小刺猴头液体深层发酵浸膏多糖提取工艺的优化及分离纯化

采用热水浸提法提取小刺猴头液体深层发酵浸膏多糖,在液料比、提取时间和提取温度单因素试验的基础上,利用SAS 9.2(the SAS System for Windows 9.2)软件设计响应面,以多糖得率作为响应值,优化得最佳提取条件:液料比(mL/g)2.29∶1,提取时间4.52 h,提取温度79.5℃,2次平行多糖得率12.28%。通过乙醇分级、脱蛋白、透析、过凝胶柱分离多糖,采用醋酸纤维素薄膜电泳、柱层析、紫外光谱及反复冻融鉴定为均一多糖。

小刺猴头菌发酵浸膏多糖对肉仔鸡肠道菌群的影响

为研究饲粮中添加不同水平小刺猴头菌发酵浸膏多糖对肉仔鸡肠道pH和肠道菌群的影响。试验选用1日龄健康且生产性能相近的艾维茵肉仔鸡240只,随机分为4组,每组3个重复,每个重复20只。选用无任何抗生素的玉米—豆粕型饲粮作为基础饲粮,各试验组分别在基础饲粮中添加0,0.1%,0.3%,0.5%小刺猴头菌发酵浸膏多糖,试验期42 d。分别于14,21,28,42日龄无菌取回肠、盲肠食糜以检测肠道pH和菌群数量。结果表明:0.1%,0.3%,0.5%组显著提高了肉仔鸡的回肠、盲肠乳酸杆菌和双歧杆菌的数量(P<0.05),降低了肠道内大肠杆菌、沙门氏菌和肠球菌的数量,尤以0.5%添加组的效果最好。0.1%,0.3%,0.5%组降低了肉仔鸡回肠、盲肠的pH,且效果明显。

小刺猴头菌液体深层发酵浸膏多糖HFP及HFA的抗肿瘤活性

目的对从小刺猴头菌液体深层发酵浸膏中提取的多糖HFP及HFA的抗肿瘤活性进行初步研究。方法 MTT法测定HFP和HFA对体外培养的人肝癌细胞SMMC7721、人肺腺癌细胞SPC-A-1和人胃癌细胞SGC7901的生长情况。预防性及治疗性给S180荷瘤小鼠灌服HFP和HFA,测定小鼠瘤重、体重、脾重及胸腺重,并计算抑瘤率、脾系数及胸腺系数。结果 HFP和HFA对体外培养的3种肿瘤细胞均表现出一定的抗肿瘤活性,但HFP的抑制作用好于HFA。HFP可抑制小鼠体内S180实体瘤的生长,且预防组的抑瘤率高于治疗组,HFP组的脾系数和胸腺系数明显高于CTX组。结论 HFP和HFA在体外及体内均具有一定的抗肿瘤活性,且HFP的作用好于HFA。

榆耳深层发酵浸膏醇提物的抗氧化活性研究

将榆耳深层发酵浸膏95%乙醇提取物过大孔树脂柱,以体积分数为10%、30%、50%的乙醇进行梯度洗脱,回收洗脱液后得3个组分,即A1、A2、A3;另将A1、A2、A3进行正丁醇萃取后得到相应的3个组分B1,B2,B3。对6个组分的抗氧化活性进行了比较研究,结果表明均具有抗氧化活性,其中A2、B3组分的还原能力较强,分别为0.215,0.218;A1组分对超氧阴离子和羟基自由基的清除效果较好,清除率分别为13.0%、79.3%。

超声波提取云芝发酵浸膏总三萜化合物最佳工艺研究

通过正交试验对用超声波技术提取云芝发酵浸膏中总三萜化合物进行了工艺条件的优选,确定超声波最佳提取工艺。并运用分光光度法进行含量测定,以三萜含量为指标,与传统醇提法进行比较分析。实验表明:最佳提取工艺为:超声时间30 min、提取温度40℃、提取3次、提取频率70Hkz。超声提取率为1.23%,常规提取率为0.56%。结果显示:利用超声波提取云芝发酵浸膏中总三萜化合物是有效的,最佳提取工艺简便可行,大幅度提高了提取率,并能显著减少提取时间。

