在线二维液相色谱法测定发酵虫草菌粉(Cs-4)中6种活性物质

目的:建立发酵虫草菌粉(Cs-4)中尿嘧啶、尿苷、腺苷、腺嘌呤、鸟苷、麦角甾醇6种活性物质的二维液相色谱测定方法。方法:采用二维液相色谱测定法,第一维色谱系统采用亲水相互作用色谱柱,第二维系统采用C18色谱柱。样品经乙腈溶液提取,过滤后进样,5种核苷和碱基在第一维液相系统分离测定,麦角甾醇在第二维液相系统测定。结果:方法中各物质线性范围:尿嘧啶,0.3~30μg·mL-1;尿苷,0.4~40μg·mL-1;腺苷,0.8~80μg·mL-1;腺嘌呤,1.0~100μg·mL-1;鸟苷,2.5~250μg·mL-1;麦角甾醇1.5~150μg·mL-1。方法中各物质加样回收率范围与精密度:尿嘧啶,96.7%~103.4%,1.8%~3.1%;尿苷,98.9%~101.4%,1.7%~2.6%;腺苷,95.9%~104.7%,1.5%~3.5%;腺嘌呤,97.0%~104.0%,1.4%~4.0%;鸟苷,98.2%~101.4%,1.9%~3.1%;麦角甾醇,96.0%~102.0%,2.5%~3.7%。结论:本研究方法显著提高了分析效率,准确度高,可满足药物评价、质量监督等工作的需求;对发展发酵虫草菌粉(Cs-4)等中药复杂成分分离方法,指导药物临床使用具有重要意义。

^(60)Co-γ射线辐照灭菌前后发酵虫草菌粉(Cs-4)中脂肪酸类成分稳定性研究

目的:建立同时测定^(60)Co-γ射线辐照前后发酵虫草菌粉(Cs-4)中棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和α-亚麻酸的含量的方法,并对5种脂肪酸类成分的稳定性进行考察。方法:采用气相色谱法,色谱柱为DB-WAX毛细管柱(30 m×0.53 mm×0.25μm),程序升温,检测器为氢离子火焰检测器,检测器温度为280℃,进样口温度为270℃,载气为高纯氮气,流速为0.5 mL/min,进样量为1μL,进样分流比为10∶1。通过影响因素试验、加速试验及长期试验考察^(60)Co-γ射线辐照前后发酵虫草菌粉中脂肪酸类成分的稳定性。结果:通过方法学考察,5种脂肪酸类成分在59.68~477.44,23.58~188.61,91.40~594.10,158.72~1587.20,27.97~279.70μg/mL内线性关系良好(r>0.997);平均加样回收率为97.87%~100.77%,RSD≤3.00%。稳定性考察结果表明,5种脂肪酸类成分均较稳定,含量变化无显著差异。结论:本研究所建方法准确可靠、重复性好,^(60)Co-γ射线辐照灭菌前后发酵虫草菌粉中5种脂肪酸类成分在不同条件存放后未有明显变化,为发酵虫草菌粉辐照灭菌方式的选择提供了实验依据。

百合固金汤联合发酵虫草菌粉治疗肺肾阴虚型肺癌临床观察

目的 探讨百合固金汤联合发酵虫草菌粉治疗肺肾阴虚型肺癌的临床效果。方法 选取赣州市肿瘤医院内科中心2020年7月—2022年3月收治的肺肾阴虚型肺癌患者60例,对照组(30例)采用西医常规治疗、观察组(30例)在对照组基础上服用百合固金汤联合发酵虫草菌粉。观察治疗后2组临床效果、临床症状缓解时间及免疫指标。结果 观察组、对照组总有效率分别为96.7%(29/30)、83.3%(25/30),差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组乏力、气促、咳嗽、口干、盗汗缓解时间分别为(12.90±0.45)d、(10.93±0.39)d、(10.97±0.37)d、(11.37±0.35)d、(9.37±0.30)d,均短于对照组的(15.23±0.45)d、(13.46±0.44)d、(13.53±0.42)d、(14.10±0.40)d、(12.27±0.42)d,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组免疫指标水平改善均优于对照组(P<0.05)。结论 百合固金汤联合发酵虫草菌粉治疗肺肾阴虚型肺癌,不仅能够缓解患者的临床症状,提高肿瘤治疗效果,还能增强患者的免疫功能,值得深入研究。

