短暂性前脑缺血后大鼠海马各区NMDA受体亚单位NR2A和NR2B mRNA的表达变化

应用原位杂交组织化学和图像处理与分析的方法 ,观察短暂性前脑缺血 (15 m in)再灌注 (0 .5 h～ 7d)大鼠海马各区NR2 A和 NR2 B m RNA的表达变化 ,探讨二者在缺血性脑损伤中的作用。结果发现 ,缺血后 ,NR2 A和 NR2 B m RNA在海马各区呈现出一种相对一致的表达。在海马 CA1 区 ,NR2 A和 NR2 B m RNA的表达分别在缺血再灌 6h和 12 h降至低谷 (P<0 .0 5 ) ,然后表达开始回升 ,在缺血再灌 48h都升至高峰 (P<0 .0 5 ) ,之后表达再次下降 ,直至缺血后 7d(P<0 .0 5 ) ;在海马 CA3区 ,二者的表达变化规律与 CA1 区相似 ,不同的是表达变化的幅度明显减小。在齿状回 ,缺血后 0 .5 h～ 72 h,NR2 A和 NR2 B m RNA的表达未见显著性变化 ,72 h后表达开始下降 ,直至缺血后 7d(P<0 .0 5 )。以上结果提示 ,短暂性前脑缺血后 ,NR2 A和 NR2 B m R-NA在大鼠海马各区表达变化的模式不同 。

前脑缺血再灌流后大鼠海马NMDA受体亚单位NR2A和NR2B蛋白质表达的变化

用免疫组织化学和图像处理方法 ,观察分析了大鼠前脑缺血 15 min后再灌流 2 h～ 7d的海马结构各区域 NMDA受体亚单位 NR2 A和 NR2 B的表达变化规律及其差异 ,藉以探讨二者在缺血性脑损伤中的作用。结果显示 :( 1) NR2 A在 CA1 区和CA3 区的表达于再灌早期表现为小幅度下降 ( P<0 .0 5 ) ,此趋势在 CA3 区可以逆转 ;但在 CA1 区逐渐加剧 ,第 7d时降至 2 1% ,NR2 A在齿状回的表达几无改变 ;( 2 )与 NR2 A不同 ,再灌后 2 h,NR2 B在 CA1 区的表达即较对照组增高 ( P<0 .0 5 ) ,并持续到再灌后 2 4h,之后转而急剧下降 ,至第 7d仅余 11% ;在 CA3 区及齿状回 ,再灌后 6～ 48h,NR2 B的表达也较对照组增高 ( P<0 .0 5 ) ;在再灌后 72 h则恢复至对照组水平。结果提示 ,缺血性脑损伤后 NR2 A和 NR2 B表达变化的不同可能是造成 CA1 区。

生后早期大鼠海马NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B的表达变化

运用免疫组织化学反应和图象分析处理技术研究生后 1d、4d、1周、2周、3周、4周、5周、6周的 SD大鼠海马结构中NMDA受体亚单位 NR1、NR2 A、NR2 B三种蛋白质的表达变化规律。结果表明 ,生后各时间点海马结构各区锥体细胞及颗粒细胞胞体中均有 NR1、NR2 A、NR2 B的表达 ,NR2 B还在锥体细胞的顶树突中有较强表达。 NR1与 NR2 B的生后表达变化模式相似 ,在生后 1d和 4d,两者在 CA3区的表达均高于 CA1 区 ;生后 1周后两者在 CA1 区的表达则高于 CA3区 ;到生后 2～ 3周其表达达到峰值。而 NR2 A却与此不同 ,生后 1d、4d时其在海马结构各区的表达较高 ,随发育时间延长表达逐渐下降 ,大约在生后 4周降至谷底。整个发育过程中 ,NR1在海马结构各区的表达始终高于 NR2 A和 NR2 B的表达。这些结果提示 ,生后早期大鼠海马结构 NR1、NR2 A、NR2 B的表达具有发育性时空差异和亚单位差异 ,这种差异可能与发育早期海马学习功能的特异性以及海马各区对缺血敏感性不同有关。

NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B在大鼠海马的免疫组织化学表达

目的 :观察N 甲基 D 门冬氨酸受体亚单位 1 (N methyl D aspartatereceptorsubunit 1 ,NR1 )、亚单位 2A(NR2A)和亚单位 2B(NR2B)在成年大鼠海马结构各区的表达特点 ,为研究三者在海马生理和病理过程中的作用提供形态学资料。方法 :大鼠脑 2 0 μm厚冰冻切片 ,免疫组织化学ABC法显色 ,图像分析。结果 :NR1、NR2A和NR2B在海马CA1～CA3区锥体细胞以及齿状回颗粒细胞普遍表达 ,三者中以NR1免疫组织化学反应最强 ,NR2A最弱 ,NR2B居中。NR1与NR2A在海马各区间的表达水平都无显著差异 ;NR2B在海马CA1区的表达明显强于其在CA3区及齿状回的表达 ,尤其是CA1区锥体细胞的顶树突在贯穿辐射层及腔隙分子层的全长中都呈高表达。结论 :NR1、NR2A和NR2B在正常海马结构各区的表达强度和形式存在差异 ,提示各区间天然N 甲基 D 门冬氨酸(N methyl D aspartate ,NMDA)

NMDA受体亚单位在海马脑片和在体发育海马结构中表达变化的比较

目的:对比长期培养大鼠海马脑片与在体生后发育海马结构中N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚单位NR1、NR2A和NR2B表达变化的异同,为利用海马脑片研究NMDA受体亚单位在生理和病理状态中的作用提供资料。方法:免疫组织化学染色、海马脑片培养技术及图像分析。结果:NR1、NR2B在海马脑片各区和生后大鼠海马结构各区表达模式相似,均呈“先升后降”的趋势,但升降幅度不同;NR2A在海马脑片各区是“先升、后降”的趋势,在生后海马结构各区则呈现“先降后升”的模式。NR1、NR2A、NR2B在脑片和在体发育海马的相似期间,在CA1、CA3、PG区表达均无显著性差异。结论:P3w/C2w时NR1和NR2B在海马脑片各区的表达强度,和其在生后大鼠海马结构中的表达较相似。

老年癫痫大鼠海马NMDA受体亚单位1mRNA表达的研究

目的 研究老年癫痫大鼠海马 NMDA受体亚单位 1 (NMDAR1 ) m RNA表达的变化 ,为进一步探明癫痫发病及损伤的分子生物学机制奠定基础。方法 采用在立体定位仪将海人酸注射至老年大鼠杏仁核制备癫痫模型。将老年大鼠随机分为正常对照组 ,假手术组及致癫痫组 ,分别于不同时间取材 ,进行脑组织 NMDAR1 m RNA原位杂交检测。结果 正常海马各区均有极少量的 NMDAR1 m RNA阳性细胞分布 ;致癫痫组NMDAR1 m RNA水平显著高于正常对照组及假手术组 (P<0 .0 1 )。结论 大鼠海马各区都存在着 NMDAR1 m RNA不同程度的表达 ,癫痫后老年大鼠海马 NMDAR1 m RNA的表达水平上调。

大鼠海马脑片长期培养中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的表达变化

目的 研究在长期培养大鼠海马脑片各区中N -甲基 -D -门冬氨酸 (N -methyl-D -aspartate,NMDA)受体亚单位NR2A、NR2B表达的变化规律。方法 4 0 0 μm厚大鼠海马脑片 ,体外培养 1、2、3、4、5周 ,再作 2 0 μm厚冰冻切片 ,行NR2A、NR2B免疫组织化学反应和图像分析。结果 NR2A、NR2B在培养各周海马脑片各区锥体细胞和颗粒细胞胞体均有表达 ,NR2B还在CA1区锥体细胞顶树突明显着色。 1周时 ,NR2A的表达较弱 ;4周时升至高峰。在CA3区 ,NR2B的表达 1周时即达高峰 ;但在CA1区其表达至 3周时始达高峰。结论 长期培养大鼠海马脑片各区中NR2A、NR2B的表达有时空变化 ,且二者的表达模式不同 。

