的灵敏度。体外转录得到各个基因的RNA模板,并检测反转录巢式多重PCR体系的灵敏度。使用手动微操作器,显微镜下负压获取悬浮单个NIH/3T3细胞,使用反转录巢式多重PCR体系检测其中目的时钟基因。应用实时定量PCR检测整体水平时钟基因表达情况,与单细胞水平进行比较。结果巢式多重PCR检测体系可以检测出单拷贝质粒DNA。反转录巢式多重PCR能够检测出4拷贝RNA模板。利用上述体系发现,NIH/3T3单细胞中时钟基因环路表达存在很大差异,同时发现群体水平per1和per2表达的高峰和低谷间差异有统计学意义,而单细胞水平per1表达则差异无统计学意义。结论建立了高度灵敏的用于检测时钟基因表达的反转录巢式多重PCR体系,揭示了单细胞水平时钟基因表达的异质性,也验证了整体水平与单细胞水平时钟基因表达的差异。 展开更多
关键词 转录巢式多重聚合链式反应 时钟基因 单细胞 NIH/3T3
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反转录聚合酶链式反应法检测端粒酶催化蛋白亚单位mRNA 被引量:1
11
作者 邱广斌 邱广蓉 +1 位作者 富伟能 孙开来 《中国实验诊断学》 2001年第6期308-309,共2页
目的 研究端粒酶催化蛋白亚单位(hTERT)mRNA在肿瘤组织中的表达情况,建立一种恶性肿瘤诊断的新方法。方法 提取肿瘤组织总RNA,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法进行检测。结果76例各型肿瘤组织中66例阳性... 目的 研究端粒酶催化蛋白亚单位(hTERT)mRNA在肿瘤组织中的表达情况,建立一种恶性肿瘤诊断的新方法。方法 提取肿瘤组织总RNA,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法进行检测。结果76例各型肿瘤组织中66例阳性,5例恶性胸腹水全部阳性。结论 RT-PCR法检测 hTERT mRNA是一种灵敏、简便的恶性肿瘤辅助诊断的新方法。 展开更多
关键词 端粒 转录聚合链式反应 肿瘤 催化蛋白亚单位 MRNA
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反转录聚合酶链式反应定量分析Ⅰ型脱碘酶的mRNA 被引量:1
12
作者 胥保华 许梓荣 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2003年第6期25-26,共2页
Ⅰ型脱碘酶 (IDⅠ )是一种含硒酶 ,它在甲状腺激素代谢中起重要作用。本实验建立了利用RT PCR并以 β 肌动蛋白 (β Actin)为内参照定量分析IDⅠmRNA表达的方法。提取肉鸡肝脏总RNA ,经反转录和PCR扩增 ,PCR产物的电泳条带于VDS摄象系... Ⅰ型脱碘酶 (IDⅠ )是一种含硒酶 ,它在甲状腺激素代谢中起重要作用。本实验建立了利用RT PCR并以 β 肌动蛋白 (β Actin)为内参照定量分析IDⅠmRNA表达的方法。提取肉鸡肝脏总RNA ,经反转录和PCR扩增 ,PCR产物的电泳条带于VDS摄象系统扫描灰度。寻求PCR线性扩增范围 ,确定RT PCR的最佳循环次数和模板量。通过计算IDⅠPCR产物与β ActinPCR产物的灰度之比 ,即可得出IDⅠmRNA的相对含量。 展开更多
关键词 转录聚合 链式反应 定量分析 I型脱碘 MRNA 甲状腺激素 代谢过程
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反转录-聚合酶链式反应检测结直肠癌二氢嘧啶脱氢酶的意义 被引量:1
13
作者 董秋美 黎莹 黄赛花 《广西医学》 CAS 2013年第3期278-281,共4页
目的研究结直肠癌患者二氢嘧啶脱氢酶(DPD)的表达及其临床意义。方法结直肠癌患者42例,于FOLFOX6方案化疗前,取癌组织及癌旁正常组织,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测DPD的表达,观察其与毒性和预后的关系。结果癌旁正常组织DPD... 目的研究结直肠癌患者二氢嘧啶脱氢酶(DPD)的表达及其临床意义。方法结直肠癌患者42例,于FOLFOX6方案化疗前,取癌组织及癌旁正常组织,用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测DPD的表达,观察其与毒性和预后的关系。结果癌旁正常组织DPD的表达高于相应癌组织(P<0.01)。结直肠癌组织DPD的表达状况和各种化疗反应无明显相关性(P>0.05)。正常组织DPD水平和口腔黏膜炎、腹泻的发生呈负相关(P<0.05)。Ⅲ期结直肠癌DPD高表达组和DPD低表达组患者的平均和中位无进展生存期(PFS)分别为28.3个月、27个月和38.6个月、36个月,差异无统计学意义(P>0.05)。结论结直肠癌组织DPD的表达可以预测Ⅲ期结直肠癌患者的预后,而癌旁正常组织DPD的表达可以预测5-FU相关毒性的发生情况。 展开更多
关键词 结直肠癌 FOLFOX6方案 化疗 5-氟尿嘧啶 转录-聚合链式反应 二氢嘧啶脱氢
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利用逆转录酶的聚合酶链式反应检测外周血中的肿瘤细胞 被引量:1