发酵虫草菌粉和泼尼松对急性马兜铃酸肾病大鼠肾小管Notch2／hes-1信号通路活化的影响

目的探讨发酵虫草菌粉及泼尼松对急性马兜铃酸肾病(acute aristolochic acid nephropathy,AAAN)大鼠肾小管上皮细胞Notch2/hes-1信号通路的影响。方法将50只SD大鼠随机分为正常组、模型组、发酵虫草菌粉组(CS组)、泼尼松组及CS加泼尼松组,每组10只。以马兜铃酸A纯品100mg/(kg·d)连续灌胃3天建立AAAN模型。CS组予发酵虫草菌粉5.0g/(kg·d)灌胃,泼尼松组予泼尼松0.5mg/(kg·d)灌胃,CS加泼尼松组予两药联合灌胃,连续3周。检测各组大鼠肾功能[尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)],HE染色观察肾脏病理改变,TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡,免疫组织化学法及Westernblot法检测大鼠肾组织Notch2、Hes-1蛋白表达。结果 HE染色结果显示,正常组大鼠肾组织结构正常;模型组大鼠出现肾小管坏死改变;泼尼松组、CS组及CS加泼尼松组肾小管病理明显改善。与正常组比较,模型组大鼠BUN和SCr水平、肾小管间质半定量评分、凋亡细胞比例以及Notch2、Hes-1蛋白表达均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,CS组、泼尼松组及CS加泼尼松组上述指标均显著降低(P<0.01)。以CS加泼尼松组降低更明显(P<0.05,P<0.01)。结论 Notch2/hes-1信号通路活化可能参与AAAN肾小管上皮细胞凋亡的发生。CS及泼尼松对AAAN有肾保护作用,但联合干预疗效更佳,其机制可能与抑制肾组织Notch2/hes-1信号通路活化有关。

发酵虫草菌粉中甘露醇含量的比色法测定

目的 对比研究发酵虫草菌粉中甘露醇的提取和后处理方法，建立甘露醇含量的比色测定法。方法 采用超声提取、高速离心分离进行样品预处理，比色法测定发酵虫草菌粉中甘露醇的含量。结果 甘露醇的线性范围为20～90μg／mL，加样回收率为102．6％，RSD为1．34％。重复性实验的RSD为0．44％，供试品溶液在24h内稳定。2001年生产的发酵虫草菌粉中甘露醇含量的平均值比前2年约高2％，含量变化范围比前两年稍小，3年内生产的各批次甘露醇含量波动均在10％左右，发酵虫草菌粉质量较为稳定。结论 用超声离心比色法测定甘露醇含量，简捷快速，重现性好，回收率高，可以用于发酵虫草菌粉的质量控制。

近5年发酵虫草菌粉的化学成分和临床应用研究进展

冬虫夏草是中国名贵的滋补名贵中药材。由于冬虫夏草分布地区狭窄、自然寄生率低、生存环境苛刻等因素,天然虫草资源并不丰富。近些年,随着生活水平的提高,人们的养生保健意识越来越强烈,对虫草的需求量越来越大。也正因如此,人们过度挖掘,使得天然资源日益匮乏。为了满足人们对虫草的需求,国内大力进行研究。自1987年来国内相继研发出多种人工虫草,即发酵虫草菌粉,通过后续的不断研究并投入了大量生产,产生了一定的经济效益和社会效益。目前,市场上人工虫草主要有百令、金水宝、心肝宝和宁心宝4大商业品牌。本文对5年来发酵虫草菌粉化学成分和临床应用的研究进行综述,以全面了解发酵虫草菌粉的价值,并为业内学者更深入的研究提供参考。

人工发酵虫草菌粉及其提取物保肝作用的研究

目的 观察人工发酵虫草菌粉及其提取物对实验性肝损伤的保护作用。方法 分别采用D 氨基半乳糖 (D GlaN)和四氯化碳 (CCl4)致小鼠急性实验性肝损伤 ,测定血清中丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶 (AST)的含量及肝组织切片病理观察。结果 对D GlaN致小鼠急性肝损伤 ,人工发酵虫草菌粉及其提取物可使升高的ALT降低 (P <0 0 1) ,病理检查显示有明显保肝作用 ,对AST作用不明显 ;而对CCl4致小鼠急性肝损伤 ,仅菌粉和其提取物高剂量组有一定的降ALT作用。

