特异性抑制PI3K对胶质瘤生物学特性及EphA2/PI3K/MMPs通路的影响

目的通过磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)特异性抑制剂LY294002处理高侵润性胶质瘤细胞U251,观察胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭变化,并检测受体型酪氨酸激酶(RTK)通路分子受体型酪氨酸激酶A2(erythropoietin-producing hepatocellular A2,EphA2)、PI3K、MMP-2表达,探讨胶质瘤信号通路作用机制。方法用不同浓度LY294002处理U251细胞,MTT法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移力及侵袭力,采用实时荧光定量PCR(real-time qPCR)检测细胞EphA2、PI3K、MMP-2 mRNA表达。结果LY294002呈剂量依赖性降低U251细胞的增殖、迁移、侵袭力,下调U251细胞PI3K、MMP-2表达,但对U251细胞EphA2表达无明显影响。结论LY294002剂量依赖性抑制人胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制PI3K/MMP-2通路有重要关系。

白细胞介素-6和JAK2/STAT3信号通路在急性肺损伤中的作用

急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是一种引起肺内皮和上皮屏障破坏的急性炎症疾病,临床表现为肺浸润、低氧血症和肺水肿,现在被重新归类为中度或轻度急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。ALI是常见的呼吸系统疾病,更是重症患者发病和死亡的重要原因,在全球范围内病死率居高不下,其发病机制尚未完全阐明。但越来越多证据集中在炎症激活、细胞凋亡、氧化应激损伤、凝血功能异常等方面。非受体型酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)信号通路在调控细胞凋亡、增殖、分化和炎症反应中起重要作用。炎症细胞因子白细胞介素(IL)-6可激活JAK2/STAT3通路,介导炎症因子的进一步释放,引发级联放大的炎症反应参与ALI发生、发展等多个环节,被认为是ALI发展过程中的关键信号通路之一。本文以IL-6、JAK2/STAT3信号通路为对象,阐明其介导的信号通路在ALI发展中的作用及研究进展。

基于IL-6/JAK2/STAT3通路探讨加味三物白散对胃癌裸鼠移植瘤上皮间质转化的抑制作用

目的:研究加味三物白散对胃癌裸鼠移植瘤上皮间质转化(EMT)的抑制作用及与白细胞介素-6(IL-6)/非受体型酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)通路的关系。方法:40只裸鼠随机分成模型组、加味三物白散组、阳性药物组、联合组,每组10只。造模、灌胃干预后,ELISA检测裸鼠血清IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、CEA、CA199含量,HE染色观察瘤组织病理改变,RT-PCR及Western Blot检测EMT及IL-6/JAK2/STAT3通路相关mRNA、蛋白表达情况。结果:与模型组比较,各给药组第12—18天瘤体体积显著缩小(P<0.05),镜下肿瘤细胞有坏死区,血清中IL-6、TNF-α、CEA、CA199含量显著降低(P<0.05),瘤组织中JAK2、STAT3、N-cadherin、Vimentin mRNA及STAT3、N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05),E-cadherin mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.01,P<0.05);且联合组各m RNA表达效果优于两单给药组(P<0.05)。结论:加味三物白散可通过调控IL-6/JAK2/STAT3信号通路抑制胃癌裸鼠移植瘤EMT,效果以联合用药为优。

