发育及DNA损伤反应调节基因1的研究进展

发育及DNA损伤反应调节基因1(regulated in development and DNA damage responses 1,REDD1)又称为RTP801,是一个新近发现的低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)靶基因,在细胞和整体动物缺氧缺血模型中其表达显著升高,随着研究的深入,发现其对多种细胞刺激均能产生应激反应,在细胞凋亡过程中发挥着重要的调节作用;RTP801受到多种细胞信号通路的调控,研究其功能和作用机制可为临床缺血性疾病和肿瘤的防治等提供新的思路。

DNA损伤生物学反应中ATM对p21^(WAF1/CIP1)蛋白的直接磷酸化

毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白 (mutatedinataxiatelangiectasia ,ATM)是直接感受DNA双链断裂损伤并起始诸多DNA损伤信号反应通路的主开关分子 .已有研究发现 ,DNA损伤生物学反应中 ,ATM可通过磷酸化活化p5 3,继而转录活化细胞周期检查点蛋白p2 1WAF1 CIP1的表达 ,而对于ATM是否直接参与p2 1WAF1 CIP1的早期活化迄今尚无实验证明 .通过免疫共沉淀反应 ,检测到细胞电离辐射 (ionizingradiation ,IR)反应早期ATM与p2 1WAF1 CIP1蛋白存在相互作用 .将p2 1WAF1 CIP1蛋白编码基因全长克隆入原核表达载体pGEX4T 2 ,经诱导表达及亲和层析纯化获取GST p2 1融合蛋白作为磷酸化底物 .体外磷酸化实验检测证明 ,IR活化的ATM具磷酸化p2 1WAF1 CIP1蛋白的功能 ,并且此磷酸化功能可被PI3K家族特异性抑制剂Wortmannin所抑制 .结果揭示了IR后ATM可通过直接磷酸化p2 1WAF1 CIP1蛋白 ,在IR致DNA损伤生物学反应早期调控p2 1WAF1

前列腺素E1对急性缺血损伤大鼠肾组织血栓调节蛋白表达的影响

探讨前列腺素E1(prostaglandin E1,PGE1)对肾缺血再灌注损伤(ischemiareperfusion injury,IRI)大鼠血中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophils,PMNs)细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)水平和肾组织血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)表达的影响。健康Wistar大鼠80只随机分为空白对照组、假手术组、模型组、PGE1治疗组,每组按不同术后观察时间(1、3、6、24 h)均分。观察造模后其血清肌酐(creatinine,Cr)水平变化,采用流式细胞术和实时定量聚合酶链反应方法(Rt-PCR)同步监测ICAM-1表达水平和肾组织TM mRNA表达的动态变化。(1)模型组IRI损伤1 h,Cr水平虽然没有明显变化,但血清ICAM-1水平及肾小管坏死评分值已较假手术组明显增加(P均<0.05),并与肾组织TM mRNA表达升高的变化峰值时点相一致。(2)IRI损伤6 h,模型组和治疗组CrI、CAM-1水平均明显增高(P<0.05),但治疗组CrI、CAM-1水平及肾小管坏死积分值均明显低于模型组(P<0.05)。(3)肾组织中TM mRNA表达与肾小管损伤积分值呈现良好的相关性(r=0.69,P<0.01);且与ICAM-1水平的增加呈现良好的相关性(r=0.62,P<0.05)。(1)ICAM-1T、M mRNA表达增多,反映了IRI内皮细胞的损伤程度;(2)PGE1通过减少ICAM-1及TM mRNA水平的表达,阻抑凝血及炎症反应过程,保护内皮细胞,减轻肾组织损伤。

胞外信号调节激酶促进DNA损伤反应的作用机制

机体在长期进化中拥有一整套DNA损伤反应(DNA damage response,DDR)系统来保证基因组的完整性,其中最重要的就是通过激活检验点以阻止细胞周期进程,并修复损伤的DNA。细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路是经典的细胞信号转导通路,具有调节细胞增殖、分化、凋亡等多种功能,二者的功能性联系都能调节细胞增殖。本综述旨在阐述ERK激酶在DNA损伤反应中的作用。

EXO1蛋白在DNA损伤中研究进展

核酸外切酶(EXO)1兼有5'端-3'端外切酶及5'端结构特异性内切酶活性[1],属于皮瓣结构特异性内切酶(Rad)2/着色性干皮病(XP)G组蛋白家族的成员。EXO1蛋白具有EXO1a及EXO1b两种异构体,其中EXO1b的C端额外具有48个氨基酸,因而活性明显优于EXO1a[1],但两者的功能并无区别。