发酵虫草菌粉对DEN致大鼠肝损伤的保护作用及TGF-β1/Smads通路的影响

目的:探讨发酵虫草菌粉(fermented cordyceps sinensis powder,CS)对二乙基亚硝胺(DEN)诱导大鼠肝损伤的保护作用及对TGF-β1/Smads通路的影响。方法:无特定病原体(SPF级)健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠48只,体质量(180±20) g,随机分为4组:对照组、模型组、CS治疗组与CS溶媒组,每组12只。模型组:灌胃给予10 mg/kg DEN每周5次共8周,构建慢性肝损伤模型;对照组:灌胃给予与模型组相同体积的生理盐水; CS治疗组:在建模4周后灌胃给予80 mg/kg CS每周5次共8周; CS溶媒组:灌胃给予与CS组相同体积的5%甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液。实验结束后,麻醉,脊椎脱臼法处死大鼠,收集血液,紫外分光光度法检测各组大鼠血清中AST、ALT以反映肝功能; H&E染色观察肝组织形态变化,Masson染色观察胶原沉积情况;改良Nycodenz法分离各组大鼠原代肝星状细胞(HSC),RT-qPCR检测肝组织与HSC中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子(TGF)-β1、Smad3、Smad7 mRNA的表达水平; Western blot检测肝组织Smad3与Smad7蛋白表达水平。结果:与对照组相比,模型组大鼠血清中AST、ALT含量显著升高,H&E染色结果显示肝脏组织形态显著改变,Masson染色结果显示胶原沉积增多;与模型组相比,CS治疗四周能显著降低肝损伤大鼠血清中升高的AST、ALT水平,改善其肝脏病理损伤程度,减少肝脏中胶原沉积。RT-qPCR结果显示,CS可减少肝损伤大鼠组织及HSC中α-SMA、TGF-β1 mRNA表达水平,增加Smad7mRNA表达水平; CS溶媒组各项检测指标均与模型组无差异;此外,Western blot结果显示,CS可下调肝损伤大鼠肝组织Smad3蛋白的表达,上调Smad7。结论:CS可显著改善DEN诱导的大鼠肝损伤,该作用可能与CS上调Smad7,并抑制TGF-β1/Smads通路有关。

发酵虫草菌粉对糖尿病大鼠心肌NLRP3表达的影响

目的探讨发酵虫草菌粉对糖尿病心肌病的治疗作用及其对心肌核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响。方法雄性SD大鼠45只,随机分为正常对照组(CON组)、糖尿病组(DM组)和发酵虫草菌粉治疗组(CS组,1 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组15只。DM组和CS组大鼠通过尾静脉注射链脲佐菌素(45 mg/kg)诱导糖尿病模型。CS组每日给予1次发酵虫草菌粉溶液灌胃,CON组和DM组给予相同体积生理盐水灌胃。灌胃18周后取材。HE染色观察心肌组织形态学改变;电镜观察心肌超微结构改变;Western blotting法检测心肌NLRP3的表达;免疫组化法检测各组大鼠心肌NLRP3、Caspase-1、IL-1β的表达水平。结果 (1)电镜下,DM组大鼠出现局部心肌纤维变性坏死、部分线粒体损伤;CS组大鼠心肌病变较DM组明显减轻。(2)Western blotting结果显示,DM组和CS组大鼠心肌NLRP3表达均较CON组显著上升,CS组大鼠心肌NLRP3表达较DM组降低。(3)免疫组化结果显示,DM组和CS组大鼠心肌NLRP3、Caspase-1、IL-1β表达均较CON组显著上升,CS组均较DM组降低。结论发酵虫草菌粉能减轻糖尿病大鼠心肌病变,该作用可能与其抑制心肌NLRP3、Caspase-1、IL-1β的表达有关。

用高效液相色谱法柱前衍生化测定发酵虫草菌粉氨基酸成分

采用高效液相色谱法对经2,4-二硝基氟苯衍生化后的氨基酸有效分离,外标法测定了发酵虫草菌粉中各种氨基酸含量,结果表明该法操作简便、结果良好;发酵虫草菌粉含有丰富的氨基酸,氨基酸总量高达37％。