小刺猴头发酵浸膏多糖对肉鸡抗氧化功能的影响

以小刺猴头发酵浸膏多糖为试验材料,研究其对肉鸡肝脏及血清中T-SOD和CAT的活力以及MDA含量的影响。空白组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中添加不同水平(1 000,3 000,5 000 mg/kg)的小刺猴头发酵浸膏多糖,试验期为28 d,检测肉鸡血清及肝脏中T-SOD和CAT的活力及MDA的含量。结果显示:当添加量为1 000,3 000 mg/kg时,肉鸡血清及肝脏中的T-SOD和CAT的活力与空白组相比差异显著(P<0.05),添加量为1 000,3 000,5 000 mg/kg时,肉鸡血清及肝脏中MDA的含量与空白组相比极显著降低(P<0.01)。小刺猴头发酵浸膏多糖可以增强肉鸡血清及肝脏中的SOD和CAT的活力,而对MDA有抑制或清除作用。

小刺猴头菌发酵浸膏多糖对肉鸡脂肪沉积的影响

为研究小刺猴头菌发酵浸膏多糖(Polysaccharides from the fermentation extract of Hericium caputmedusae,HFP)对肉鸡血清脂类指标、腹脂沉积、盲肠短链脂肪酸以及肝脏、肌肉、粪便中脂肪含量的影响,选用1日龄AA肉鸡240只,随机分为4个处理,每处理3个重复,每重复20只,分别饲喂含HFP为0、0.1%、0.3%和0.5%的日粮,试验期为42d。结果表明:1)日粮中添加HFP可显著降低14、28和42日龄肉鸡血液甘油三酯(TG)含量(P<0.05),0.3%和0.5%水平的HFP添加组可显著降低肉鸡肝脏TG含量(P<0.05);2)0.3%和0.5%水平的HFP添加组肉鸡的腹脂率显著低于对照组(P<0.05);3)日粮中添加HFP对肉鸡体重、腿肌脂肪含量、胸肌脂肪含量、粪便脂肪含量无显著影响(P>0.05);4)添加HFP可显著增加肉鸡盲肠丙酸含量(P<0.05),显著降低盲肠乙酸和丙酸的比例(P<0.05);5)变量间相关性分析表明,14日龄时,肉鸡盲肠丙酸含量与腹脂率显著负相关(r=-0.992),乙酸和丙酸的比例与腹脂率显著正相关(r=0.989);28日龄时,盲肠丙酸含量与血液TG含量显著负相关(r=-0.985),乙酸和丙酸的比例与血液TG含量显著正相关(r=0.996);42日龄时,乙酸和丙酸的比例分别与血液TG含量、腹脂率显著正相关(r=0.951,0.979)。以上结果提示,在肉鸡日粮中添加HFP可以显著降低血液TG含量,降低腹脂沉积,可能是通过调节肉鸡盲肠短链脂肪酸的含量和比例而促进机体脂类代谢。

小刺猴头菌发酵浸膏寡糖的制备及其对肠道菌群体外生长的影响

目的制备小刺猴头菌发酵浸膏寡糖,并检测其对肠道菌群体外生长的影响。方法采用酶降解、酸降解两种方法制备小刺猴头菌发酵浸膏寡糖,通过葡聚糖凝胶层析法与荧光辅助糖电泳法(fluorophore assisted carbohydrate electrophoresis,FACE)进行分离分析,并观察不同降解条件产物对大肠埃希菌和鼠李糖乳杆菌体外生长的影响。结果最佳酶降解反应条件为料液比1∶45,反应温度50℃,反应时间5 h,选取还原糖得率低(21.67%)、中(32.33%)、高(36.11%)3组寡糖产物,分别命名为HFP-M1、HFP-M2、HFP-M3;最佳酸降解反应条件为反应温度25℃,pH 3,反应时间1 h,选取还原糖得率低(39.72%)、中(44.93%)、高(48.25%)3组寡糖产物,分别命名为HFP-S1、HFP-S2、HFP-S3;层析结果显示,酸降解寡糖比酶降解寡糖相对分子质量小;FACE分析显示,在32%的凝胶浓度下,酶降解寡糖可分离出较明显的条带,而酸降解寡糖条带不太清晰;两种方法降解获得的6种寡糖均能显著抑制大肠埃希菌的繁殖,促进鼠李糖乳杆菌的生长,且效果优于小刺猴头菌发酵浸膏多糖。结论采用酶降解和酸降解两种方法制备的小刺猴头菌发酵发酵浸膏寡糖对大肠埃希菌的繁殖具有抑制作用,对鼠李糖乳杆菌的生长均有促进作用。本实验为大分子小刺猴头菌发酵浸膏多糖及其降解产物应用于医药保健或功能性食品的开发提供了实验依据。

