促甲状腺激素受体抗体磁微粒化学发光法的建立和初步临床应用评估

目的 建立检测人血清促甲状腺激素受体抗体(TRAb)的磁微粒化学发光法,并进行初步临床应用评估。方法 采用竞争法原理,建立基于异硫氰酸荧光素(FITC)-抗FITC系统的检测血清TRAb的磁微粒化学发光法,并对方法的空白限、检出限、线性区间、精密度、抗干扰能力进行评估。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估该方法的临床诊断效能。比较磁微粒化学发光法与电化学发光法和促甲状腺激素受体刺激性抗体(TSI)化学发光法的一致性。了解郑州地区健康成人血清TRAb的分布情况。结果 建立的磁微粒化学发光法的空白限为0.3 IU·L^(-1),检出限为0.7 IU·L^(-1),线性区间为1.0~50.0 IU·L^(-1);低、中、高水平样本的重复性分别为5.36%、2.54%和2.12%,中间精密度分别为8.13%、3.92%和3.50%。胆红素≤250 mg·L^(-1)、血红蛋白(Hb)≤1.0 g·L^(-1)、三酰甘油(TG)≤10.0 g·L^(-1)、FITC-Na≤500 ng·mL^(-1)对磁微粒化学发光法检测TRAb无干扰,甲状腺球蛋白抗体(TgAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、促甲状腺激素(TSH)、促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)对磁微粒化学发光法检测TRAb无交叉反应。ROC曲线分析结果显示,磁微粒化学发光法检测TRAb诊断毒性弥漫性甲状腺肿(GD)的曲线下面积为0.998,最佳临界值为1.92 IU·L^(-1),敏感性为99.07%,特异性为95.00%。磁微粒化学发光法与电化学发光法具有良好的相关性(r2=0.941,P<0.0001),2种方法的偏差为0.090IU·L^(-1),总符合率为96.24%,一致性好(kappa=0.925);与TSI化学发光法的相关性一般(r2=0.671,P<0.000 1),2种方法的偏差为-2.613 IU·L^(-1),总符合率为88.15%,一致性较好(kappa=0.763)。采用百分位数法初步建立TRAb的参考区间为≤1.60 IU·L^(-1)。结论 成功建立了检测血清TRAb的磁微粒化学发光法,检测性能较好,可满足临床需求。

人小胶质细胞中促甲状腺激素受体的表达、分布及活性观察

目的 探讨人小胶质细胞(HMC3)中促甲状腺激素受体(TSHR)的表达、分布及活性。方法 取人小胶质细胞HMC3,以人甲状腺细胞及肝细胞作为对照,采用逆转录聚合酶链式反应检测TSHRN mRNA表达,以验证TSHR mRNA转录物。通过Western blotting法和免疫荧光染色分析测定HMC3细胞中TSHR蛋白水平及分布。将HMC3细胞分为0、20、50、100、200 ng/mL促甲状腺激素受体刺激抗体(TSAb)组和阴性对照组,将各组细胞加入100μmol/L磷酸二酯酶抑制剂IBMX预孵育60 min,然后向TSAb组分别加入相应浓度的TSHR特异性抗体TSAb培养24 h。使用免疫测定试剂盒测定各组环磷酸腺苷(cAMP)水平,验证TSHR在HMC3细胞中的活性。结果 在HMC3细胞中检测到TSHR mRNA,其序列与人甲状腺细胞及肝细胞来源的mRNA相同。TSHR蛋白在HMC3细胞的细胞膜中表达。与0 ng/mL TSAb组相比,20 ng/mL TSAb组cAMP水平无统计学差异,50、100、200 ng/mL TSAb组cAMP水平增加,且高浓度组cAMP水平高于低浓度组(P<0.05或<0.01)。结论 TSHR在人小胶质细胞中存在并表达于细胞膜,且具有信号传导功能。