人重组神经调节蛋白1增强急性视神经损伤大鼠模型视网膜神经节细胞存活的保护作用

目的探究人重组神经调节蛋白1(NRG-1)对急性视神经损伤大鼠模型视网膜神经节细胞(RGCs)存活的保护作用及可能的机制。方法通过动脉夹夹持法建立视神经损伤大鼠模型,大鼠随机分为假手术组、模型组、NRG-1(0.5μg、1.0μg、3.0μg)组。NRG-1组大鼠术后30 min于玻璃体内分别注射0.5μg、1.0μg、3.0μg人重组NRG-1,其余大鼠以同样的方式注射等量生理盐水。通过闪光视觉诱发电位(F-VEP)检测术后2 h、1 d、2 d、7 d、14 d、28 d大鼠视神经P100波潜伏期和波幅的变化;术后28 d,通过霍乱毒素亚单位(CTB)示踪视网膜受压状态;另外采用TUNEL法检测视网膜和视神经组织中RGCs凋亡情况,酶联免疫吸附试验检测视神经组织中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β),免疫组化法检测NRG-1蛋白表达,Western blot法检测Nrf2、HO-1、Bach1蛋白表达。结果术后28 d,与假手术组相比,模型组P100波潜伏期延长,波幅降低,视网膜和视神经组织中RGCs凋亡数量增加,视神经组织中TNF-α、IL-1β、NO、MDA水平升高,且总蛋白HO-1、核蛋白Nrf2和Bach1蛋白表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05);而与模型组相比,NRG-11.0μg组和3.0μg组P100波潜伏期缩短,波幅升高,视网膜和视神经组织中RGCs凋亡数量减少,视神经组织中TNF-α、IL-1β、NO、MDA水平降低,总蛋白HO-1、核蛋白Nrf2和Bach1蛋白表达上调,差异均有统计学意义(P<0.05);而NRG-13.0μg组大鼠P100波潜伏期和波幅,RGCs和神经胶质细胞凋亡数量,视神经组织中TNF-α、IL-1β、NO、MDA水平与假手术组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论NRG-1蛋白在大鼠急性视神经损伤后期表达明显降低,而给予外源性人重组NRG-1能够通过抑制视网膜RGCs凋亡以及激活Nrf2/HO-1/Bach1通路发挥抗炎、抗氧化作用,从而实现对视神经损伤的修复和保护作用。

神经调节蛋白-1对脊髓损伤大鼠运动功能的影响及其机制

目的观察神经调节蛋白-1(neuregulin-1,NRG-1)对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)大鼠运动功能的影响,并探讨其可能的机制。方法选取36只健康8周龄雄性SD大鼠,随机分为假手术组(sham)、脊髓半横切模型组(SCI)和治疗组(NRG-1),每组12只。NRG-1组和SCI组大鼠脊髓半横切后,经尾静脉分别注射100μL NRG-1 b(10μg/kg)和等量PBS,连续注射4周;sham组大鼠仅行椎板切除术。术后第1、7、14、21、28天,采用BBB评分评估大鼠后肢运动功能;术后第28天,Nissl染色观察脊髓损伤区神经元形态学变化;免疫荧光染色和Western blot法检测小胶质细胞活化以及M1型极化;ELISA法检测脊髓组织中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)表达水平。结果术后第7和14天,SCI组和NRG-1组BBB评分均逐渐升高,但组间无显著差异(P>0.05);术后第21和28天,NRG1组BBB评分显著高于SCI组(P<0.05),但仍低于sham组(P<0.05);与SCI组相比较,NRG-1组神经元尼氏体光密度值显著升高(P<0.05),活化小胶质细胞减少,M1型小胶质细胞标志蛋白诱导型一氧化氮合酶表达水平显著降低(P<0.05),脊髓组织中致炎因子TNF-α、IL-1β和IL-6含量均显著降低(P<0.05)。结论NRG-1能够促进SCI大鼠运动功能恢复,其机制可能与抑制小胶质细胞M1型极化,减轻炎症反应有关。