树舌液体深层发酵浸膏多糖在粘附中的作用

采用Sw1116细胞进行粘附试验,研究树舌液体深层发酵浸膏多糖(GAP)能否影响细菌对细胞的粘附。结果表明:GAP质量浓度为300μg/mL时,对大肠杆菌、沙门菌的细胞粘附抑制最为明显,粘附率分别降至(22.8±1.2)、(31.2±1.6)个细菌/细胞,对乳酸杆菌粘附有明显的促进作用,粘附率达(40.0±1.3)。说明树舌液体深层发酵浸膏多糖对大肠杆菌、沙门氏菌的细胞粘附具有抑制作用,对于乳酸杆菌的粘附有促进作用,提示该GAP具有调节肠道微生态的潜在应用价值。

树舌发酵浸膏对肉鸡盲肠微生物菌群及SCFA的影响

为研究肉鸡日粮中添加树舌[Ganoderma applanatum(Pers.ex Gray.)Pat.]发酵浸膏对肉鸡盲肠道微生物菌群及短链脂肪酸的影响,选用1日龄AA肉鸡225只,随机分为5个处理组,即空白组(基础日粮)、抗生素组(基础日粮中添加5 mg/kg黄霉素)、3个剂量的GAC添加组(基础日粮中分别添加1.57,3.15,6.29 g/100 g的GAC),每个处理3组重复,每组重复15只。试验期42 d。结果表明:肉鸡21日龄时,各GAC添加组沙门氏菌显著低于空白组(P<0.05);各GAC添加组乳酸杆菌显著高于空白组(P<0.05);各GAC添加组盲肠乙酸、丙酸浓度显著高于空白组(P<0.05);6.29%GAC添加组盲肠丁酸浓度显著高于空白组(P<0.05)。肉鸡42日龄时,1.57%和6.29%GAC添加组沙门氏菌显著低于空白组(P<0.05),6.29%GAC添加组效果较好;各GAC添加组乳酸杆菌显著高于空白组(P<0.05)。1.57%与6.29%GAC添加组盲肠乙酸、丙酸浓度显著高于空白组(P<0.05);各GAC添加组盲肠丁酸浓度显著高于空白组(P<0.05)。以上结果提示,GAC在肉鸡生长过程中可以增加肠道短链脂肪酸浓度,促进肠道乳酸杆菌的增殖,抑制沙门氏菌的生长,具有改善肠道菌群的作用。

扁灵芝发酵浸膏对肉鸡淋巴细胞增殖及细胞因子含量的影响

为了研究扁灵芝发酵浸膏[Fermentation concentrate of Ganoderma applanatum(Pers.)Pat,GAC]对肉鸡免疫功能的影响,试验选择1日龄AA肉鸡225只,随机分为5组,每组3个重复,每个重复15只,分别为空白组(饲喂基础日粮),抗生素组(饲喂基础日粮+5 mg/kg黄霉素)和基础日粮中分别添加0.05%、0.10%、0.20%三个浓度多糖的GAC试验组,试验期42 d。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定肉鸡外周血淋巴细胞增殖情况,ELISA法测定血清中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)的含量。结果表明:日粮中添加GAC能够促进T、B淋巴细胞增殖,提高肉鸡血清中细胞因子的含量。说明基础日粮中添加GAC能够提高肉鸡免疫功能。