基于我国WS/T促甲状腺激素受体抗体检测方法的性能验证

目的 基于我国卫生行业标准(WS/T)对迈瑞高敏磁微粒化学发光法(CLIA)检测TRAb进行性能验证。方法 参照最新WS/T文件,以Roche Cobase 601电化学发光法(ECLIA)作为已验证的检测方法,对迈瑞CLIA的精密度、基于患者血清的正确度、线性、检出限、参考区间进行验证,评价迈瑞与Roche的诊断符合率。结果 迈瑞CLIA检测TRAb的批内CV为1.56%~4.60%,实验室内CV为1.65%~5.19%;与Roche ECLIA的实验室相对差值为-3.6%;在0.02~44.00IU/L范围内线性拟合方程Y=1.040X+0.636,线性系数R2=0.990;24个检出限临界值数据22个(91.7%)≤0.3IU/L;20个健康体检者血清TRAb检测结果仅1个超出参考区间≤1.9IU/L;与Roche ECLIA的诊断总符合率90%,阳性符合率75%,阴性符合率100%,Kappa检验值0.7826(P<0.001)。结论 迈瑞高敏磁微粒CLIA的精密度、基于患者血清的正确度、线性范围、检出限均符合厂家声明,参考区间经验证可转移至我实验室使用,与Roche的诊断符合率较好,该方法性能能满足本医院临床检验需求。

TSH受体基因突变与促甲状腺激素抵抗综合征

促甲状腺激素(TSH)抵抗综合征(TSH insensitivity syndromes),是一组少见的Hormone insensitivi syndrome,HIS,激素不敏感综合征)。是由于甲状腺对TSH作用有抵抗而引起的一种先天性周围型甲状腺功能减退症。1促甲状腺激素抵抗综合征的临床特征本综合征最早于1967年首先由Stanburg报道[1]。特征是甲状腺滤泡上皮细胞对TSH的作用反应低下而引起的先天性甲状腺功能低下症:1)血清TSH水平升高.

血清促甲状腺激素受体抗体(TRAb)测定在甲状腺疾病临床诊断中的应用价值

探究血清促甲状腺激素受体抗体(TRAb)测定在甲状腺疾病临床诊断中的应用价值。方法 选择我院2022年1月-2023年1月期间的70例甲状腺疾病患者作为研究对象,将其作为研究组,选择同期的70例健康体检者作为本研究的对照组,研究组中70例甲状腺疾病患者给予血清促甲状腺激素受体抗体(TRAb)测定,对比两组的实验室检测指标以及研究组治疗前后的血清TRAb含量、阳性率及强阳性率。结果 研究组中70例甲状腺疾病患者的各项实验室检测指标分别为:T3(6.34±1.26)nmol/l,FT3(9.26±1.34)pmol/l,T4(214.28±11.24)nmol/l,FT4(13.29±2.14)pmol/l。明显高于对照组中70例甲状腺疾病患者的实验室检测指标T3(2.15±0.38)nmol/l,FT3(5.02±1.69)pmol/l,T4(113.86±10.58)nmol/l,FT4(6.98±2.41)pmol/l。差异具有统计学意义(P<0.05);治疗后,研究组中70例甲状腺疾病患者的血清TRAb含量为(4.24±1.31)μ/l,明显低于治疗前的血清TRAb含量(17.28±0.19)μ/l,,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗后,研究组中70例甲状腺疾病患者的阳性率为17.14%,明显低于治疗前70例甲状腺疾病患者的阳性率35.71%,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗后,研究组中70例甲状腺疾病患者的强阳性率为2.83%,明显低于治疗前70例甲状腺疾病患者的强阳性率14.29%,差异具有统计学意义(P<0.05);结论 血清促甲状腺激素受体抗体(TRAb)测定能够为甲状腺疾病临床诊断提供十分重要的参考价值,值得在临床上广泛应用。