离体培养神经干细胞中NMDA受体亚单位NR2B的表达

目的研究离体培养的大鼠神经干细胞（NSCs）中N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体亚单位NR2B的表达。方法从孕18～19天胎鼠海马中分离、培养、传代、鉴定NSCs，用免疫细胞化学、Western blot免疫印迹检测传代1次NSCs中NMDA受体亚单位NR2B的表达。结果源自孕18～19天胎鼠海马的NSCs，即可以表达NMDA受体亚单位NR2B。结论体外培养的NSCs能表达NMDA受体亚单位NR2B。

NMDA受体亚单位2A在大鼠海马缺血/再灌注损伤中的作用

目的观察NMDA受体亚单位2A(NR2A)特异性反义寡核苷酸阻断大鼠海马CA1区NR2A表达后在缺血性脑损伤中产生的变化,以揭示NR2A在缺血性脑损伤中的作用。方法健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组和缺血/再灌注组。分别经反义寡核苷酸、正义寡核苷酸、生理盐水对照和空白对照预处理后,以四血管阻断法建立短暂性前脑缺血(15min)/再灌注(24h和48h)动物模型。在确定的时间内进行灌注固定、取材、石蜡包埋和组织切片(片厚8μm),然后行原位杂交染色、TUNEL染色和焦油紫染色。结果缺血/再灌注早期(24h)大鼠海马CA1区NR2AmRNA的表达水平显著增高(P<0.05)。经反义寡核苷酸预处理后,大鼠海马CA1区NR2AmRNA的表达水平显著降低(P<0.05);同时TUNEL染色显示,在缺血/再灌注24h和48h凋亡阳性细胞的数量也明显降低(P<0.05)。结论短暂性前脑缺血后,NR2AmRNA的表达水平与细胞凋亡在时间上和空间上具有一致性,提示NR2A参与了脑缺血/再灌注诱导的细胞凋亡过程。

离体培养人神经干细胞中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的表达

目的:研究早期离体培养的人胚胎海马神经干细胞(NSCs)中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的表达。方法:取胎龄8～12周人胚脑海马,进行NSCs分离、培养、传代和鉴定。通过免疫细胞化学和RT-PCR等方法检测传代1次和2次的人胚胎海马NSCs中NMDA受体亚单位NR2A和NR2B的蛋白和mRNA表达。结果:自孕8～12周人胚脑海马分离培养的NSCs,NMDA受体亚单位NR2A和NR2B免疫细胞化学反应呈阳性,这两种受体亚单位的mRNA均被检测到。结论:体外培养的早期人胚胎海马NSCs能稳定表达NMDA受体亚单位NR2A和NR2B。

幼年大鼠脑室下区N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位2B的表达及其细胞类型

背景:神经干细胞表达有N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methy-D-aspartic acid receptor,NR)亚单位2B,深入研究其在幼年大鼠脑室下区的表达情况有助于揭示该区神经干细胞增殖、分化、迁移的机制。目的:观察NR2B在幼年大鼠脑室下区的表达及表达高峰期所在的细胞类型。方法:取出生后7,14,21,28dSD大鼠,制备5μm厚脑组织冰冻切片,观察脑室下区NR2B的表达,及其在出生后14d大鼠脑室下区所在的细胞类型。结果与结论:免疫组化结果显示NR2B在出生后7,14,21,28d大鼠脑室下区存在差异表达,于出生后14d时表达达高峰,以侧脑室外侧角旁表达最高;免疫荧光双标染色可见NR2B在脑室下区与胶质纤维酸性纤维蛋白、巢蛋白、β-Ⅲ微管蛋白共定位,以室管膜细胞最明显;而与NeuN在脑室下区无共定位。说明NR2B在幼年大鼠脑室下区的表达存在时空变化,可能在神经发生中发挥作用。

NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B mRNA在成年大鼠海马的表达

目的 研究NMDA受体亚单位 (NR1、NR2A和NR2B)mRNA在正常成年大鼠海马结构各区的表达及形态特点。方法 原位核酸分子杂交组织化学反应和图像处理与分析。结果 NR1、NR2A和NR2BmRNA在正常大鼠海马结构各区锥体细胞和颗粒细胞普遍表达 ,其中NR1mRNA的表达最强 ,NR2AmRNA的表达最弱。NR1mRNA在齿状回 (DG)的表达水平明显强于CA1区和CA3区 ;NR2AmRNA在CA1区的表达水平则强于CA3区和DG ;NR2BmRNA在海马各区的表达水平基本相同。结论 NR1、NR2A和NR2BmRNA在正常成年大鼠海马各区的表达模式不同 ,其中NR2AmRNA在海马CA1区以及NR1mRNA在DG高表达的分布特点可能与海马的学习。

NMDA受体亚单位NR1在长期培养大鼠海马脑片中的免疫活性变化

目的 研究NMDA受体亚单位NR1在长期培养大鼠海马脑片各区中免疫组织化学反应活性变化规律。方法 将新生 6～ 9天大鼠海马和齿状回切成 4 0 0 μm厚脑片 (即海马脑片 ) ,分别体外培养 1、2、3、4、5周时再作 2 0 μm厚冰冻切片 ,行NR1免疫组织化学反应和图像分析。 结果 NR1在培养各周海马脑片各区锥体细胞和颗粒细胞胞体的免疫反应均呈阳性 ,胞膜深染 ,胞质淡染。培养 1周时 ,其反应强度为CA3区 >CA1区 >齿状回(DG) ;之后则为CA1区 >CA3区 >DG ;3周时各区反应均达高峰。结论 NR1在长期培养大鼠海马脑片各区的免疫活性有时空差异 。

铅对钾通道亚单位和NMDA受体亚单位的影响

[目的 ]研究低浓度铅对大鼠海马神经元钾通道亚单位和NMDA受体亚单位的影响及其作用机制。 [方法 ]应用全细胞膜片钳技术和原位杂交技术。 [结果 ]铅提高了动作电位的发放频率 ,抑制了K+ 通道电流 ,使IA 电流激活电压升高 ,失活时间常数延长 ;铅抑制了IH 电流的大小 ,使得IH 从超级化方向往去极化方向移动 ;增加了ID 的激活时程。铅暴露组 15d大鼠海马CA1,CA4 ,DG区 ,而 2 1d时海马CA4 ,DG区的NR1mRNA表达增强 ;铅暴露组 2 1d大鼠海马CA1,CA2 ,CA4 和DG区的NR2DmRNA表达增高 ;铅暴露组 15d大鼠海马CA1,CA4 ,DG区 ,而 2 1d时海马CA1,DG区的NR3AmRNA表达水平显著降低 ;没有观察到铅对NR2BmRNA表达的影响。还观察到铅可影响海马CA1、CA3 ,DG区的AMPA受体 ,以及CA1和DG区的Kainate受体。 [结论

癫痫发作后海马结构GABA受体亚单位变化的研究

γ-氨基丁酸(GABA)是中枢神经系统主要的抑制性神经递质,其功能变化几乎影响各类癫痫的发生发展,颞叶内侧的海马结构在癫痫发作中起重要作用。本文着重介绍海马结构中GABA受体各亚型亚单位在癫痫发作后发生的重要的选择性变化,以了解其在癫痫中发生发展机理,为筛选针对受体亚单位水平发生作用的新的抗痫药提供途径。

短暂性前脑缺血后大鼠海马各区NMDA受体亚单位1mRNA的表达变化

目的 观察短暂性前脑缺血后大鼠海马各区N 甲基 D 天门冬氨酸受体 (NR) 1mRNA的表达变化。方法 采用大鼠前脑缺血 15min再灌注 0 5h～ 7d动物模型和原位杂交、图像分析等技术。 结果 缺血后 ,海马CA1区NR1mRNA的表达呈明显上升趋势 ,至 2 4h达高峰 ;然后表达开始回落 ,至缺血后 7d降至低谷。在CA3区 ,NR1mRNA的表达变化与CA1区类似 ,但变化幅度明显减小。在齿状回 ,缺血后 0 5h～ 72h ,NR1mRNA的表达未见显著性变化 ;缺血后 7d ,表达亦显著降低。 结论 短暂性前脑缺血后 ,大鼠海马各区RN1mRNA的表达变化不同 ,这种不同可能与海马的选择性易损现象和迟发性细胞死亡有关。