桦褐孔菌发酵浸膏抑菌活性成分的研究

以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、克氏库克菌(Kocuria kristinae)、粪肠球菌(Streptococcus faecalis)、大肠杆菌(Escherichia coli)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii)和绿脓假单胞菌(Pesudomonas pyocyaneum)为受试菌,采用滤纸片法检测桦褐孔菌(Inonotus obliquus)发酵浸膏各极性部位的抑菌活性。利用色谱技术进行分离纯化,根据理化性质和谱学数据进行结构鉴定,确定了桦褐孔菌石油醚提取物的化学成分及乙酸乙酯层抑菌单体化合物的结构。结果表明:桦褐孔菌发酵浸膏的乙酸乙酯层抑菌活性较强,通过分离纯化,从该层分离得到了苯甲酸,并确定为主要抑菌活性成分。

灵芝发酵液浸膏多糖对大肠杆菌生长抑制效果的观察

采用液体培养和固体培养的方法研究了灵芝发酵液浸膏多糖对大肠杆菌体外生长的影响。结果表明：5.0-40.0 g/L的灵芝发酵液浸膏多糖均具有抑制大肠杆菌生长的活性。

树舌发酵浸膏多糖对肉鸡屠宰性能和肉品质的影响

为了验证树舌发酵浸膏多糖(GAP)对肉鸡屠宰性能和肉品质的影响,试验采用1日龄AA肉仔鸡225只,随机均分成5组,分别为对照组、抗生素组和0.05%、0.10%、0.20%GAP组,试验期为42 d,测定肉鸡生产性能、屠宰性能和肉品质指标。结果表明:GAP在促进肉鸡胴体组成方面,没有抗生素作用明显;GAP的添加提升了鸡肉口感,同时改善了鸡肉的贮藏期。

小刺猴头发酵多糖对肉鸡胆固醇沉积的影响

本试验旨在研究小刺猴头发酵多糖(HFP)对肉鸡血清、肌肉、肝脏、心脏、肌胃、粪便中胆固醇含量的影响。试验选用1日龄AA肉鸡240只,随机分为4个处理,每个处理3个重复,每个重复20只,分别饲喂含HFP为0、0.1%、0.3%、0.5%的饲粮,试验时间为42d。结果表明,在不同日龄阶段(14、28、42日龄),与对照组相比,饲粮中添加0.3%和0.5%水平的HFP可显著降低肉鸡血液中总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的含量(P<0.05),显著增加血液中高密度脂蛋白胆固醇含量(P<0.05);0.3%和0.5%水平HFP添加组肉鸡的胸肌、腿肌和肝脏中胆固醇含量均显著低于对照组(P<0.05),0.5%水平HFP添加组肉鸡肌胃中胆固醇含量显著低于对照组(P<0.05),饲粮中添加HFP对肉鸡心脏胆固醇水平没有显著影响(P>0.05);与对照组相比,饲粮中添加不同水平的HFP能够显著增加肉鸡粪便中胆汁酸的排泄(P<0.05),0.3%和0.5%水平的HFP添加组肉鸡粪便中胆固醇含量也显著高于对照组(P<0.05)。结果提示,肉鸡饲粮中添加HFP可能通过增加肉鸡粪便中胆固醇和胆汁酸的排泄,从而降低肉鸡肌肉、肝脏、肌胃中胆固醇的含量。