促甲状腺激素TSH受体基因突变同侵袭性垂体瘤的相关性研究

目的研究TSH受体基因突变同垂体瘤侵袭性的相关性。方法选择24例垂体瘤患者作为研究对象,其中13例侵袭性垂体瘤,11例非侵袭性垂体瘤,另外选择10例正常甲状腺作为对照组。使用苯酚-氯仿-异戊醇法提取基因组DNA,并对基因片段进行聚合酶链反应及DNA序列分析。结果 13例侵袭性瘤中有5例出现变异个体,对其中3例行DNA序列检测,其中1例发现密码子的点突变,2例为碱基插入突变。而非侵袭性垂体瘤组和正常甲状腺组中无突变。3组突变率比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论侵袭性垂体瘤中TSH受体基因的突变率要高于非侵袭性垂体瘤,说明TSH受体基因的突变同垂体瘤的侵袭性存在一定相关性。将TSH受体基因可能作为临床诊断判断疗效的新靶点。

青岛文昌鱼促甲状腺激素受体(TSHR)蛋白的融合表达及鉴定

为表达青岛文昌鱼促甲状腺激素受体(the thyrotropin receptor,TSHR),构建了TSHR基因的原核表达载体pGEX-4T-1-TSHR,并将其转化入大肠杆菌DH5α中.采用IPTG诱导蛋白表达,并用SDS-PAGE分析表达蛋白.利用抗TSHR多克隆抗体进行Western blot检测.结果表明重组质粒在大肠杆菌DH5α中表达,融合蛋白的分子大小约为76kDa,Western blot检测说明得到的融合蛋白为TSHR蛋白,成功构建了文昌鱼TSHR基因的原核表达载体.

促甲状腺激素、甲状腺过氧化物酶抗体和促甲状腺激素受体抗体检测在甲状腺疾病中的应用价值

探讨促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、促甲状腺激素受体抗体(TRAb)在甲状腺疾病中的诊断价值。对44例Graves病(GD)、29例桥本甲状腺炎(HT)、13例亚甲炎患者和26例正常对照,采用电化学发光免疫分析法测定TSH、TPOAb、TRAb的含量,分析其在几组病例中的意义。三病例组的TSH、TPOAb、TRAb含量与正常对照组比均有显著差异(P<0.01);HT组TPOAb的测值和阳性率又显著高于GD组,而GD组TRAb的测值和阳性率都显著高于HT组,经统计学检验两者均有显著意义(P<0.05)。结果说明,TSH是甲状腺功能的非常敏感的特异性参数,TPOAb、TRAb的检测对鉴别诊断GD和HT有着重要意义。

Roche E170检测系统测定促甲状腺激素(TSH)分析灵敏度的验证

目的对Roche E170检测系统测定促甲状腺激素(TSH)项目的检测低限、功能灵敏度进行验证。方法对空白样品进行连续20 d在天间重复性实验,验证TSH检测低限;制备系列低浓度的TSH样品,验证其功能灵敏度。结果RocheE170检测系统测定TSH的最低检测限为0.005μIU/ml,与Roche厂家产品说明书声称的一致;其功能灵敏度该室验证值为0.011μIU/ml,与Roche厂家产品说明书声称有差异(0.014μIU/ml)。结论实验室必须验证和建立本实验室条件的分析灵敏度,为甲状腺患者提供准确可靠的促甲状腺激素(TSH)低值结果。

促甲状腺激素受体及碘钠泵在人甲状腺癌中的表达及临床意义

目的研究促甲状腺激素受体(TSHR)、碘钠泵(NIS)在甲状腺癌中的表达,探讨其在人甲状腺癌治疗中的作用。方法采用免疫组织化学SABC法,检测TSHR、NIS在45例人正常甲状腺组织、45例乳头状甲状腺癌及21例未分化甲状腺癌中的表达。结果TSHR及NIS在人正常甲状腺组织的表达均高于其在乳头状甲状腺癌和未分化甲状腺癌中的表达。在人正常甲状腺组织,TSHR和NIS蛋白均定位于滤泡上皮细胞膜上;在乳头状甲状腺癌组织,TSHR蛋白定位于细胞膜和细胞质中,NIS蛋白仅在细胞质中有阳性表达;在未分化甲状腺癌,TSHR和NIS均定位于细胞质。结论TSHR、NIS的定位及表达水平与甲状腺癌的分化程度密切相关,可能成为预测甲状腺癌促甲状腺激素抑制治疗及131I治疗是否有效的指标。

