过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)调节糖脂代谢抑制小鼠肝细胞脂肪沉积和肝纤维化

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)在非酒精性脂肪肝病(NAFLD)模型小鼠发病过程的作用及其作用机制。方法将60只小鼠按体质量分为野生小鼠空白对照组、NAFLD模型组、PPARδ基因敲除小鼠模型组和PPARδ激动剂组。采用实时定量PCR检测肝脏组织中PPARδmRNA水平,Western blot法检测肝脏组织中PPARδ蛋白水平。采用试剂盒检测小鼠血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)含量以及血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、球蛋白(G)水平和白蛋白(A)/球蛋白(A/G)比率;采用试剂盒检测血清中胰岛素和葡萄糖的含量;采用HE染色检测肝组织病变情况,油红O染色检测脂肪沉积情况,α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组织化学染色结合天狼星红染色观察肝纤维化程度。结果NAFLD模型小鼠肝脏组织PPARδmRNA和蛋白高表达;当给予NAFLD模型小鼠PPARδ激动剂后,其PPARδmRNA和蛋白表达量显著升高。此外,PPARδ激动剂能够降低TC、TG、LDL、G和葡萄糖水平,升高HDL水平,降低ALT、AST水平,A/G比值增加;此外,还可减轻肝组织的病变;抑制α-SMA表达以及胶原纤维沉积。结论PPARδ激动剂可调节NAFLD小鼠的糖脂代谢,抑制肝细胞脂肪沉积和肝纤维化。

过氧化物酶体增殖物活化受体δ及其在代谢综合征中的作用

肥胖与胰岛素抵抗、脂代谢紊乱、高血压及糖耐量降低是代谢综合征的主要特点。过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR)δ是新近发现的PPAR家族的新成员,存在多种配体。激活PPARδ可增强脂肪及肌肉组织中的脂肪酸氧化和能量偶联,抑制巨噬细胞内的炎症反应,同时具有改善血脂和胰岛素抵抗的作用。这些功能提示PPARδ可用于控制体重、增加胰岛素敏感性,缓减冠心病症状,可能是极具潜力的代谢综合征治疗的新靶点。

PCR扩增T细胞受体δ基因监测儿童急性淋巴细胞白血病微量残留病

应用巢式聚合酶链反应（巢式ＰＣＲ）技术扩增Ｔ细胞受体δ（ＴＣＲδ）基因检测了小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）骨髓标本，２８例初治（或复发）的Ｂ前体细胞白血病中有２１例检出ＴＣＲ－δ基因克隆重排带（即ＰＣＲ阳性），检出率为７５％。１８例缓解６个月以上ＰＣＲ仍阳性者接受大剂量化疗，１５例化疗后ＰＣＲ转阴者随访８～３０个月仍处持续缓解状态，３例ＰＣＲ未能转阴者中２例最终复发，另１例在此次化疗前已有半年未行化疗，本次化疗后ＰＣＲ未阴转，继续化疗并随访一年，现ＰＣＲ转阴并持续缓解。表明本法可对７５％的小儿急性Ｂ前体淋巴细胞白血病进行残留白血病细胞监测，并可以进一步指导化疗。本法检测敏感度为１０－５。

过氧化物酶增殖物激活受体δ对糖脂代谢的影响

过氧化物酶增殖物激活受体(PPARs)是核受体超家族的成员之一,发现于1990年,迄今为止已确定3个亚型:PPARα、PPARβ/δ和PPARγ。其中PPARδ在糖脂代谢、转运和胰岛素敏感性方面发挥重要的调节作用。PPARδ的活化不仅可以减轻肥胖、改善胰岛素抵抗(IR),还可促进巨噬细胞胆固醇代谢,抑制炎症介质表达而减缓动脉粥样硬化的进程。

含人过氧化物酶体增殖物激活受体δ基因高效真核表达载体的构建及其意义

目的构建高效表达人过氧化物酶体增殖物激活受体δ(hPPARδ)的真核表达载体,为hPPARδ受体功能和基于hPPARδ受体靶点的药物筛选提供分子研究平台。方法采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR),从HepG2细胞总RNA克隆hPPARδ全长基因,与经BamHI、SalI相同双酶切的pIRES2-EGFP载体连接,构建重组质粒phPPARδ-IRES2-EGFP,经酶切及基因测序鉴定重组质粒中hPPARδ基因的完整性和忠实性;荧光显微镜观察重组质粒转染的293细胞GFP报告基因表达强度,并对转染细胞hPPARδ的表达进行荧光定量PCR和免疫细胞化学检测。结果经酶切和测序证实重组质粒构建正确,并在转染的293细胞中获得hPPAR6的高效表达。结论成功构建phPPARδ-IRES2-EGFP重组质粒。

