发酵红参总皂苷对高糖培养大鼠心肌间质成纤维细胞的保护作用及其机制

目的:观察发酵红参总皂苷(FRGTS)对高糖培养的大鼠心肌间质成纤维细胞(cFb)增殖和胶原合成的作用,并阐明其作用机制。方法:采用胰酶消化和差速贴壁法分离提取1~3 d龄SD大鼠cFb细胞,培养、传代后,取2~3代细胞用于实验;将细胞分成正常糖对照组(5.5 mmol·L^(-1) D-葡萄糖)、高糖组(25 mmol·L^(-1) D-葡萄糖)、高糖+15 mg·L^(-1) FRGTS组(F15组)和高糖+30 mg·L^(-1) FRGTS组(F30组);采用MTT法检测各组cFb细胞增殖活性,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组cFb细胞培养上清液中Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白水平,实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测各组cFb细胞中Smad3和Smad7 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组cFb细胞中尾加压素Ⅱ(UⅡ)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3和Smad7蛋白表达水平。结果:与正常糖对照组比较,高糖组cFb细胞增殖活性明显升高(P<0.01),Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白水平明显升高(P<0.01);与高糖组比较,F15组和F30组cFb细胞增殖活性降低(P<0.05),其中F30组抑制作用强于F15组。发酵红参总皂苷干预24 h后,F15组和F30组细胞培养上清液中Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白水平明显低于高糖组(P<0.05),其中F30组作用较F15组更为明显。与正常糖对照组比较,高糖组cFb细胞中UⅡ和TGF-β1蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Smad3 mRNA和蛋白的表达水平明显升高(P<0.01),而Smad7 mRNA和蛋白的表达水平则明显降低(P<0.05);与高糖组比较,发酵红参总皂苷干预24 h后,F15组和F30组cFb细胞中UⅡ和TGF-β1蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Smad3 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),而Smad7 mRNA和蛋白表达水平则明显升高(P<0.05或P<0.01),其中F30组作用优于F15组。结论:FRGTS能有效抑制高糖所致的纤维化效应,保护糖尿病大鼠心肌,其作用机制与阻抑cFb细胞中UⅡ活化和调节TGF-β1/Smads传导通路有关。

发酵红参总皂苷对高糖诱导大鼠肾小管上皮细胞间充质转化的抑制作用及其机制

目的:探讨发酵红参总皂苷(FRGTS)对高糖诱导下肾小管上皮细胞发生上皮细胞-间充质转化(EMT)的抑制作用,并阐明其作用机制。方法:将大鼠肾小管上皮NRK-52E细胞分为正常对照组(5.5 mmol·L^(-1)D-葡萄糖)、高糖组(30.0 mmol·L^(-1)D-葡萄糖)、沉默信息调节因子1(SIRT1)抑制剂EX527组(30.0 mmol·L^(-1)D-葡萄糖+10.0μmol·L^(-1).EX527)、 FRGTS组(30.0 mmol·L^(-1)D-葡萄糖+25 mg·L^(-1)FRGTS)和EX527+FRGTS组(30.0 mmol·L^(-1)D-葡萄糖+10μmol·L^(-1)EX527+25 mg·L^(-1)FRGTS)。采用免疫荧光法检测各组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中E-cadherin、α-SMA和SIRT1 mRNA表达水平,ELISA法检测培养上清液中Ⅰ型胶原(ColⅠ)水平,Western blotting法检测各组细胞中SIRT1、转化生长因子β1 (TGF-β1)和Smad3蛋白表达水平。结结果果:高糖培养48 h后,与正常对照组比较,高糖组NRK-52E细胞中E-cadherin蛋白表达水平和mRNA表达水平降低(P<0.01),α-SMA蛋白表达水平和mRNA表达水平升高(P<0.01),NRK-52E细胞上清液中ColⅠ水平升高(P<0.01),SIRT1 mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01),TGF-β1和Smad3蛋白表达水平升高(P<0.01);与高糖组比较,FRGTS组NRK-52E细胞中E-cadherin mRNA表达水平升高(P<0.01),α-SMA mRNA表达水平降低(P<0.05),NRK-52E细胞上清液中ColⅠ水平降低(P<0.05), SIRT1 mRNA和蛋白表达水平均升高(P<0.05或P<0.01),TGF-β1和Smad3蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01);与FRGTS组比较,EX527+FRGTS组NRK-52E细胞中E-cadherin mRNA表达水平明显降低(P<0.01),α-SMA mRNA表达水平明显升高(P<0.05), NRK-52E细胞上清液中ColⅠ水平升高(P<0.05), SIRT1 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.01), TGF-β 1和Smad3蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结结论论:FRGTS可通过上调SIRT1表达,进而抑制TGF-β1/Smad信号通路,有效抑制肾小管上皮细胞发生EMT。