促甲状腺激素受体基因甲基化与甲状腺乳头状癌关联的Meta分析

目的应用Meta分析方法综合评价促甲状腺激素受体(TSHR)基因的甲基化与人甲状腺乳头状癌的关联,为预防和诊治甲状腺乳头状癌提供参考。方法检索纳入2000年1月—2013年4月发表的8篇有关TSHR基因甲基化和人甲状腺乳头状癌关系的中英文文献,应用随机效应模型和固定效应模型对其进行综合的定量分析。结果来自8篇文献的583份样本被纳入Meta分析,甲状腺乳头状癌样本中TSHR基因发生甲基化数与对照组相比的合并OR值为4.57〔95%CI(1.68,12.43),P<0.01〕。分层分析(对照类型、国家、年龄、肿瘤分期、淋巴结转移)以及回归分析用于探索异质性的来源以及可能的危险因素,结果显示,在中国人群中和年龄小于45岁的甲状腺乳头状癌人群中〔OR=9.18,95%CI(5.19,16.23),P<0.01〕以及在非自体组织为对照的研究中〔OR=8.51,95%CI(3.72,19.46),P<0.01〕,TSHR基因的甲基化发生率均较高。TSHR基因甲基化在各期甲状腺癌中均可出现,TSHR基因甲基化发生率在肿瘤中晚期阶段〔OR=14.12,95%CI(2.93,68.18)〕高于早期〔OR=6.01,95%CI(3.21,11.28)〕,与淋巴结转移也存在关联〔OR=14.29,95%CI(2.47,82.75),P<0.01〕。本研究未观察到存在发表偏倚(t=-0.01,P>0.05),具有较好的代表性。结论 TSHR基因为甲状腺乳头状癌抑制基因,其甲基化的发生与甲状腺乳头状癌具有很强的相关性,可作为一个潜在的分子诊断标志物。

促甲状腺激素受体抗体的产生和意义

自身免疫性甲状腺疾病(AITD)患者体内存在多种甲状腺特异性抗体,其中以促甲状腺激素(TSH)受体抗体(TRAb)与疾病发生、发展和转归间关系最为密切。TRAb 是一种异质性的免疫球蛋白,本文简述其来源、作用和检测的临床意义。一、TRAb 的种类TRAb 至少包括刺激型和阻断型抗体两大类,两者分别以甲状腺刺激抗体(TSAb)和甲状腺刺激阻断抗体(TSBAb)为代表。有些患者的血清IgG 还具有抑制TSH 与TSH

分化型甲状腺癌组织中促甲状腺激素受体的表达

目的:探讨分化型甲状腺癌(DTC)组织中促甲状腺激素受体(TSHR)的表达及意义。方法:应用免疫组织化学SP法对43例DTC(39例乳头状癌,4例滤泡状癌)、30例甲状腺腺瘤及16例正常甲状腺组织进行TSHR的测定。结果:正常甲状腺组织、甲状腺腺瘤和DTC组织TSHR均有不同程度表达,甲状腺腺瘤组织的表达与正常甲状腺组织相似,而DTC中有88.37%(38/43)的表达与正常组织相似,11.63%(5/43)的表达低于正常甲状腺组织。DTC组织中TSHR的表达与肿瘤病理分期、有无淋巴结转移、年龄有关(P<0.05);与性别、肿瘤大小、病灶多少无关(P>0.05)。结论:DTC可能为TSHR依赖性肿瘤,TSHR检测有助于提高DTC的诊疗水平。