人工发酵虫草菌粉对糖尿病大鼠肾脏IL-17、p38 MAPK和NF-κB表达的影响

目的:探讨人工发酵虫草菌粉对糖尿病大鼠肾脏白细胞介素17(IL-17)、p38 MAPK和NF-κB表达的影响。方法:雄性SD大鼠45只,随机选择15只为正常对照组(NC组),其余30只大鼠通过一次性尾静脉注射链脲佐菌素(STZ,45 mg/kg)诱导建立糖尿病模型,造模成功的28只大鼠随机分为糖尿病组(DM组)和人工发酵虫草菌粉治疗组[虫草组,1 g/(kg·d)],每组各14只。虫草组给予每日1次人工发酵虫草菌粉溶液灌胃,NC组和DM组给予等体积生理盐水灌胃。18周末取材。计算肾重指数,检测血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、24 h尿微量白尿蛋白(24 h UMA)。HE染色观察肾脏组织形态学变化;Masson染色观察肾脏纤维化程度;电镜观察各组大鼠肾小球超微结构改变;免疫组化法比较各组大鼠肾脏IL-17、p38 MAPK、NF-κB的表达水平。结果:(1)DM组肾重指数、BUN、Scr、24 h UMA较NC组明显升高,虫草组肾重指数、BUN、Scr、24 h UMA较DM组明显降低。(2)DM组肾脏纤维化明显,虫草组大鼠肾脏纤维化较DM组明显减轻。(3)电镜下,DM组大鼠肾小球毛细血管基底膜增厚,部分足细胞突起融合,系膜细胞增生;虫草组大鼠肾小球病变较DM组明显减轻。(4)DM组肾脏IL-17、p38 MAPK、NF-κB表达均显著上升,人工发酵虫草菌粉干预降低了肾脏IL-17、p38 MAPK、NF-κB的表达。结论:肾脏IL-17、p38 MAPK和NF-κB表达增多在糖尿病肾病发病过程中起到重要作用。人工发酵虫草菌粉可能通过减少肾脏IL-17、p38 MAPK、NF-κB的表达来改善糖尿病肾病。

发酵虫草菌粉抗大鼠肝纤维化作用及机理研究

目的探讨发酵虫草菌粉抗大鼠肝纤维化作用及作用机理。方法将30只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组和虫草组,采用40%四氯化碳(CCl4)每周2次皮下注射6周制作大鼠肝纤维化模型,经灌胃给药6周后,在麻醉状态下采血,检测大鼠血清肝功能和肝纤维化指标、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)及金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)。结果与模型组比较,虫草组肝脏纤维化程度明显减轻,谷丙转氨酶(ALT)降低和白蛋白(ALB)升高作用明显(P<0.05),同时非常显著改善肝纤维化指标、MMP-1及TIMP-1(P<0.01)。结论发酵虫草菌粉具有抗肝纤维化作用且与升高MMP-1及降低TIMP-1有关。

益肾胶囊选用发酵虫草菌粉替代天然虫草对慢性肾衰大鼠的疗效研究

目的:探讨中药复方中发酵虫草菌粉替代天然虫草对腺嘌呤致慢性肾衰大鼠的治疗作用。方法:采用腺嘌呤灌胃建立大鼠慢性肾衰模型,将大鼠随机分为正常组、模型组、天然虫草组、发酵菌粉低、中、高剂量组,观察治疗后大鼠的肾功能、血生化指标、肾病理、肾脏指数的变化。结果:治疗后,天然虫草及发酵菌粉各组大鼠的肾功能受损程度明显轻于模型组,肾脏病理损伤明显减轻,但肾脏系数未见明显差异。结论:益肾胶囊选用发酵虫草菌粉对慢性肾衰大鼠有一定的治疗作用,可在一定程度替代天然虫草使用。

原子荧光光谱法同时测定发酵虫草菌粉中砷和汞

目的:建立采用原子荧光光谱法同时测定发酵虫草菌粉中砷和汞的方法。方法:标准及样品经消解,直接用AFS-9130型双道原子荧光仪分析,并对实验条件进行优化。结果:在选定的最佳条件下,测得砷和汞的相对标准偏差分别为0.75和1.86。砷和汞的回收率分别为94.5%～104.0%和89.4%～107.8%。结论:该方法具有较高的灵敏度、准确度和精密度。