脑缺血再灌注大鼠皮质NMDA受体亚单位NR2A/B蛋白的表达变化

目的采用免疫细胞化学技术,探讨急性脑缺血再灌注不同时间段大鼠脑顶皮质NMDA受体亚单位NR2A及NR2B蛋白的表达变化。方法雄性Wistar大鼠70只,随机分成正常对照组、假手术对照组、脑缺血再灌注对照组;以颈动脉引流法行全脑缺血7min再灌注造模。术后分6h、24h、72h3个时间段取脑,脑组织恒冷箱连续冠状切片,免疫细胞化学ABC反应,图像分析系统行顶皮质Ⅰ区Ⅴ层免疫阳性面积检测。结果(1)麻醉及假手术可导致顶皮质NR2A、NR2B蛋白表达短暂增多,24h内恢复正常;(2)缺血再灌注后6h前后形成表达高峰,24h恢复正常,随后表达急剧减少,持续至72h以后。结论(1)脑缺血再灌注可导致顶皮质神经元NR2A、NR2B蛋白表达变化,且表达存在明显的时间依赖性;(2)缺血再灌注早期皮质NR2A、NR2B蛋白高度表达可能是导致迟发性神经元丢失的重要原因。

NMDA受体亚单位NR1在离体人神经干细胞中的表达

目的研究离体培养的人海马神经干细胞（NSCs）中NMDA受体亚单位NR1的表达。方法分离培养胎龄8-12周人胚脑海马神经干细胞，对NSCs进行Nestin和分化鉴定。用免疫细胞化学、Western blot免疫印迹和RT—PCR等方法检测原代、传代1次、传代2次的人胚胎海马NSCs中NR1蛋白和mRNA的表达。结果在孕8～12周人胚脑海马分离培养的NSCs中，NMDA受体亚单位NRI免疫细胞化学反应呈阳性，该受体亚单位的蛋白和mRNA均被检测钊。结论体外培养的早期人胚胎海马NSCs能稳定表达NMDA受体亚单位NR1。

反义寡核苷酸技术及其在NMDA受体亚单位研究中的应用

反义寡核苷酸技术是利用碱基互补配对的原则 ,设计一段寡脱氧核苷酸 ,与靶序列特异结合 ,从而抑制基因表达 ,降低mRNA和 /或蛋白质水平 ,影响动物的后续生物效应。反义寡核苷酸技术作为一种快速、特异性阻断基因表达的方法 ,近二十年来取得迅速发展 ,其潜在应用价值巨大。特别是近年来在对NM DA受体领域的反义研究 ,越来越得到人们的重视。本文就反义寡核苷酸技术及当前反义寡核苷酸技术在NMDA受体亚单位研究中的应用进行阐述。

短暂性前脑缺血后大鼠海马NMDA受体亚单位NR1 mRNA的表达变化及其与细胞凋亡的关系

目的 :研究短暂性前脑缺血后大鼠海马各区NR1mRNA的表达及其与海马缺血性细胞凋亡的关系。方法 :短暂性前脑缺血(15min)再灌注 (0 .5h～ 7d)动物模型、原位杂交组织化学染色、TUNEL染色。结果 :①缺血后早期 ,海马CA1区NR1mRNA的表达上升 ,至缺血后 2 4h升至最高 (P <0 .0 5 )。然后表达下降 ,至缺血后 7d ,降至最低 (P <0 .0 5 ) ;在CA3区 ,NR1mRNA的表达变化规律与CA1区类似 ;而在齿状回 ,缺血后 0 .5h～ 72h ,NR1mRNA的表达至缺血后 7d降低。②短暂性前脑缺血后 12h ,TUNEL阳性细胞开始出现 (P <0 .0 1) ,主要位于海马CA1区锥体细胞层后 ,至缺血后 72h表达达高峰 (P <0 .0 1) ;TUNEL阳性细胞有所减少 ,但至缺血后 7d ,凋亡细胞依然存在 (P <0 0 1)。结论 :短暂性前脑缺血后 ,大鼠海马各区NR1mRNA的表达变化和细胞凋亡均存在着显著性差异。