氯胺酮通过MEF2信号通路调节发育期神经元突触生长及突触重塑

目的探讨氯胺酮不同暴露时间下对发育神经元肌细胞增强因子2(MEF2)信号通路及突触生长相关蛋白synapsin I表达影响。方法新生5 d龄SD大鼠,随机分为2,4,6和24 h氯胺酮组(T组)和对照组(C组)。将新生5d SD大鼠皮下注射氯胺酮(20 mg·kg-1)干预。对照组不做任何处理。干预后在各对应时间点提取海马神经元总RNA,利用real-time PCR进行定量分析MEF2信号通路(MEF2 mRNA、synGAP I mRNA和Arc mRNA)及突触形成相关基因synapsin I mRNA表达水平。结果与C组相比,用氯胺酮干预后时间依赖性下调海马神经元MEF2 mRNA、synGAP I mRNA、Arc mRNA(P<0.05)。Synapsin I mRNA表达则时间依赖性上调(P<0.05)。麻醉后24 h恢复正常。结论氯胺酮短暂下调MEF2信号通路而上调synapsin I表达,其机制可能是Arc表达上调增加突触数目以致synapsin I表达上调。

吸入性全身麻醉药对发育期神经元的电生理功能影响的研究进展

临床常用吸入性全身麻醉药异氟烷、七氟烷和地氟烷等均能增强机体对外源性氨酪酸(GABA)的电反应,通过GABAA发挥生物学效应。而在发育期神经元电生理功能具有阶段特异性:GABAA受体介导的氯离子外流引起神经元去极化;α氨基羟甲基唑丙酸受体尚无完整功能,N甲-基-D-天冬氨酸受体的激活依赖GABAA受体,在神经元突触形成方面起着重要的作用。此外,氯离子引导的除极还可以激活细胞膜上电压依赖性钙通道引起钙内流。发育期神经元电生理特点使其在生长发育过程中容易受到吸入性全身麻醉药的影响。

长链非编码RNA Peg13在七氟烷所致的发育期原代神经元凋亡中的作用

目的研究长链非编码 RNA(long non-coding RNA,lncRNA)Peg13(paternally expressed 13)在七氟烷所致的发育期原代神经元凋亡中的作用。方法以胎龄为 14.5 d 的小鼠胎鼠的原代神经元为研究对象,实时定量 PCR 检测七氟烷处理不同时间后 lncRNAPeg13 的表达水平。荧光原位杂交实验检测 lncRNA Peg13 在原代神经元中的定位。构建 lncRNA Peg13 过表达和敲减质粒,分别转染原代神经元。4.1%的七氟烷处理 6 h 后,荧光显微镜观察原代神经元的形态改变;采用 CCK-8 分析原代神经元的活力;采用 TUNEL、Western blotting 检测原代神经元的凋亡程度。结果在七氟烷处理的原代神经元中,lncRNA Peg13 的表达水平呈时间依赖性下降。LncRNA Peg13 在原代神经元的细胞质和轴突中广泛表达。过表达 lncRNA Peg13 可明显缓解七氟烷处理所致的神经元形态改变,导致神经元活力提高,凋亡细胞比例减少,Bcl-2、Bax 蛋白表达量的比值(Bcl-2/Bax)升高,caspase-3 的表达水平降低。敲减 lncRNAPeg13 可明显加剧七氟烷处理所致的神经元形态改变,导致神经元活力降低,凋亡细胞比例增加,Bcl-2/Bax 降低,caspase-3 的表达水平升高。结论 LncRNA Peg13 能够缓解七氟烷诱导的发育期原代神经元的凋亡。

丙泊酚通过抑制小鼠海马神经元突触释放组织纤溶酶原激活物引起神经毒性损伤

目的:明确丙泊酚对体外培养的发育期新生小鼠海马神经元释放组织纤溶酶原激活物(tPA)的影响,并进一步探讨加入外源性tPA能否逆转丙泊酚对发育神经元的毒性损伤作用。方法:将体外培养的发育期小鼠海马神经元分为4组:对照组(C组)、丙泊酚组(Pro组)、tPA组和丙泊酚+tPA组(Pro+tPA组)。C组不做任何处理;Pro组在培养液中加入丙泊酚,终浓度为5、10、30μmol/L,继续孵育不同的时间(1 h、2 h、3 h、6 h);tPA组在培养液中加入tPA,终浓度为1μmol/L,继续孵育6 h;Pro+tPA组在在培养液中同时加入tPA(终浓度1μmol/L)及丙泊酚(终浓度10μmol/L),继续孵育6 h。检测各组神经元凋亡率及凋亡指标actived-caspase-3蛋白的表达情况。结果:Pro组神经元的凋亡率及actived-caspase-3蛋白的表达水平较C组显著上调(P<0.05)。Pro组tPA水平显著低于C组(P<0.05)。Pro+tPA组的神经元的凋亡率及actived-caspase-3蛋白的表达水平显著低于Pro组(P<0.05)。结论:丙泊酚可通过抑制神经元释放tPA而对体外培养的新生小鼠发育期海马神经元产生毒性损伤作用,外源性加入tPA可部分逆转丙泊酚的神经毒性作用。