不同培养条件对大苞栝楼发根诱导的研究

本文采用发根农杆菌R1000和R1601对大苞栝楼无菌苗子叶和茎进行了发根诱导,通过对影响大苞栝楼发根诱导不同培养条件的研究,建立发根培养体系。实验结果表明当温度控制为25℃、无光条件、活化菌的光密度值OD600为0.7、溶液的pH维持在6.0及无2.4-D激素的条件下能够有效地诱导大苞栝楼发根,由发根中农杆碱的检测证明,发根农杆菌中的Ri质粒中T-DNA的在无菌苗中获得了转导,为大苞栝楼发根培养体系的建立奠定基础。

金银花发根诱导初探

研究了发根农杆菌的菌株类型、菌种浓度、浸染时间、预培养和共培养时间等对金银花发根诱导的影响。结果表明:农杆菌R1000培养OD600至0．6左右,稀释40倍浸染4 min时,诱导率最高,诱导率达58％。金银花外植体预培养5 d,与农杆菌共培养3 d,然后转入含500 mg／L羧苄青霉素的培养基杀菌培养是最适合的。

发根农杆菌诱导花生发根的条件优化

以花生无菌苗的不同部位为外植体,用发根农杆菌(Agrobacterium rhizogene)GIM1.141进行侵染,诱导发根,以为花生的转基因研究和花生发根提取白藜芦醇奠定基础。通过对重悬菌液乙酰丁香酮的添加、不同外植体、菌液浸泡时间以及发根培养基4种因素的研究,优化发根农杆菌的转化体系。结果表明,花生的叶片、子叶、下胚轴均能被GIM1.141诱导出发根,相同诱导条件下,各外植体的发根诱导率顺序为叶片>子叶>下胚轴;适宜的菌液浸泡时间为10min;附加乙酰丁香酮(100μmol/L),发根诱导率明显提高,花生叶片、子叶、下胚轴的最高发根诱导率分别为87.29%、75.8%、23.33%,因此,花生发根诱导的合适条件为以叶片和子叶为外植体,在添加乙酰丁香酮(100μmol/L)的菌液中浸泡10min诱导出来的发根经过除菌,能在MSB5培养基上自主生长。

发根农杆菌诱导甘薯发根条件的优化

通过诱导甘薯(徐薯18)发根的条件进行优化,分别对侵染时间(10min、20min和30min)、培养基[MS、MSJ(MS+BA0.1mg/L+NAA0.2mg/L)和MSS(MS+BA0.2mg/L+NAA0.1mg/L)]、诱导材料(叶片、叶柄和茎切段)和除菌药物剂量(羧苄青霉素浓度0.5mg/L、1.0mg/L和1.5mg/L)进行优化。试验按L9(34)正交设计,每个处理3次重复。然后通过PCR检测徐薯18和其发根中的rol基因。结果表明用发根农杆菌A4经20min侵染,通过MSJ活化的徐薯18的茎切段生成发根的发根诱导率最高,最佳的除菌羧苄青霉素浓度为1.0mg/L。PCR检测证明得到的发根是发根农杆菌诱导产生的。在此优化条件下诱导的发根诱导率高,得到发根的可靠性强,且生成的发根粗壮、生长迅速、分支众多。

不同发根农杆菌诱导花生发根研究

利用5种发根农杆菌侵染不同花生外植体,对比其发根诱导率,分析寻找利于花生转化的外植体、花生品种及发根农杆菌。结果表明,农杆菌94022诱导发根率较其它发根农杆菌高;后期继代培养中子叶诱导的发根易于培养,存活率高,生长状态好;在用培养后的子叶为外植体时,花育20较其它品种发根诱导率高。

发根农杆菌转化青蒿影响因素的研究

对叶盘法转化过程中各种影响因素进行研究．结果表明：发根农杆菌种类、基本培养基和青蒿株系对转化率有明显影响，而培养基ｐＨ在５．２～５．８对转化率没有明显影响；发根农杆菌ＡＴＣＣ１５８３４的转化率最高；基本培养基中ＭＳ效果最好；青蒿株系０２５对发根农杆菌最敏感；处于对数生长期的发根农杆菌（Ｄ６６０ｎｍ＝０．７５）稀释５倍后用来转化效果最好；幼嫩的叶片的转化率比成熟叶片高；向共培养培养基中加入乙酰丁香酮等酚类物质对转化没有促进作用．在最适的转化条件下，发根农杆菌ＡＴＣＣ１５８３４对青蒿株系０２５的转化率可达到１００％．ＰＣＲ检测证明，青蒿发根基因组中含有发根农杆菌Ｒｉ质粒ＴＤＮＡ上的ｒｏｌＣ片段．

人参发根R9923系皂苷生产研究

在1/2MS培养液内补料培养4周,人参发根R9923系中各单体皂苷含量与总皂苷含量大致上呈先降后升再降的过程,发根生物量与总皂苷含量呈上升趋势;不同瓶型培养的发根,其生物产量与皂苷含量随培养容积的增大而降低;发根工厂化培养适宜的接种量:种子罐为3～5g/50mL,培养2周,次级罐接种量为30g/400mL,再培养2周后,即可转入生产罐(5L)中继续培养至采收。

茶树微繁技术研究进展

本文从外植体、培养基、外加激素、发根诱导、以及最新的生物技术——微嫁接技术等几个方面概述了茶树微繁技术研究现状 。