STIP1调控EGR1表达并促进胃癌细胞DNA损伤修复

目的探讨应激诱导磷酸化蛋白1(STIP1)表达对于胃癌化疗抵抗的影响,并进一步探讨其潜在机制。方法构建STIP1过表达及敲低胃癌细胞系后,应用CCK-8、单克隆形成等实验检测胃癌细胞对5-氟尿嘧啶及顺铂、奥沙利铂的敏感性;并对过表达STIP1的胃癌细胞系进行RNA测序并验证获得STIP1所调控的下游分子及信号通路;最后应用免疫荧光、免疫印迹等方法检测STIP1对胃癌细胞化疗抵抗的影响是否依赖于其下游分子。结果STIP1过表达可显著增强胃癌细胞对于5-氟尿嘧啶及顺铂、奥沙利铂等细胞毒性药物的抵抗作用;并可促进化疗抵抗相关基因的表达;RNA表达谱测序发现STIP1可能促进重组修复相关信号通路的活化,而免疫印迹及qPCR等检测证实STIP1过表达可促进该通路相关基因的表达;免疫荧光检测进一步证实STIP1表达可影响5-氟尿嘧啶诱导的DNA损伤的重组修复能力;而应用重组修复抑制剂干预胃癌细胞后。免疫荧光检测获得STIP1表达对于5-氟尿嘧啶所诱导的胃癌细胞DNA损伤的影响主要是通过影响其同源重组修复途径。对于其下游机制的探索,通过生物信息学分析、免疫印迹、qPCR及免疫荧光,证实STIP1可调控EGR1表达进一步影响5-氟尿嘧啶所诱导的DNA损伤重组修复。结论STIP1调控EGR1表达影响胃癌细胞DNA损伤修复,进而促进其化疗抵抗。

CARD6通过调控ASK1表达抑制炎症反应和细胞凋亡保护心肌缺血再灌注损伤

目的:探讨胱天蛋白酶募集域蛋白6(CARD6)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中炎症反应和细胞凋亡的影响,并分析其相关分子机制。方法:将60只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(MIRI组)、MIRI+空载慢病毒(LV-NC)组、MIRI+CARD6过表达慢病毒组(MIRI+LV-CARD6组),每组15只。除Sham组外,其他各组大鼠采用手术结扎冠状动脉左前降支的方法构建MIRI模型。采用全自动生化分析仪检测心肌损伤指标含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测炎性细胞因子水平,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织形态学变化,原位末端标记测定(TUNEL)染色法检测大鼠心肌细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠心肌组织中凋亡相关蛋白表达,实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法和Western Blot法检测大鼠心肌组织中CARD6、细胞凋亡信号调节激酶1(ASK1)mRNA和蛋白表达。结果:与Sham组比较,MIRI组大鼠心肌细胞水肿变性,大量间质炎性细胞浸润,存在明显心肌组织病理损伤;大鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)水平及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平均升高;心肌细胞凋亡率升高,B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白表达量降低,Bcl-2相关X蛋白(Bax)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)蛋白表达量均升高;心肌组织中CARD6蛋白和mRNA表达水平均降低,ASK1蛋白和mRNA表达水平均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与MIRI组比较,MIRI+LV-CARD6组大鼠心肌细胞水肿减轻,间质炎性渗出减少,心肌组织病理损伤明显减轻;大鼠血清LDH、CK、CK-MB、cTnT、TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1水平均降低;心肌细胞凋亡率降低,Bcl-2蛋白表达量升高,Bax和Caspase-3蛋白表达量均降低;心肌组织中CARD6蛋白和mRNA表达水平均升高,ASK1蛋白和mRNA表达水平均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CARD6通过抑制炎症反应和细胞凋亡保护MIRI,其作用机制与调控ASK1表达有关。