儿童急性淋巴细胞白血病免疫球蛋白重链和T细胞受体δ基因分析

目的 研究儿童急性淋巴细胞白血病 (ALL)中免疫球蛋白重链 (IgH)基因、T细胞受体δ(TCRδ)基因重排的发生率及其临床特征。方法 88例儿童ALL采用套式聚合酶链反应 (PCR)技术检测IgH、TCRδ 重排 ,结合流式细胞仪 (FCM )检测免疫表型和细胞形态学FAB分型。结果 IgH基因重排 2 8例 ,阳性率 31 81% ;TCRδ 基因重排 31例 ,阳性率 35 2 3%。两者均表达者 10例 ,阳性率 11 36 %。在 73例B系ALL中IgH基因重排 2 8例 ,阳性率 38 36 % ,TCRδ 表达 2 5例 ,阳性率 34 2 5 % ,两者均表达者 10例 ,阳性率 5 6 8%。在 15例T系ALL中未检出IgH基因重排 ,仅 5例为单纯表达TCRδ 基因重排 ,阳性率 33 33%。在B系ALL中IgH表达高水平与T系ALL中IgH未表达相比 ,( χ2 =13 74 ,P <0 0 0 5 ) ,有显著性差异。 88例儿童ALL中的 85例获完全缓解 (CR) ,缓解率 96 6 % ,对其中 5例患儿IgH基因重排PCR动态观察 ,结果分别在完全缓解 (CR) 15个月、18个月、2 0个月、2 4个月时转阴。结论 ( 1)TCRδ 基因重排在儿童ALL中为高表达 ,在B系与T系ALL中表达相比 ,( χ2 =1 0 7,P >0 0 5 ) ,无显著性差异。 ( 2 )IgH、TCRδ 基因重排是儿童急性淋巴细胞白血病的特异性基因重排 ,该项检测有助于ALL克隆性诊断和基因分型。 ( 3)监?

过氧化体增殖物激活型受体δ激动剂抑制RAW264.7细胞炎症因子的表达

目的探讨过氧化体增殖物激活型受体δ激动剂GW0742对氧化型低密度脂蛋白诱导的RAW264.7细胞单核细胞趋化蛋白1、血管细胞黏附分子1、基质金属蛋白酶9基因和蛋白表达的影响。方法构建小鼠过氧化体增殖物激活型受体δ基因干扰慢病毒载体及空病毒载体,将培养的RAW264.7细胞分为对照组、GW0742组、GW0742+过氧化体增殖物激活型受体δ干扰组以及假干扰组,各组均给予氧化型低密度脂蛋白(50mg/L)孵育24h。分别采用逆转录聚合酶链反应和蛋白免疫印迹法检测细胞中单核细胞趋化蛋白1、血管细胞黏附分子1及基质金属蛋白酶9的mRNA及蛋白表达。采用单核细胞趋化实验观察人外周血单核细胞在不同条件培养基中的趋化活性。结果GW0742组细胞中单核细胞趋化蛋白1、血管细胞黏附分子1及基质金属蛋白酶9的mRNA及蛋白表达显著低于对照组(P<0.01或P<0.05),而过氧化体增殖物激活型受体δ干扰显著削弱GW0742对单核细胞趋化蛋白1、血管细胞黏附分子1及基质金属蛋白酶9的抑制作用(P<0.01或P<0.05)。GW0742组单核细胞迁移距离小于对照组(P<0.05),而过氧化体增殖物激活型受体δ干扰能阻断GW0742对单核细胞趋化的抑制作用。结论过氧化体增殖物激活型受体δ激动剂GW0742能显著抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的RAW264.7细胞单核细胞趋化蛋白1、血管细胞黏附分子1及基质金属蛋白酶9表达,激活过氧化体增殖物激活型受体δ可能有助于防治动脉粥样硬化。