针灸治疗浆细胞性乳腺炎的疗效观察及对JAK2/STAT3信号通路关键蛋白的影响

目的观察针灸治疗浆细胞性乳腺炎的临床疗效及对非受体型酪氨酸蛋白激酶2(Janus kinase 2,JAK2)/信号转导及转录激活蛋白3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路关键蛋白的影响。方法将96例浆细胞性乳腺炎患者随机分为观察组和对照组,每组48例。对照组予甲泼尼龙,观察组在对照组基础上予针刺和艾灸治疗。比较两组临床疗效、复发情况及不良反应发生情况,观察两组治疗前后乳房症状(乳房肿块直径、乳房肿块范围、乳房疼痛和乳房皮肤)评分,血清炎性因子[肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-8(interleukin-8,IL-8)和C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)]、血清免疫指标[免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)、免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)、补体C3和C4]以及乳房组织液中JAK2/STAT3信号通路关键蛋白[JAK2、磷酸化JAK2(phospho-JAK2,p-JAK2)和STAT3、磷酸化STAT3(phospho-STAT3,p-STAT3)]的水平。结果观察组总有效率为97.9%,高于对照组的75.6%(P<0.05);治疗后3个月随访时,观察组复发率2.2%,低于对照组的26.5%(P<0.05)。治疗后,观察组乳房肿块直径、乳房肿块范围、乳房疼痛和乳房皮肤评分均低于对照组(P<0.05),观察组TNF-α、IL-6、IL-8、CRP、IgG、IgM、补体C3、补体C4、JAK2、p-JAK2、STAT3和p-STAT3水平均低于对照组(P<0.05)。对照组不良反应发生率为31.1%,高于观察组的23.4%(P<0.05)。结论针灸联合甲泼尼龙治疗浆细胞性乳腺炎的临床疗效优于单纯甲泼尼龙治疗,可更好地缓解乳房肿块、疼痛等症状,降低复发,其作用机制可能与调节JAK2/STAT3信号通路关键蛋白有关。

Th1/Th2免疫失衡介导的JAK2/STAT3信号通路在慢性偏头痛模型大鼠神经递质释放中的作用机制

目的探究Th1/Th2免疫失衡介导的非受体型蛋白酪氨酸激酶2(Janus kinase 2,JAK2)/转录激活因子3(Signal transduction and activator of transcription 3,STAT3)信号通路在慢性偏头痛模型大鼠神经递质释放中的作用及可能机制。方法根据实验设计将大鼠随机分为对照组、偏头痛组、JAK2抑制(WP1066)组,每组各10只;试剂盒检测血清Th1/Th2免疫相关因子:干扰素-γ(Interferon-Gamma,IFN-γ)、白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-Alpha,TNF-α)、IL-6、TNF-β、IL-2、IL-5、IL-9、IL-10、五羟色胺(5-Hydroxytryptamine,5-HT)、β-内啡肽(Beta-endorphin,β-EP)、γ-氨基丁酸(Gamma-aminobutyric acid,GABA)、一氧化氮(Nitric oxide,NO)水平;记录各组大鼠挠头次数;激光多普勒灌注监测仪测量脑血流;Western blotting检测大脑皮质中JAK2,STAT3,磷酸化JAK2(Phospho-JAK2,p-JAK2)及p-STAT3蛋白水平。结果与对照组比较,偏头痛组血清TNF-α,TNF-β,IFN-γ,IL-2水平明显增高(P<0.05),IL-4,IL-5,IL-9,IL-10水平明显降低(P<0.05),烦躁易动、双耳明显变红、挠头次数增加(P<0.05),脑血流量减少,大脑皮层JAK2,STAT3水平无明显变化(P>0.05),p-JAK2,p-STAT3表达水平增高(P<0.05),血清5-HT、β-EP水平降低,GABA,NO水平增高(P<0.05);与偏头痛组比较,WP1066组烦躁程度降低,双耳变红程度减弱且挠头次数减少(P<0.05),脑血流量增加,大脑皮层总JAK2、总STAT3表达水平降低,p-JAK2,p-STAT3表达水平降低(P<0.05),血清5-HT,β-EP水平增高,GABA,NO水平降低(P<0.05)。结论抑制JAK2表达可改善偏头痛模型大鼠行为学表现、改善脑血流量及神经递质水平,这可能与Th1/Th2免疫失衡介导的JAK2/STAT3信号通路有关。

