发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶的性质研究

[目的]研究发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶的酶学性质。[方法]从发芽咖啡豆中提取α-半乳糖苷酶,研究不同温度和pH下的酶活,并确定该酶的最适温度和pH。研究了不同金属离子和不同离子强度(NaCl)对α-半乳糖苷酶酶活的影响。Lineweaver-Burk双倒数作图法测定该酶的Km和Vmax。[结果]α-半乳糖苷酶的最适温度和pH分别为45℃、6.0,热稳定温度范围为20～50℃,pH稳定范围为5.0～7.0。Na+、K+、Mg2+和Cu2+对α-半乳糖苷酶酶活的影响不大,Zn2+促进酶活,Ba2+对酶活稍有抑制,Hg2+强烈抑制α-半乳糖苷酶的活性。在0～0.25mol/L离子强度(NaCl)范围内,α-半乳糖苷酶的酶活不受影响。Lineweaver-Burk双倒数作图法测定该酶的Km和Vmax分别为0.556mmol/L、1.19μmol/min。[结论]该研究为发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶的进一步应用提供理论指导。

发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶的化学修饰

从发芽咖啡豆中提取α-半乳糖苷酶,在一定浓度条件下,化学修饰剂对发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶的化学修饰结果显示:色氨酸是α-半乳糖苷酶活性中心的必需氨基酸,-SH、-COOH和组氨酸对α-半乳糖苷酶的活性有影响,精氨酸、赖氨酸和-S-S-不是α-半乳糖苷酶活性中心的必需基团。邹氏作图法显示α-半乳糖苷酶活性中心的必需色氨酸数目为1。

从发芽咖啡豆中分离纯化α-半乳糖苷酶的研究

[目的]研究从发芽咖啡豆中分离纯化α-半乳糖苷酶。[方法]通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换色谱和Sephacry1 S-200-HR凝胶过滤色谱等分离纯化技术,从发芽咖啡豆中分离纯化a-半乳糖苷酶。SDS-PAGE用来分析该酶的纯度和分子量。[结果]经过3步分离纯化之后,发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶的比酶活达到191.50 nkat/mg,纯化倍数为23.18倍。与绿咖啡豆α-半乳糖苷酶相比,发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶的比酶活较高,但产率和总的提取率都较低。SDS-PAGE分析结果表明,该酶出现单一谱带,分子量为3 8805 D。[结论]发芽咖啡豆α-半乳糖苷酶产量和总提取率的提高有待进一步的研究。