14
作者 李婧 《生命的化学》 CAS CSCD 2002年第5期488-490,共3页
本文就RT-PCR技术检测外周血中肿瘤细胞的基本原理及其在黑色素瘤、肝癌、乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌等检测中的应用加以综述。
关键词 转录 聚合链式反应 检测 外周血 肿瘤细胞 rt-pcr
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多重反转录聚合酶链式反应检测H5、H7和H9亚型禽流感病毒的研究
15
作者 张文慧 王伟利 +2 位作者 郑聪 刘明 钱爱东 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期95-98,共4页
利用多重反转录聚合酶链式反应同时检测H5、H7和H9亚型禽流感病毒.在GenBank中搜索H5、H7和H9亚型禽流感病毒(AIV)的血凝素基因序列,并利用DNAStar软件分析其相似性,利用Primer Premier 5.0软件设计3对分别针对AIV H5、H7和H9亚型的特... 利用多重反转录聚合酶链式反应同时检测H5、H7和H9亚型禽流感病毒.在GenBank中搜索H5、H7和H9亚型禽流感病毒(AIV)的血凝素基因序列,并利用DNAStar软件分析其相似性,利用Primer Premier 5.0软件设计3对分别针对AIV H5、H7和H9亚型的特异性引物.这3对引物所扩增的cDNA片段大小分别为427、228和830 bp.结果表明,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了同时检测H5、H7和H9亚型AIV的多重RT-PCR技术.该多重RT-PCR对H5、H7和H9亚型AIV能同时扩增出3条大小分别为427、228和830 bp的cDNA片段,与其他常见禽病病原的核酸不存在交叉反应.该多重RT-PCR对H5、H7和H9亚型AIV cDNA的最低检出量分别为10 pg、1 ng和10 pg. 展开更多
关键词 多重转录聚合链式反应 禽流感病毒 H5亚型 H7亚型 H9亚型
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反转录聚合酶链式反应定量分析巨噬细胞炎症蛋白-2 mRNA
16
作者 王世锋 王文波 杨涛 《海军医学杂志》 2006年第4期289-291,共3页
目的:建立反转录聚合酶链式反应定量分析巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)mRNA的方法。方法:以β-肌动蛋白(β-actin)为内参照,通过优化RT-PCR条件定量MIP-2 mRNA的表达。结果:获取了PCR线性扩增范围,确定了RT-PCR的最佳循环次数和模板量。结... 目的:建立反转录聚合酶链式反应定量分析巨噬细胞炎症蛋白-2(MIP-2)mRNA的方法。方法:以β-肌动蛋白(β-actin)为内参照,通过优化RT-PCR条件定量MIP-2 mRNA的表达。结果:获取了PCR线性扩增范围,确定了RT-PCR的最佳循环次数和模板量。结论:优化的RT-PCR方法可以用于MIP-2 mRNA的分析。 展开更多
关键词 巨噬细胞炎症蛋白-2 转录聚合链式反应 定量分析
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应用反转录-聚合酶链式反应对LH/CG受体在大鼠垂体中表达的研究
17
作者 杜晓岩 JuiieEMercer 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期170-175,共6页
促黄体激素/绒毛膜促性腺激素(LH/CG)受体存在于睾丸和卵巢组织中.然而以往的研究都未报道有关LH/CG受体是否存在于垂体这一重要的内分泌腺体组织中.本研究利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),以大鼠垂体总RNA为模板,扩增LH/CG受体cDNA... 促黄体激素/绒毛膜促性腺激素(LH/CG)受体存在于睾丸和卵巢组织中.然而以往的研究都未报道有关LH/CG受体是否存在于垂体这一重要的内分泌腺体组织中.本研究利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),以大鼠垂体总RNA为模板,扩增LH/CG受体cDNA片段.结果表明:LH/CG受体cDNA不仅存在于卵巢组织中,同样也存在于垂体组织中,垂体组织LH/CG受体cDNA与卵巢组织受体cDNA类似,都是由外显子拼接而成,结果又表明:LH/CG受体cDNA在垂体组织中以较小分子结构(或同工型)形式存在.尽管在大鼠垂体组织中没有发现全长cDNA存在,但本研究提示我们:LH/CG受体分子在垂体组织中的形式可能是由一些不完整的cDNA片段表达而成,并且表达水平较低. 展开更多
关键词 LH/CG受体 垂体 转录-聚合链式反应
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反转录多聚酶链反应核心抗原和抗体检测丙肝的方法比较
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作者 焦扬 《医药论坛杂志》 2008年第24期47-48,50,共3页
