lux基因发光乳球菌构建方法的研究

研究了构建lux基因发光乳球菌的方法。研究结果表明,利用设计和合成的低聚核苷酸引物及带有luxCDABE基因簇的质粒pSB377为模板,用PCR技术可以扩增出luxAB和luxCDABE基因片断。选作lux基因的媒介物质粒pMG36e,含有一个在革兰氏阴性、阳性菌中都能启动的复制起始点,与乳球菌启动子P32之下的多克隆位点连接,它能使lux基因成功地插入载体上,并在乳球菌中得以表达。在适宜的培养和电击条件下可以将重组质粒pMG36e-luxAB和pMG36e-luxCDABE转入乳球菌中,使普通的乳球菌变成带lux基因的发光乳球菌。lux基因发光乳球菌的理想的培养基是GMl7而不是M17。在液体培养基中培养时大质粒pMG36e-luxCDABE在无选择压力时其遗传特性不稳定,而小质粒pMG36e-luxAB具有稳定的遗传特性。

转lux基因发光乳球菌发光特性研究

为了将转lux基因乳球菌的发光特性应用于检测领域,系统研究了lux基因、世代、培养基、红霉素和培养时间等因素对lux基因发光乳球菌发光强度的影响。与转luxCDABE基因乳球菌相比,转luxAB乳球菌在未添加红霉素的GM17和M17培养基中培养时具有稳定的遗传发光特性。与M17培养基相比,GM17培养基培养的转lux基因发光乳球菌的发光特性更稳定。培养时间对转lux基因发光乳球菌的RLU(Relative light units)值有显著影响(p<0.01),一般在培养5 h时发光强度最高,而后持续下降;9 h后发光强度已难以检测。转lux基因发光乳球菌的传代对RLU无显著影响(P>0.05)。

转lux基因发光乳球菌产酸特性研究

目的:为使转lux基因发光乳球菌应用于检测领域,研究lux基因、世代、红霉素和培养时间等因素对转lux基因发光乳球菌产酸特性的影响。方法:将筛选的转luxCDABE基因发光乳球菌、转luxAB基因发光乳球菌菌株活化后接入液体培养基中,30℃培养,测定其产酸能力。结果:基因、世代对转lux基因发光乳球菌的产酸能力无显著影响(P>0.05),表明转入的lux基因大小对lux基因发光乳球菌的产酸性能无影响。红霉素可明显降低转lux基因发光乳球菌产酸速率,但对其最大产酸能力无显著影响。结论:筛选的转lux基因发光乳球菌的产酸性能具有稳定的遗传特性。