基于JAK2/STAT3信号通路探讨芪苓白头翁汤对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨芪苓白头翁汤对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡、非受体型酪氨酸蛋白激酶2/信号转导及转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路及炎症因子白细胞介素^(-1)0(IL^(-1)0)的影响。方法:以人DLBCL细胞OCI-LY10、U2932细胞为研究对象,细胞增殖与活性检测法(CCK-8)检测细胞增殖情况,并计算出0、4.6、9.3、18.7、37.5、75、150 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤处理OCI-LY10、U2932细胞24 h后的半抑制浓度(IC_(50))分别为9.33、16.13 mg·L^(-1)。后续相关实验根据芪苓白头翁汤作用于OCI-LY10、U2932细胞24 h半抑制浓度(IC_(50)),选用芪苓白头翁汤9.5、19、38 mg·L^(-1)开展实验。用胱天蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9酶原活化检测试剂盒检测经0、9.5、19、38 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤处理OCI-LY10、U2932细胞24 h后OCI-LY10、U2932细胞中Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的酶原活化情况。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测经0、9.5、19、38 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤处理OCI-LY10、U2932细胞24 h后OCI-LY10、U2932细胞中IL^(-1)0炎症因子表达情况。流式细胞仪检测不同浓度芪苓白头翁汤作用OCI-LY10、U2932细胞24 h后细胞凋亡率及细胞周期。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测0、9.5、19、38 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤作用OCI-LY10、U2932细胞24 h,OCI-LY10、U2932细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)、活化的Caspase-3(cleaved Caspase-3)凋亡蛋白表达情况及JAK2、STAT3、磷酸化(p)-JAK2、p-STAT3通路蛋白表达情况,不同浓度药物作用OCI-LY10、U2932细胞24 h,OCI-LY10、U2932细胞中癌基因(c-Myc)蛋白表达情况。结果:芪苓白头翁汤作用于OCI-LY10、U2932细胞24 h,与空白组比较,芪苓白头翁汤各组细胞增殖均受到明显抑制(P<0.05,P<0.01);9.5、19、38 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9酶原显著活化(P<0.01),细胞凋亡增加(P<0.05,P<0.01),细胞于DNA合成前期(G1)阻滞增加(P<0.05,P<0.01);9.5、19、38 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤组OCI-LY10、U2932细胞中Bcl-2、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达显著降低(P<0.01),Bax、cleaved PARP、cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.01),JAK2、STAT3蛋白表达未见明显改变。与空白组比较,19 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤组、19 mg·L^(-1)芪苓白头翁汤+10μg·L^(-1)IL^(-1)0组c-Myc、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平下降(P<0.05,P<0.01),10μg·L^(-1)IL^(-1)0组c-Myc、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达明显增加(P<0.05,P<0.01),通路蛋白JAK2、STAT3蛋白表达未见明显改变。结论:芪苓白头翁汤可以抑制人DLBCL细胞OCI-LY10、U2932细胞的增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与芪苓白头翁汤调控JAK2/STAT3信号通路有关。