目的通过应用酶联免疫法(ELISA)分别检测丙肝病毒核心抗原(HCV-cAg)和抗体(HCV-Ab),和反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测丙肝RNA,来了解三种方法对丙肝病毒(HCV)感染检测的优点和缺点。方法采用HCV游离核心抗原试剂盒、HCV-AbELISA试剂盒... 目的通过应用酶联免疫法(ELISA)分别检测丙肝病毒核心抗原(HCV-cAg)和抗体(HCV-Ab),和反转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测丙肝RNA,来了解三种方法对丙肝病毒(HCV)感染检测的优点和缺点。方法采用HCV游离核心抗原试剂盒、HCV-AbELISA试剂盒和丙肝病毒PCR检测试剂盒,对来自入院前或手术前筛查的180例临床样本和24例丙肝或疑似丙肝患者的血清样本进行HCV-cAg,HCV-Ab和HCV-RNA检测。结果200例筛查样本HCV-Ab均为阴性,HCV-cAg阳性3例,其中RT-RNA阳性1例;25例HCV-Ab阳性的样本检出HCV-cAg阳性13例,RT-RNA阳性15例。HCV-cAg与RT-RNA符合率为86.67%(13/15)。结论HCV核心抗原检出时间早于抗体,HCV-cAg检测试剂盒可作为HCV抗体检测的补充试剂,反转录多聚酶链反应(RT-PCR)是一个很敏感的方法,但其技术复杂,环境、条件要求较高,不易被多数实验室接受和推广,可用来对HCV感染作确证实验。 展开更多
关键词 丙肝病毒抗体 丙肝病毒核心抗原 转录多聚反应
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犬瘟热病毒反转录-聚合酶链反应诊断方法的建立和初步应用 被引量:40
19
作者 李金中 何洪彬 +4 位作者 夏咸柱 殷震 涂长春 金宁一 李佑民 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期180-184,共5页
根据Baret报道的犬瘟热病毒Onderstepoort弱毒株的融合蛋白基因序列,设计合成了一对能扩增324bp基因片段的引物。将异硫氰酸胍-酚-仿一步法提取得到的细胞总RNA进行反转录,以此产物为模板进行PCR扩增... 根据Baret报道的犬瘟热病毒Onderstepoort弱毒株的融合蛋白基因序列,设计合成了一对能扩增324bp基因片段的引物。将异硫氰酸胍-酚-仿一步法提取得到的细胞总RNA进行反转录,以此产物为模板进行PCR扩增,并对PCR扩增条件进行了优化。经鉴定,以此对引物进行的PCR扩增,得到了与设计片段大小和酶切位点相同的产物,且不扩增犬细小病毒、犬腺病毒和狂犬病病毒犬的三种病原的核酸,这表明此方法为特异性的。对27条(只)临床病例和32份细胞培养物进行检查,并与电子显微镜负染检查结果进行了比较。初步应用研究的结果表明,此方法可用于犬瘟热病毒的临床诊断和实验研究。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 转录 聚合链式反应 诊断
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用反转录-聚合酶链反应检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究 被引量:1
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作者 周婷 文心田 +3 位作者 曹三杰 肖驰 王新 张雪锋 《四川农业大学学报》 CSCD 2005年第2期244-246,252,共4页
根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型毒株的基因序列设计了一对特异性引物P1/P2,扩增的片段为550bp,根据欧洲型毒株设计了一对特异性检测引物P3/P4,扩增的片段为433bp,建立PRRSV的RT-PCR的检测与血清型鉴别方法。特异性试验表明,这... 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型毒株的基因序列设计了一对特异性引物P1/P2,扩增的片段为550bp,根据欧洲型毒株设计了一对特异性检测引物P3/P4,扩增的片段为433bp,建立PRRSV的RT-PCR的检测与血清型鉴别方法。特异性试验表明,这2对引物均不能扩增其他常见的繁殖障碍相关病毒的RNA或DNA。敏感性试验表明,这2对引物可以分别到检测10-5TCID50和10-4TCID50的病毒含量。利用该方法对重庆、四川某些猪场中临床上疑似为PRRS的20份送检组织样品进行检测,只有引物P1/P2能扩增出与预期大小相符的RT-PCR产物;其中有15份样品呈PRRSV阳性结果,阳性率为75%,说明送检的样品感染的PRRSV为美洲型。试验结果表明该方法快速检测病料组织中PRRSV是可行的,是临床上对PRRS进行快速诊断和分子流行病学调查的实用方法。 展开更多
关键词 转录-聚合反应 繁殖呼吸综合征病毒 rt-pcr
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