PAI siRNA表达载体的构建及鉴定

目的构建和鉴定针对PAI的发卡样小干扰RNA(siRNA)真核表达载体PAI siRNA。方法人工合成一对互补并编码相应短发夹状PAIsiRNA的寡核苷酸链,将其插入到pSilencerTM2.1-U6neo载体中,经测序鉴定所构建的重组载体是否正确;采用电转染法将构建的重组载体导入人肝癌细胞HpG2中,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、Western印迹法分别检测转染细胞PAI mRNA和蛋白的表达。结果经测序证明PAI siRNA序列正确;转染PAI siRNA载体后,HpG2细胞PAI mRNA和蛋白表达均较对照组明显下降(P<0.01)。结论测序结果表明发卡样PAI siRNA真核表达载体构建成功,转染HpG2细胞后获得稳定表达,并可特异性封闭PAI的表达,为进一步研究PAI siRNA载体提供了实验基础。