过氧化物酶体增殖物激活受体δ+294T/C基因多态性与冠心病的关系

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体δ(peroxisome proliferation-activated receptor-delta,PPARδ)+294T/C基因多态性与冠心病的关系。方法运用聚合酶链式反应及限制酶片段长度多态性技术分析无血缘关系汉族人群[包括82例正常对照者(NC),120例冠心病(CHD)患者]的PPARδ+294T/C基因多态性,分析基因型频率、等位基因频率,并对不同基因型患者冠心病的危险性进行评价。结果两组间基因型分布差异有统计学意义(P<0.05);CHD组TC+CC基因型频率及C等位基因频率均明显高于NC组(P<0.05);C等位基因携带(TC+CC)者冠心病危险性高于TT基因型(C等位基因携带者OR:3.16,95%CI:1.39～7.14)。结论PPARδ+294T/C基因多态性与冠心病之间有重要的相关性,C等位基因携带可能是冠心病的的危险因素。

过氧化物酶体增殖物激活受体δ对同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA表达的影响及机制

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)激活后对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达的影响及机制。方法:胶原酶消化法获取和体外培养HUVECs;实验分组:空白对照组、Hcy组、GW0742(PPARδ特异激动剂)组和二亚苯基碘鎓(DPI,NADPH氧化酶特异抑制剂)组,RT-PCR检测MCP-1和PPARδ mRNA表达,Western blotting测PPARδ蛋白水平,2‘,7’-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色测定细胞内活性氧(ROS)。结果:与空白对照组相比,Hcy呈浓度依赖性促进人血管内皮细胞MCP-1 mRNA的表达,抑制细胞PPARδ mRNA表达,当Hcy浓度为10-5mol/L时,MCP-1 mRNA表达显著增加,PPARδmRNA明显降低(P<0.01);与Hcy组相比,GW0742组细胞MCP-1 mRNA的表达下降(P<0.01);与空白对照组相比,Hcy组细胞内ROS明显增强;GW0742显著抑制Hcy诱导的细胞内ROS水平。结论:PPARδ激活可抑制Hcy诱导人血管内皮细胞MCP-1 mRNA的表达,其机制可能与抑制ROS信号通路有关。

二补助育汤对着床障碍小鼠子宫环氧化酶-2、过氧化物酶体增殖物激活受体δ的影响

目的:探讨二补助育汤对着床障碍小鼠内膜中环氧化酶-2(COX-2)、过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)表达的影响。方法:将C57妊娠小鼠随机分为空白、模型、阿司匹林、戊酸雌二醇片、二补助育汤高、中、低剂量组,每组8只,吲哚美辛油制备胚胎着床障碍小鼠模型,各组给予相应药物灌胃。妊娠第5天取小鼠子宫,观察外观形态、COX-2、PPARδ基因和蛋白表达。结果:模型组小鼠子宫苍白细长,串珠样改变少,且分布稀疏不均。各观察组小鼠子宫较模型组红润,有串珠状改变,串珠分布增多且不均。模型组COX-2和PPARδ蛋白表达低于空白组(P<0.05);各观察组COX-2蛋白表达均高于模型组(均P<0.05)。二补助育汤低、高剂量组PPARδmRNA表达较模型组、戊酸雌二醇片组明显增加(P<0.05),阿司匹林组PPARδmRNA表达高于二补助育汤中剂量组(P<0.05);二补助育汤各剂量组PPARδ蛋白表达高于模型组(P<0.01),其中中剂量组高于戊酸雌二醇片组和阿司匹林组(P<0.05)。结论:二补助育汤能够调节子宫内膜COX-2和PPARδ表达,提高子宫内膜容受性,有利于胚胎着床。

阿片受体δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

目的构建带FLAG标签的大鼠δ型阿片受体的pIRES2-EGFP表达质粒(δ-FLAG-pIRES2-EGFP),并实现其在CHO细胞中的表达。方法以含大鼠全长δ阿片受体基因的δ-pMD20-T载体为模板,设计引物并行PCR扩增,在δ基因C端引入FLAG标签,AT克隆至pMD20-T载体中,测序鉴定,经酶切连接入pIRES2-EGFP中,将获得的δ-FLAG-pIRES2-EGFP载体转染CHO细胞,应用荧光显微镜观察EGFP表达情况,并采用细胞免疫荧光和蛋白印迹法检测δ-FLAG的表达。结果测序及酶切结果表明获得了带FLAG标签的δ基因,成功构建δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达质粒,在荧光显微镜下,转染细胞可以观察到绿色荧光。应用免疫荧光和蛋白印迹法可观察到目的基因表达。结论成功构建了δ-FLAG-pIRES2-EGFP表达质粒,并在CHO细胞中实现了高效表达。