榆耳多糖的分离纯化、结构鉴定及抗肿瘤活性研究

目的对榆耳粗多糖(GI)进行分离纯化,并对所得均一多糖进行结构鉴定及抗肿瘤活性的研究。方法 GI经Q-Sepharose F.F离子交换色谱,Sepharose CL-6B凝胶色谱分离得到均一多糖,采用凝胶色谱、薄层色谱、红外光谱、高碘酸氧化等方法测定相对分子质量(Mr)、单糖组成、糖苷键连接方式。采用MTT法对粗多糖和均一多糖的体外抗肿瘤活性进行测定。结果分离得到均一多糖GI1-3和GI1-4b,其Mr分别约为1.55×105和3.03×104。经薄层色谱法、红外光谱法、高碘酸氧化法确定GI1-3由半乳糖、葡萄糖、甘露糖、木糖组成,以β-(1,4)、β-(1,6)、β-(1,3)糖苷键连接。GI1-4b由葡萄糖、甘露糖和木糖组成,以β-(1,4)、β-(1,6)糖苷键连接。体外抗肿瘤实验表明,GI1-3的抑瘤活性较GI1-4b和GI高,GI的抑瘤活性在3种多糖组分中最低。结论 GI、GI1-3和GI1-4b对体外生长的肿瘤细胞具有不同的抑制作用,可能与其Mr及分子结构有关。

小刺猴头多糖联合5-氟尿嘧啶对Hela细胞的抑制作用

目的研究体外单独应用小刺猴头菌多糖及联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用。方法水提醇沉法得到小刺猴头液体深层发酵浸膏多个糖组分,经MTT筛选获得小刺猴头菌多糖最优组分Hep2。设置空白、Hep2、Hep2+5-Fu、5-Fu组进行MTT实验及细胞周期检测。结果 Hep2单独给药及联合给药都能抑制Hela细胞增殖;Hep2组出现G1期阻滞现象;联合给药组发生了S期和G2/M期阻滞。结论 Hep2可以明显抑制Hela细胞的增殖,并且与5-Fu联合使用对Hela细胞产生协同抑制作用。

生物-非离子型表面活性剂对土壤石油污染的清除

为了研究鼠李糖脂与化学型表面活性剂复配体系清除土壤石油污染的效果,以吐温和司盘系列非离子型表面活性剂为研究对象,通过动态接触角测量仪测定各单组分的胶束浓度,进而考察鼠李糖脂浸膏与4种非离子型表面活性剂的最佳复配比例,并对其模拟石油污染土壤的清除石油效果及影响因素进行评价。结果表明,二元复配的非离子型表面活性剂体系比单一组分的清除石油效果好,添加少量的鼠李糖脂可大幅度降低复配体系的表面张力,清除石油效果明显提高。当0.3 g/L鼠李糖脂与4.0 g/L司盘60复配、固液比为1∶20(m/V,g∶mL),水浴为70℃时,复配体系对石油的去除率达到79.64%,2次清洗对石油的去除率可提高到82.91%。

树舌多糖与抗肿瘤化疗药物联合应用的效果

以S180肉瘤小鼠为模型,随机分为阴性对照组、树舌液体深层发酵浸膏多糖[Ganoderma applanatum(Pers.)Pat,GAP]组、环磷酰胺(Cyclophosphamide,CTX)组与联合用药组,连续灌胃8 d后,测定其抑瘤率、胸腺指数、脾指数,及对机体分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素2(IL-2)的影响,探讨GAP与CTX联合应用的抗肿瘤作用效果。结果表明:GAP与CTX合用抑瘤率比单用时明显升高,对免疫器官有显著影响(P<0.01),GAP与CTX联合应用组小鼠血清中IL-2、TNF-α的分泌量较CTX组有不同程度的增加。GAP能减轻CTX的毒副作用。说明树舌多糖GAP对抗肿瘤药物具有明显的增效减毒作用,是一种有效的抗肿瘤辅助药。

2种真菌多糖荧光标记及其取代度和稳定性

通过对小刺猴头发酵浸膏多糖和黑木耳发酵浸膏多糖进行荧光标记,得到2种真菌多糖的荧光标记产物,即小刺猴头菌多糖-FITC和黑木耳多糖-FITC。通过紫外分光光度计、酶标仪和荧光分光光度计对标记后的真菌多糖进行扫描,并进行运算,得到该2种真菌多糖的荧光物质的取代度,分别为0.79%和0.71%。同时对标记后多糖的体外稳定性进行研究,结果表明,小刺猴头发酵浸膏多糖标记物和黑木耳发酵浸膏多糖标记物在PBS溶液、血浆及尿液中稳定性良好。