REDD1升高加重脑梗死后血管内皮细胞损伤

目的:探讨发育及DNA损伤反应调节蛋白1(REDD1)在脑梗死后血管内皮细胞损伤中的作用。方法:采用RT-qPCR和Westernblot分析氧糖剥夺(OGD)诱导对人脑微血管内皮细胞(HBMECs)中REDD1表达的影响。CCK-8法分析REDD1沉默对OGD诱导的HBMECs损伤影响,采用DCFH-DA染色和肌动蛋白染色分别检测细胞内活性氧(ROS)生成和细胞骨架损伤的情况。在体内实验中,建立大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,分别采用REDD1小干扰RNA(si-REDD1)及其对照siRNA进行转染。在MCAO造模后3 d、7 d和14 d,对大鼠进行mNSS神经功能评分。在MCAO造模后14 d,通过TTC染色测量大鼠脑梗死体积,并采用免疫荧光双染法检测BrdU/NeuN和BrdU/vWF阳性细胞数。结果:经OGD处理后,HBMECs中REDD1的mRNA和蛋白表达上调(P<0.05)。OGD处理诱导细胞骨架损伤,并抑制了细胞活力,而敲减REDD1的表达减弱了OGD的损伤作用。此外,敲减REDD1表达阻止了OGD诱导的细胞内ROS生成。MCAO大鼠神经功能损害严重,且MCAO后第14天时TTC染色显示大脑半球梗死体积显著高于假手术组(P<0.05),通过si-REDD1敲减MCAO大鼠脑组织中REDD1的表达,大鼠在MCAO后3、7和14 d的mNSS评分均显著低于MCAO组(P<0.05),且大鼠的梗死体积显著减少(P<0.05)。免疫荧光染色显示,REDD1沉默组的BrdU+/NeuN+细胞数和BrdU+/vWF+细胞数较MCAO组均显著增加(P<0.05)。结论:敲减REDD1表达减弱了OGD诱导的HBMECs损伤和氧化应激,并有助于增强MCAO大鼠神经发生和血管生成,促进神经功能恢复。

急性胰腺炎大鼠肺组织与肺泡巨噬细胞早期生长反应基因-1的表达

目的:研究观察早期生长反应基因-1 (EGR-1)在急性胰腺炎(AP)大鼠肺组织与原代培养肺泡巨噬细胞(AM)中表达的作用.方法:将♂Wistar大鼠40只,随机均分为4组,分别于胆总管内逆行注入生理盐水或不同浓度牛磺胆酸钠溶液.3 h后处死动物,取血分离血清,并剪取胰腺及肺组织.检测血清TNF-α和IL-1β水平,胰腺组织病理评分,肺组织湿质量/干质量比,并对肺组织进行EGR-1免疫组化染色.原代培养AM分成4组,分别采用不同浓度胰弹性蛋白酶进行刺激,免疫细胞化学染色法检测EGR-1在AM的表达,并检测培养液中TNF-α和IL-1β浓度.RT-PCR分别检测AM,EGR-1,TNF-α,IL-1βmRNA表达.结果:肺组织EGR-1表达随AP病情加重而呈增强趋势,并与血清TNF-α和IL-1β水平、胰腺组织病理评分、肺组织湿质量/干质量比均呈显著正相关(r=0.63,0.58,0.59,0.61,P<0.01)AM中EGR-1蛋白.mRNA表达程度与TNF-α和IL-1β蛋白(r=0.64、0.51,P<0.01)以及mRNA水平均呈显著正相关(r=0.62,0.59,P<0.01).结论:EGR-1可能在AP并发肺损伤中起重要作用,其机制可能与其介导炎性细胞因子生成有关.

加味脑泰方通过SIRT1途径减轻脑缺血再灌注损伤

目的研究加味脑泰方通过沉默信息调节蛋白1(SIRT1)途径减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及机制。方法雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、加味脑泰方(JWF)组、JWF+EX527组,采用线栓法建立脑缺血再灌注损伤模型,JWF组给予加味脑泰方灌胃干预14天,JWF+EX527组给予加味脑泰方灌胃及SIRT1拮抗剂EX527腹腔注射干预14天,比较四组大鼠神经功能评分、炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平及B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、SIRT1、核因子κB(NF-κB)、叉头框蛋白(FoxO1)表达量的差异。结果与对照组比较,模型组大鼠神经功能评分、血清及脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α水平、脑组织中Bax、NF-κB和FoxO1表达量均明显增加,脑组织中Bcl-2、SIRT1表达量均减少(P<0.05);与模型组比较,JWF组大鼠神经功能评分、血清及脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α水平、脑组织中Bax、NF-κB和FoxO1表达量均明显减少,脑组织中Bcl-2、SIRT1表达量均明显增加(P<0.05);与JWF组比较,JWF+EX527组大鼠神经功能评分、血清及脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α水平、脑组织中Bax、NF-κB和FoxO1表达量均明显增加,脑组织中Bcl-2、SIRT1表达量均明显减少(P<0.05)。结论加味脑泰方能够减轻大鼠脑缺血再灌注损伤,其可能的机制为激活SIRT1并抑制NF-κB介导的炎症反应以及FoxO1介导的细胞凋亡。