早期嗅觉剥夺对SD大鼠海马齿状回及其所含突触外GABA_A受体δ亚基的影响

目的探讨早期嗅觉剥夺对SD大鼠海马齿状回及其所含GABAA受体δ亚基表达的影响。方法将3日龄与8日龄SD乳鼠各36只均随机分为空白对照组、实验组、假手术组,共6组。其中通过三氯甲烷滴注法对实验组乳鼠的嗅粘膜进行破坏;假手术组用生理盐水替代;空白对照组不给予任何处理。各组在4周龄时断头取脑组织进行尼氏染色观察;免疫组织化学相对定量分析海马齿状回中突触外GABAA受体δ亚基相关蛋白的表达;实时荧光定量核酸扩增(q-Pcr)定量分析海马中突触外GABAA受体δ亚基mRNA的表达。结果尼氏染色显示3d实验组乳鼠海马齿状回神经元细胞排列紊乱,细胞间距加大,胞质内尼氏体减少,齿状回颗粒细胞边界不齐、间距增宽、排列松散紊乱。3d实验组乳鼠与8d组比较,海马齿状回神经元数目差异均无统计学意义(P>0.05)。而3d实验组乳鼠中海马齿状回突触外GABAA受体δ亚基相关蛋白和mRNA的表达均下降,分别与3d假手术组和空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。在8d实验组、8d假手术组和空白对照组之间结果进行两两比较中,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 3d实验组SD鼠海马中突触外GABAA受体δ亚基相关蛋白及mRNA表达显著减少,表明早期嗅觉剥夺对海马齿状回及其所含突触外GABAA受体δ亚基表达的降低有影响。

小脑性共济失调症患者谷氨酸受体δ2基因12号外显子突变研究

目的探讨小脑性共济失调症患者谷氨酸受体δ2(GluRδ2)基因12号外显子突变的情况。方法采用PCR、琼脂糖凝胶电泳及DNA测序方法检测24例小脑性共济失调症患者(有家族史者17例、散发者7例)及其16名无症状家系成员和10名正常人的GluRδ2基因12号外显子突变情况。结果经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳后,24例患者、16名无症状家系成员及10名正常人12号外显子均可见一长度为222bp片段,未见该外显子纯合缺失突变。DNA测序结果显示,24例患者未发现类似ho5J小鼠的突变碱基缺失及Lurcher小鼠的突变碱基置换。结论小脑性共济失调症患者中不存在GluRδ2基因12号外显子纯合缺失突变,也不存在碱基突变或缺失,提示GluRδ2基因12号外显子与本病发病机制可能无关。

哮喘患者肺部γδT淋巴细胞和受体δ链的多态性

目的观察哮喘患者肺部γδT淋巴细胞数量、分类、增殖率、所分泌的细胞因子和T细胞受体δ链的多态性,探讨肺部γδT细胞对哮喘患者气道炎症的影响。方法 7例哮喘患者和7例对照者的支气管肺泡灌洗液细胞分类计数,流式细胞术检测γδT细胞,免疫磁珠分选技术纯化γδT细胞,MTT法检测γδT细胞的增殖活性,ELISA法检测γδT细胞分泌细胞因子浓度,RT-PCR技术和基因扫描技术测定γδT细胞δ链的克隆性。结果哮喘患者组支气管肺泡灌洗液中γδT细胞的百分率为(6.39±0.71)%,高于对照组的(2.62±0.37)%(P<0.01);巨噬细胞为(81±4)%,低于对照组的(86±2)%(P<0.05);哮喘组γδT细胞的增殖率为(284.2±43.6)%,高于对照组的(217.5±59.5)%(P<0.05)。γδT细胞分泌的白细胞介素-4浓度为(18.9±3.1)pg/ml,高于对照组的(14.1±3.0)pg/ml(P<0.05)。γδT细胞受体δ1链、δ2链两组差异无显著性。结论γδT细胞在支气管哮喘患者的肺部明显增多,加剧了Th1/Th2失衡。γδT细胞对抗原的识别是非特异的。