大鼠睾丸前促甲状腺激素释放激素原及其受体的表达与发育变化

为研究促甲状腺激素释放激素 (thyrotrophin releasinghormone ,TRH)及其受体 (TRHreceptor,TRH R)在大鼠睾丸组织中的表达规律和在生殖发育调节中的作用 ,依据大鼠下丘脑中的前TRH原 (preproTRH ,ppTRH)和垂体中的TRH RcDNA设计引物 ,采用RT PCR法从大鼠睾丸组织中获得了 ppTRH和TRH R的cDNA克隆 ,测序后构建表达载体 ,在大肠杆菌中表达了可溶性的ppTRH和TRH R融合蛋白。利用实时动态定量RT PCR (realtimequantitativeRT PCR)法观察了 ppTRH和TRH R在不同发育阶段大鼠睾丸中的表达变化 ,发现在睾丸间质细胞发育的初期阶段 (第 8天 ) ,没有ppTRH和TRH R的表达 ,但从第 15天起能观察到 pp TRH和TRH R的表达 ,并且表达量在 2 0天、 35天、 6 0天和 90天逐渐增加。这些结果表明 :大鼠睾丸组织能特异性表达ppTRH和TRH R ,并且表达量与发育过程相关。ppTRH和TRH R体外表达产物的获得为后续研究其功能奠定了基础。

甲减性心脏病患者血清促甲状腺激素受体抗体、抗甲状腺过氧化物酶抗体水平的变化

目的研究甲状腺功能减退性心脏病患者血清促甲状腺激素受体(TR)、抗甲状腺过氧化物酶(TPO)抗体水平的变化。方法甲减心脏病患者60例,根据患者肌酸激酶(CK)及其同工酶(CKMB)、乳酸脱氢酶(LDH)等水平分两组,即心肌酶谱正常组、心肌酶谱升高组。观察患者TR、TPO抗体水平变化,分析甲减性心脏病患者TR、TPO抗体水平变化及其与心肌酶谱的相关性。结果与心肌酶谱正常者相比,心肌酶谱升高组患者血清TR、TPO抗体水平明显升高(P<0.05),直线相关分析显示TR、TPO抗体与各心肌酶呈正相关(P<0.05)。结论甲减性心脏病患者TR、TPO抗体水平明显增高,且与心肌损伤程度呈正相关。

甲状腺乳头状癌患者血清促甲状腺激素水平和组织促甲状腺激素受体检测的临床应用价值

目的探讨血清中促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)和甲状腺组织中促甲状腺激素受体(thyroid stimulating hormone recepter,TSHR)在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)中的应用价值。方法收集甲状腺乳头状癌标本55例,结节性甲状腺肿标本32例,采用化学发光法检测血清中TSH和免疫组化法检测甲状腺组织中TSHR的表达。结果PTC中血清TSH水平明显高于结节性甲状腺肿,差异具有统计学意义(χ^2=-2.163,P<0.05);且PTC中,Ⅲ/Ⅳ期患者的血清TSH水平明显高于Ⅰ/Ⅱ期,差异具有统计学意义(χ^2=-2.037,P<0.05);血清TSH的水平与患者年龄、性别、淋巴结转移与否和肿瘤大小,差异均无统计学意义(Z=-0.024~-1.262,均P>0.05)。TSHR在PTC中的表达阳性率明显低于结节性甲状腺肿,差异具有统计学意义(χ^2=4.845,P<0.05);PTC中,Ⅰ/Ⅱ期的表达阳性率高于Ⅲ/Ⅳ期,淋巴结未转移组的表达阳性率明显高于淋巴结转移组,差异具有统计学意义(Z=-3.097,-2.423,均P<0.05);TSHR的表达与患者年龄、性别和肿瘤大小,差异均无统计学意义(Z=-0.846~-1.73,均P>0.05)。结论血清TSH水平与PTC发病和TNM分期有关;TSHR的表达与PTC发病、TNM分期和淋巴结转移与否有关,两者可以作为PTC诊断和预后判断的一项参考指标。