丹参多酚酸对抑郁症大鼠模型的治疗效果及机制研究

目的 基于非受体型酪氨酸蛋白激酶2/信号转导与转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路探究丹参多酚酸对抑郁症模型大鼠海马神经元细胞及单胺类神经递质的影响。方法 将SD大鼠随机分为对照组、模型组、丹参多酚酸低剂量组(20 mg·kg^(-1))、丹参多酚酸高剂量组(40 mg·kg^(-1))、JAK2抑制药组(pacritinib, 10 mg·kg^(-1)),每组8只。除对照组外,其他各组采用慢性温和应激法建立抑郁症模型,再按剂量腹腔注射给药。用免疫组化法检测海马胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和成纤维细胞生长因子(FGF)表达,用酶联免疫吸附法检测海马组织白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NE)水平,用蛋白质印迹法检测海马组织JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达。结果 对照组、模型组、丹参多酚酸低、高剂量组、pacritinib组海马组织GFAP表达分别为35.68±3.28、8.32±2.25、12.36±3.54、16.52±3.13和20.57±4.12;FGF表达分别为48.55±5.22、9.24±1.07、11.29±2.28、19.46±3.83和23.49±4.65;IL-6含量分别为(12.48±2.24)、(39.35±4.32)、(36.68±6.47)、(24.17±5.81)和(21.60±5.29)ng·mL^(-1);IL-1β含量分别为(17.42±3.14)、(52.78±6.82)、(48.63±5.71)、(33.25±6.34)和(29.92±4.65)ng·mL^(-1);TNF-α含量分别为(24.67±3.51)、(65.81±9.47)、(61.25±7.38)、(41.72±5.63)和(37.79±5.46)ng·mL^(-1);5-HT含量分别为(28.75±2.54)、(19.16±3.61)、(21.72±2.98)、(24.91±3.23)和(26.37±3.74)ng·mL^(-1);DA含量分别为(269.78±22.34)、(205.41±17.66)、(212.36±19.42)和(245.52±26.73)、(251.75±29.95)ng·mL^(-1);NE含量分别为(32.47±2.36)、(22.68±3.14),(25.13±3.50)、(27.89±3.27)和(28.95±2.57)ng·mL^(-1);p-JAK2/JAK2分别为0.92±0.09、1.44±0.12、1.38±0.13、1.13±0.11和1.08±0.15;p-STAT3/STAT3分别为0.94±0.07、1.62±0.18、1.57±0.20、1.11±0.15和1.04±0.12。上述指标,对照组与模型组比较,模型组与丹参多酚酸高剂量组、pacritinib组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 丹参多酚酸能有效改善大鼠抑郁样行为,可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路,减轻神经炎症,调节单胺类神经递质水平,改善星形胶质细胞功能途径实现。

基于JAK2/STAT3信号通路探讨白头翁皂苷A对Burkitt淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨白头翁皂苷A对人伯基特淋巴瘤(BL)细胞Raji细胞增殖、凋亡及相关通路蛋白表达的影响。方法:以人BL细胞Raji细胞为研究对象,细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测细胞增殖情况,并计算出24、48、72 h的半数抑制浓度(IC_(50))分别为19.77、18.31、16.70μmol·L^(-1)。后续相关实验根据白头翁皂苷A作用Raji细胞72 h IC_(50),选用白头翁皂苷A 8、16、32μmol·L^(-1)开展实验。用0、8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A作用于Raji细胞24、48、72 h,CCK-8法检测细胞生长曲线吸光度A。检测经0、8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A处理Raji细胞24 h后Raji细胞中胱天蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、Caspase-9的酶原活性。流式细胞仪检测不同浓度白头翁皂苷A作用Raji细胞24 h后细胞凋亡率及细胞周期。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测0、8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A作用Raji细胞24 h,Raji细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)、活化的Caspase-3(cleaved Caspase-3)凋亡蛋白表达情况,检测非受体型酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)、信号转导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化(p)-JAK2、p-STAT3通路蛋白表达情况。结果:与空白组比较,8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A组细胞增殖受到抑制,8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A组Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9酶原显著活化(P<0.01),细胞凋亡明显增加(P<0.05,P<0.01),细胞于有丝分裂准备期(G2)期阻滞明显增加(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,8、16、32μmol·L^(-1)白头翁皂苷A组Raji细胞中Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),Bax、cleaved PARP、cleaved Caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.01),JAK2、STAT3蛋白表达未见明显改变,p-JAK2、p-STAT3蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:白头翁皂苷A可以抑制人BL细胞Raji细胞的增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与白头翁皂苷A调控JAK2/STAT3信号通路有关。