发育及DNA损伤反应调节基因1的研究进展

REDD1，发育及DNA损伤反应调节基因1（regulated in development and DNA damage responses 1）又称为RTP801、DDIT4、Dig2，是一个新发现的低氧诱导因子-1（hypoxia inducible facet-1，HIF-1）的靶基因，在人体正常组织广泛低表达，对多种细胞刺激均能产生应激反应，受多种细胞信号通路的调控，在细胞凋亡过程中发挥着重要的调节作用，和很多疾病的发生有关。深入研究REDD1的功能和作用机制可为临床某些疾病的防治提供新的思路。

Ref-1蛋白的研究进展

氧化还原因子 1(Ref 1)是一种多功能蛋白酶 ,其主要作用是对氧化性损伤的DNA进行修复和调节转录因子的DNA结合活性。本文重点综述其生物学功能及其在氧化性损伤对p5 3调节、肿瘤。

高良姜素减轻乙型病毒性肝炎模型大鼠的炎性反应

目的探讨高良姜素(Gal)对乙型病毒性肝炎(乙肝)大鼠炎性反应的影响。方法大鼠随机分为对照组、乙肝组[尾静脉注射乙型肝炎病毒(HBV)]、Gal低(Gal-L)和高剂量(Gal-H)组、阳性药拉米夫定组、Gal-H+AMPK抑制剂(compound C)组,每组12只。造模后进行药物处理,给药1次/d,持续8周。检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、谷草转氨酶(AST)水平;HE染色检测肝组织病理变化;TUNEL染色检测细胞凋亡;染色质免疫共沉淀检测HBV病毒载量;ELISA检测肝组织中单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素(IL-12)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、p-AMPK、SIRT1蛋白表达。结果与乙肝组比较,Gal-L组、Gal-H组、拉米夫定组肝脏损伤减轻,血清中AST、TBIL、ALT水平降低,肝组织中细胞凋亡率、HBV病毒载量、MCP-1、IL-12、TNF-α水平及caspase-3、Bax蛋白降低,p-AMPK、SIRT1蛋白升高(P<0.05);Compound C减弱了高剂量Gal对乙肝大鼠肝组织中炎性反应、细胞凋亡及HBV病毒载量的抑制作用。结论Gal抑制乙肝大鼠炎性反应的机制可能与上调AMPK/SIRT1通路有关。

发育及DNA损伤反应调节基因1在胎儿生长受限胎盘中的表达及其意义

目的探讨发育及DNA损伤反应调节基因1(REDD1)在胎儿生长受限(FGR)胎盘中的表达情况。方法收集2011年6月-2012年12月在上海市长宁区妇幼保健院剖宫产或经阴道分娩的足月单胎FGR和正常胎盘各15例,分别作为研究组和对照组,采用免疫组织化学染色方法检测REDD1在胎盘组织中的表达;采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法检测REDD1在正常和FGR胎盘组织中mRNA和蛋白水平的变化。结果 REDD1蛋白主要表达于胎盘滋养细胞胞质中,FGR胎盘组织中REDD1 mRNA和蛋白水平均显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论发育及DNA损伤反应调节基因1可能参与FGR的发生机制。

SIRT6过表达激活AMPK/Nrf2/HO-1通路抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡

[目的]探讨沉默调节蛋白6(SIRT6)过表达抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞凋亡是否涉及腺苷酸活化蛋白激酶/核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1(AMPK/Nrf2/HO-1)信号通路的激活。[方法]将实验分为4组:对照组、AngⅡ组、AngⅡ+SIRT6组和AngⅡ+空载体(EV)组,通过RT-PCR检测SIRT6的mRNA水平,MTT法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测SIRT6、心肌细胞凋亡相关蛋白(Bax、cleaved Caspase-3、Bcl-2)、DNA损伤相关蛋白(γ-H2AX、p-ATM)及AMPK/Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白(p-AMPK、Nrf2、HO-1)的表达水平,DCFH-DA染色法测定活性氧(ROS)含量,比较各组间上述指标的变化情况。[结果]与对照组相比,AngⅡ组SIRT6的mRNA、蛋白表达水平及细胞活性明显降低,细胞凋亡率增高,Bax、cleaved Caspase-3表达升高,Bcl-2表达降低,γ-H2AX、p-ATM蛋白表达升高,p-AMPK、Nrf2、HO-1蛋白表达降低,ROS活性增高(均P<0.01)。与AngⅡ+EV组相比,AngⅡ+SIRT6组SIRT6水平及细胞活性增高,细胞凋亡及Bax、cleaved Caspase-3表达降低,Bcl-2表达升高,γ-H2AX、p-ATM蛋白表达降低,p-AMPK、Nrf2、HO-1蛋白表达升高,ROS的活性降低(均P<0.01)。[结论]SIRT6过表达抑制AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡与AMPK/Nrf2/HO-1信号通路的激活有关。