促甲状腺激素受体抗体(TRAb)测定的临床价值

目的:探讨血清TRAb测定对甲状腺疾病的临床价值。方法:采用放射受体分析和放射免疫分析测定210例甲状腺疾病患者血清TRAb和T3、T4、TSH、FT3、FT4含量,以T3、T4、TSH、FT3、FT4含量为标准分为单纯性甲状腺肿组、甲减组、甲亢组、甲亢缓解组;以38例健康人血清中TRAb和T3、T4、TSH、FT3、FT4含量作为对照组。结果:单纯性甲状腺肿组血清TRAb含量与正常对照组无显著差异(P>0.05);甲亢组、甲减组血清TRAb含量明显高于正常对照组(P<0.001);甲亢缓解组血清TRAb含量与甲亢组差异显著(P<0.05),与正常组比较亦有显著性差异(P<0.05);血清TRAb含量与各组间T3、T4、TSH、FT3、FT4及TSH浓度之间无显著相关性(P>0.05)。结论:监测血清TRAb含量对甲状腺疾病的诊断、鉴别诊断、疗效观察、预后判断有重要的临床价值。

促甲状腺素释放激素对失血性休克大鼠脑μ、δ和K阿片受体的影响

本文用放射性相对选择性配体初步研究了促甲状腺素释放素（ＴＲＨ）对失血性休克大鼠脑μ、δ和Ｋ阿片受体的影响。结果显示失血性休克大鼠δ和ｋ阿片受体最大结合数（Ｂｍａｘ）显著升高，亲和力变化不大，μ阿片受体Ｂｍａｘ和亲和力无明显变化。ＴＲＨ（５ｍｇ·ｋｇ￣（－１））可使休克大鼠脑δ阿片受体Ｂｍａｘ降低，对其亲和力影响不大，对μ和ｋ受体无明显影响。这一结果提示ＴＲＨ减数调节失血性休克动物脑阿片受体数量可能是ＴＲＨ拮抗内阿片肽的心血管抑制作用，发挥抗休克作用的重要机理。

促甲状腺激素受体抗体与Graves眼病糖皮质激素治疗敏感性的关系探讨

目的:探讨促甲状腺激素受体抗体(Thyrotropin receptor antibody,TRAb)与Graves眼病(Graves′s ophthalmopa-thy,GO)患者对糖皮质激素治疗敏感性的关系。方法:37例活动性Graves眼病患者给予口服泼尼松治疗,根据治疗后眼病缓解程度及是否仍具活动性评价对激素治疗的敏感性,将病人分为敏感组(S组)和不敏感组(NS组),观察血清TRAb阳性率和抗体水平的变化。结果:敏感组(n=28)治疗前血清TRAb阳性率为76·53%,平均水平为(12·54±5·62)U/L;治疗后TRAb阳性率为22·18%,平均水平为(7·82±4·91)U/L,较治疗前明显下降(P<0·05)。不敏感组(n=9)治疗前血清TRAb阳性率为67·24%,平均水平为(11·07±4·63)U/L,治疗后血清TRAb阳性率为59·74%,平均水平为(10·81±5·96)U/L,与治疗前比较无显著性差异。在治疗前,两组的血清TRAb水平无显著性差异;治疗后,不敏感组的血清TRAb水平明显高于敏感组(P<0·05)。结论:Graves眼病患者血清TRAb水平的变化与糖皮质激素治疗的敏感性密切相关,TRAb可作为评价糖皮质激素治疗效果的主要指标。

分子识别理论在促甲状腺激素受体系统的应用

目的观察促甲状腺激素受体(TSHR)分子上的特定片段-TR1(aa37-45)、TR2(aa353-366)和TR3(aa648-655)与其相应的反义肽-RT1(aa45-37)、RT2(aa366-353)和RT3(aa655-648)之间的选择性识别。方法制备固相反义肽亲和层析柱-RT1-sepharose4B,RT2-sepharose4B和RT3-sepharose4B,采用阶段洗脱法,观察相应天然肽-TR1、TR2和TR3在柱上的滞留行为。结果TR1、TR2和TR3与其相应的反义肽之间存在选择性识别,而反义肽RT1且能识别TSHR大分子;此外,牛促甲状腺激素(bTSH)蛋白还能被TR1识别。结论本实验证实了分子识别理论在促甲状腺激素受体系统的存在,它可能用于生物大分子蛋白质的分离、促甲状腺激素(TSH)与受体(TSHR)结合位点的测定,并用于实验性自身免疫性甲状腺炎大鼠的实验性治疗。