发酵虫草菌粉及制剂质量控制方法研究进展

人工发酵虫草菌粉是从冬虫夏草分离提取的药用菌株经人工发酵生产的菌粉。市场上以人工发酵虫草菌粉为原料的制剂生产企业较多,由于各家菌种差异、发酵及生产工艺不同、质量控制方法各异等因素,导致市场产品质量参差不齐。因此,保证原料的质量,并进一步提高和完善其相关制剂的质量标准是保证人工发酵虫草菌粉类药品质量的关键。针对市场上常见发酵虫草菌粉及其制剂的化学成分、药理作用、分析方法及质量控制研究现状进行总结,并对人工发酵虫草菌粉类制剂的质量控制提出建议。

发酵虫草菌粉对原发性高血压患者血尿酸及血脂的影响

目的观察发酵虫草菌粉(百令胶囊)对原发性高血压患者血尿酸(UA)、血脂的影响。方法84例接受常规降压治疗的原发性高血压患者随机分为2组,对照组治疗仅维持基础降压药物治疗;治疗组48例加用发酵虫草菌粉(百令胶囊)每次5粒,一日3次,为期12周。观察两组患者治疗前后血UA及血脂的变化。结果观察组治疗后血UA及甘油三酯(TG)显著降低(P<0.05);高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)较治疗前明显升高(P<0.01)。结论发酵虫草菌粉用于原发性高血压患者可同时降低患者的血UA、TG水平,并提高HDL-C水平。

发酵虫草菌粉对慢性疲劳大鼠行为及ACTH、CORT的影响

目的通过观察发酵虫草菌粉对慢性疲劳大鼠行为指标及体内促肾上腺皮质激素(ACTH)、血清皮质醇(CORT)的影响,评价其抗疲劳疗效,为临床应用发酵虫草菌粉治疗慢性疲劳综合征提供实验依据。方法选取SD大鼠72只,随机分为正常组、模型组、发酵虫草菌粉高、中、低剂量组、苁蓉益肾颗粒组。采用睡眠剥夺+负重力竭游泳法建立慢性疲劳综合征大鼠模型。正常组正常饲养,模型组给予生理盐水灌胃,发酵虫草菌粉高、中、低剂量组分别给予高、中、低剂量发酵虫草菌粉灌胃,苁蓉益肾颗粒组给予苁蓉益肾颗粒灌胃。通过对鼠尾悬吊6 min不动实验、morris水迷宫实验评价大鼠行为学变化;用放射免疫方法检测发酵虫草菌粉对大鼠ACTH和CORT的影响。结果发酵虫草菌粉高、中、低剂量组、苁蓉益肾颗粒组,鼠尾悬挂实验6 min不动时间减少,记忆力提升,游泳速度增快,且发酵虫草菌粉高、中剂量组与苁蓉益肾颗粒组的鼠尾悬挂6 min不动时间、记忆成绩比较,差异具有统计学意义;模型组大鼠血浆ACTH、血清CORT较正常组含量明显升高;发酵虫草菌粉高、中、低剂量组、苁蓉益肾颗粒组较模型组血浆ACTH和血清CORT含量下降,且发酵虫草菌粉高、中剂量组血浆ACTH与血清CORT含量低于苁蓉益肾颗粒组,而发酵虫草菌粉低剂量组与苁蓉益肾颗粒组比较无统计学差异。结论发酵虫草菌粉能够缩短慢性疲劳大鼠的悬挂不动时间、提高游泳速度指标,降低慢性疲劳状态下ACTH、CORT的升高且随剂量的增大而效果明显。对抗慢性疲劳疲劳状态下ACTH、CORT的增加,抑制下丘脑-垂体-肾上腺素轴的功能亢进可能是发酵虫草菌粉治疗慢性疲劳综合征有效的机制之一。

发酵虫草菌粉对免疫抑制小鼠的免疫调节和抗氧化作用

构建免疫抑制小鼠模型,将小鼠随机分为6组,即正常组、模型组、阳性组及发酵虫草菌粉高、中、低剂量组。小鼠以灌胃的方式给予不同剂量发酵虫草菌粉后,CCK-8法测T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖,ELISA法测脾淋巴细胞上清IgM、IL-6、IL-10和TNF-α含量,ELISA法测血清IgM,测定肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平。发现与模型组相比,发酵虫草菌粉各剂量组均能提高小鼠脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖。随着菌粉剂量的升高,IgM、IL-6、IL-10和TNF-α的含量均升高,SOD活性增强,MDA含量降低。结果表明,发酵虫草菌粉能有效拮抗环磷酰胺的免疫抑制作用,并能提高免疫抑制小鼠的抗氧化能力。