磷酸化AKT在卵巢癌中表达的临床意义及其与新癌基因REDD1表达的相关性研究

目的研究磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)在卵巢癌中的表达与卵巢癌患者的临床病理因子以及生存预后之间的关系,并分析p-AKT表达与发育及DNA损伤反应调节基因1(REDD1)表达的相关性。方法收集卵巢癌组织标本95例,交界性肿瘤23例,正常卵巢表面上皮和输卵管组织18例。采用免疫组织化学En Vision两步法检测p-AKT和REDD1的表达,分析p-AKT表达与患者临床病理因子(分期、分级、化疗反应、无瘤生存期和总体生存期等)的关系,并分析p-AKT和REDD1表达的相关性。结果 1卵巢癌组织中p-AKT表达率为55.8%(53/95),均高于卵巢正常上皮组织(16.7%)和卵巢交界性肿瘤组织(13.0%)(P<0.05)。2 p-AKT蛋白的表达与卵巢癌的分化程度低、临床晚分期相关,且在浆液性癌中的高表达率高于其他组织学类型,但与有无腹水形成无显著相关性(P>0.05)。3 p-AKT在化疗无效组患者中的表达高于有效组(P<0.05)。4 pAKT蛋白高表达患者的总体生存期和无瘤生存期低于低表达者(P<0.05)。5卵巢癌中p-AKT的表达和REDD1的表达呈正相关性(C=0.626,P<0.05)。结论 p-AKT是影响卵巢癌患者化疗反应以及预后的一个重要因素;AKT可能被持续性高表达的REDD1激活,从而促进细胞增殖,参与卵巢癌的病理发生。

大鼠海马发育过程中Rho GTPases相关信号分子mRNA的表达

目的探讨Rho GTPases相关信号分子的发育规律。方法RT-PCR法检测大鼠发育不同阶段Rho-A、Rac-1、CRMP-1和Tub β3mRNA的表达。结果RT-PCR实际扩增长度与设计长度相吻合。内参照β-actin的PCR产物电泳条带在各个阶段均呈高表达。Rho-A和Rac-1的表达有相似的变化规律,随着海马发育呈明显的阶段性,表达的高峰在胚胎、幼年和老年阶段,而新生阶段和成年阶段处于相对低表达阶段;Rac-1的表达量在海马发育的各个阶段均超过Rho-A的表达量。CRMP-1和Tubβ3的表达从胚胎到成年的各个阶段与CRMP-1的表达具有相似的变化趋势,以胎鼠、新生大鼠和幼年大鼠表达较多,但老年阶段CRMP-1的表达较成年阶段显著升高(P<0.05),而Tubβ3在老年阶段停留在成年阶段的水平。结论大鼠海马发育过程中,Rho-A和Rac-1呈阶段性高表达,CRMP-1和Tubβ3的表达从胚胎到成年逐渐减少,但老年阶段CRMP-1表达再次增多。

人呼吸道合胞病毒转录调节基因转染肺腺癌细胞系的研究

目的 获得稳定表达人呼吸道合胞病毒(h RSV) M2 - 1基因的人肺腺癌细胞系。方法 通过基因重组法构建h RSV M2 - 1基因真核表达载体,用脂质体将其转染人肺腺癌PAa和A5 4 9细胞,经G4 18筛选获得阳性表达细胞株,并用逆转录-聚合酶链反应(RT- PCR)和Western Blot进行验证。结果 得到了约6 5 0 bp的基因插入片段,DNA测序表明该基因高度保守。筛选出了稳定高量表达M2 - 1基因的PAa和A5 4 9细胞,并被证实有M2 - 1蛋白表达。结论 获得了稳定表达h RSV M2 - 1蛋白的PAa和A5 4