过氧化物酶增殖物激活受体δ因子的研究进展

PPARs是配体激活转录因子,属于核激素受体超家族的一员,其在物质代谢[1]、组织细胞分化[2]和疾病相关性[3-4]方面已经有相当认识。自1990年发现了PPAR的α、γ亚型及其配体,在2000年Leibowitz又进一步发现PPARδ亚型及其激动剂可增加小鼠血清中高密度脂蛋白胆固醇的含量．

过氧化物酶增殖物激活受体δ研究进展

过氧化物酶增殖物激活受体(PPARs)是配体激活转录因子,属于核受体超家族.自1990年PPARs被发现以来,其在物质代谢、组织细胞分化与疾病的相关性等方面的功能作用逐渐得到认识和重视.PPARs有3种亚型,分别为PPARα,PPARδ/β和PPARγ.随着PPARδ特异选择性激动剂的发现,PPARδ的生物学功能及其与各种疾病的关系渐渐成为研究热点.目前已经发现PPARδ主要控制脂肪组织和骨骼肌细胞的脂类代谢和能量平衡,并参与许多疾病的发生和发展过程.并且PPARδ作为治疗靶点,他的合成激动剂有望开发成为治疗代谢综合症的有效药物.

类鸦片受体δ_2介导的免疫细胞激活作用

将人粒细胞和Ｍｙｔｉｌｕｓｅｄｕｌｉｓ免疫细胞分别与不同浓度的类鸦片肽ＤＡＭＡ（１０（－１３）～１０（－１０）ｍｏｌ／Ｌ）或δ拮抗剂在３７和２３℃保温１０～２０ｍｉｎ，用计算机显微图像分析法分析两种细胞的活化情况。结果显示细胞免疫活性随ＤＡＭＡ浓度增加而提高，细胞发生阿米巴样变形或变长（形状因子小于０．５）。当加入δ拮抗剂ｎａｌｔｒｉｎｄｏｌｅ（１０（－１０）ｍｏｌ／Ｌ）时，ＤＡＭＡ对以上两种细胞的免疫激活作用均受到显著抑制（Ｐ＜０．０５），说明该类鸦片肽受体能被低浓度ｎａｌｔｒｉｎｄｏｌｅ封闭；然而，同样浓度的另一种δ拮抗剂钠洛酮却没有这种封闭作用，提示ＤＡＭＡ通过δ_２受体的介导发挥对免疫细胞的激活作用。

过氧化物酶体增殖物活化型受体δ兴奋剂对健康人三酰甘油／高密度脂蛋白的作用

体育运动能增加游离脂肪酸（FFA），改善血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）与三酰甘油（TG），上调骨骼肌过氧化物酶体增殖物活化型受体δ（PPARδ）表达。PPARδ兴奋剂上调FFA，加强摄取，影响HDL-C与TG脂蛋白颗粒代谢。该文研究健康志愿者分别服用安慰剂（n=6）或PPARδ兴奋剂（GW501516）2．5mg（n=9）或10mg（n=9），1次／d，服用2周。

过氧化物酶体增殖物激活受体δ在原代小鼠成肌细胞分化过程中对肌球蛋白重链亚型的影响

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)在成肌细胞分化过程中对肌球蛋白重链(MHC)亚型的影响。方法分离5只新生小鼠原代成肌细胞,设立对照组、PPARδ激动剂组和PPARδ拮抗剂组;各组细胞在分化培养基中培养2、4、6 d收取细胞样品,MHC免疫荧光鉴定各组细胞分化情况;Real-time PCR及免疫荧光检测MHC各亚型表达水平;Western blotting检测各组细胞MHC蛋白表达水平。结果成肌细胞分化过程中PPARδ激动剂组形成的肌管和MHC蛋白表达量高于对照组和PPARδ拮抗剂组。通过比较PPARδ激动剂处理后MHC 4个亚型随时间变化规律发现,分化2 d MHCⅠ、MHCⅡa的上调作用显著;分化4 d MHCⅠ、MHCⅡa、MHCⅡx上调作用显著,其中MHCⅡa上调幅度最大;分化6 d MHCⅠ、MHCⅡa上调作用显著,其中MHCⅡa上调幅度最大。结论PPARδ可以促进小鼠原代成肌细胞分化,在分化过程中显著上调MHCⅡa表达。