铁皮石斛Ty1-copia类反转录转座子反转录酶(RT)序列的克隆与分析

该研究根据Tyl—copia类反转录转座子RT的通用引物，从铁皮石斛浙江临安（C15）和云南广南（A39）种质中扩增得到43条Tyl—copia类反转录转座子RT序列，这些核苷酸序列具有较高的异质性，主要表现为，序列长度变化范围260—266bp，终止密码子和移码突变，所有序列均富含碱基AT，一致性为47．1％～97．7％。经plantCARE软件分析发现受低温、热、光、各种植物生长调节物质等不同胁迫条件作用的调控元件、多个启动子的特征结构TATAbox和CAATbox的保守序列及其他一些调控元件。翻译成氨基酸后，有10条序列出现1～4个不同程度的终止密码子突变，5条序列出现移码突变，保守序列“SLYGKQ”发生变异的有39条序列。其氨基酸序列经过系统聚类后可分为6类；且与其他植物（尤其是单子叶植物的小麦、荸荠）具有较高的同源性，表明它们问可能存在着Tyl—copia反转录转座子的横向传递。

脱落酸对铁皮石斛Ty1-copia类反转录转座子转录活性的影响

研究以Ty1-copia类反转录转座子反转录酶区域的简并引物,对100μmol·L-1脱落酸（ABA）处理的铁皮石斛进行反转录PCR（RT-PCR）扩增,得到260 bp左右的目的条带,说明100μmol·L-1的ABA能诱导Ty1-copia类反转录转座子转录活性的表达。将目的条带回收、克隆和测序后分析得到42条Ty1-copia类反转录转座子反转录酶的保守序列,该序列变异性较大,核苷酸序列长度247-266 bp,同源性为46.3%-98.9%。经plantCARE软件分析发现与铁皮石斛基因组所分离的Ty1-copia类反转录转座子一样,存在多个受胁迫条件作用的调控元件、多个启动子的特征结构TATA box和CAAT box的保守序列及其他一些调控元件;但有转录活性的铁皮石斛Tyl-copia RT序列中与胁迫条件作用相关的调控元件明显增加。翻译成氨基酸后,有15条序列出现不同程度的终止密码子突变,19条序列出现移码突变,保守序列＂SLYGKQ＂全部发生不同程度的突变。其氨基酸序列经过系统聚类后可分为5类;且与基因组Tyl-copia RT序列聚类后发现多数发生转录的Tyl组反转录转座子RT序列与基因组Tyl组反转录转座子RT序列亲缘关系较远,说明经ABA诱导后发生转录的Tyl组反转录转座子RT序列与基因组Tyl组反转录转座子RT序列有很大的差异。

下丘脑GnRH-I mRNA在绍兴鸭松果腺中的表达

用反转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法检测 30至 15 0日龄绍兴鸭松果腺内GnRH ImRNA含量的变化。结果表明 ,绍兴鸭松果腺内存在GnRH ImRNA的表达且其核苷酸序列与绍兴鸭下丘脑内GnRH ImRNA仅有一个核苷酸差异 ,且不影响氨基酸的编码序列 ,但 30至 15 0日龄松果腺内GnRH ImRNA含量未出现显著性差异 (P >0 0 5 )。

人重组内皮抑素基因的克隆与融合表达

目的构建人内皮抑素(endostatin)融合蛋白表达载体,并在大肠杆菌中表达。方法用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)得到人内皮抑素全基因,连接PGEM-T载体,测序确认,定向克隆重组入pTRX表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。结果经SDS-PAGE分析,出现特异性蛋白质条带,大小与预期相符合。结论人内皮抑素基因在原核细胞表达载体pTRX中获得成功表达,为应用内皮抑素进行肿瘤的抗血管生成治疗奠定了基础。