槲皮素对人卵巢癌细胞-3增殖和凋亡的影响

目的:探讨槲皮素对人卵巢癌细胞-3(ovarian carcinoma cell,OVCAR-3)增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:将对数生长期的OVCAR-3细胞随机分为对照组和槲皮素组。对照组细胞给予培养基常规培养,而槲皮素组细胞加入槲皮素(160μmol·L^(-1))。各组细胞培养48 h后,利用噻唑蓝检测人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞增殖;流式细胞仪检测人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞凋亡,RT-PCR检测细胞受体型酪氨酸激酶2(JAK2),信号传导与转录激活因3(STAT3),B细胞淋巴因子2(Bcl-2),人Bcl-2相关X蛋白(Bax)信使mRNA表达水平。免疫蛋白印记法检测各组OVCAR-3细胞中STAT3,磷酸化受体型酪氨酸激酶2(p-JAK2),磷酸化信号传导与转录激活因3(p-STAT3),Bax,Bcl-2蛋白的变化,Caspase3活性试剂盒检测Caspase3活性。结果:MTT检测结果显示槲皮素组与对照组相比,人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞增殖率明显下降(P<0.05)。流式细胞仪检测显示槲皮素组OVCAR-3细胞凋亡率较对照组明显升高(P<0.05)。RT-PCR检测显示槲皮素组与对照组JAK2和STAT3信使mRNA表达水平无明显差异,而槲皮素组Bax信使mRNA水平比对照组明显增高,槲皮素组Bcl-2信使mRNA水平比显著低于对照组。Western blotting检测显示,槲皮素组的JAK2和STAT3蛋白表达与对照组比较,无明显差异(P>0.05),而槲皮素组的p-STAT3,p-JAK2和Bcl-2蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05),槲皮素组的Bax表达显著高于对照组(P<0.05)。Caspase3活性试剂盒检测结果显示,槲皮素组Caspase3活性表达水平显著高于对照组。结论:槲皮素能明显抑制人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞增殖,促进人卵巢癌细胞株OVCAR-3细胞凋亡,其作用机制可能是通过激活JAK2/STAT3信号传导通路。

麦粒灸对溃疡性结肠炎模型小鼠结肠组织JAK2/STAT3信号通路的影响

目的观察麦粒灸“中脘”“天枢”“上巨虚”穴对溃疡性结肠炎(UC)小鼠结肠组织的影响并探讨其可能作用机制。方法40只C57BL/6雄性小鼠随机分为空白组、模型组、麦粒灸组、美沙拉嗪组,每组10只。除空白组外,其余各组小鼠采用自由饮用3%葡聚糖硫酸钠盐溶液法制备UC小鼠模型。造模成功后麦粒灸组小鼠予麦粒灸“中脘”“天枢”“上巨虚”干预,每穴3壮,每壮时间约为30 s;美沙拉嗪组给予300 mg/kg美沙拉嗪肠溶片溶液灌胃;空白组、模型组仅抓取固定,不予任何干预。各组干预均每日1次,连续7天。观察各组小鼠一般情况并对小鼠疾病活动指数(DAI)进行评分;检测结肠长度、肠重指数及结肠黏膜损伤评分;ELISA法检测血清细胞间黏附分子1(ICAM-1)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;HE染色法观察结肠组织病理学变化;实时荧光定量PCR法和免疫组化法分别检测小鼠结肠组织中非受体型酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)、信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)、细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)mRNA及阳性表达;免疫荧光双标染色法检测小鼠结肠组织JAK2、SOCS3平均荧光强度表达。结果与空白组比较,模型组小鼠肛周不洁、大便不成形,结肠黏膜形态破坏;体质量降低,结肠长度缩短,DAI评分、肠重指数、结肠黏膜损伤及组织病理评分、血清ICAM-1、IL-6、TNF-α含量增加,结肠组织JAK2、STAT3 mRNA及蛋白表达升高,JAK2平均荧光强度表达升高,SOCS3 mRNA、蛋白及平均荧光强度表达降低(P<0.01)。与模型组比较,麦粒灸组、美沙拉嗪组小鼠肛周得到改善,结肠黏膜形态较为完整;体质量、结肠长度增加,DAI评分、肠重指数、结肠黏膜损伤及组织病理评分、血清ICAM-1、IL-6、TNF-α含量减少,结肠组织JAK2、STAT3 mRNA及蛋白表达降低,JAK2平均荧光强度表达降低,SOCS3mRNA、蛋白及平均荧光强度表达升高(P<0.05或P<0.01)。麦粒灸组与美沙拉嗪组各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论麦粒灸“中脘”“天枢”“上巨虚”能够改善UC模型小鼠结肠黏膜的损伤,其机制可能与SOCS3调控JAK2/STAT3信号通路相关。

麦芽总生物碱对产后缺乳大鼠乳汁分泌的影响及机制研究

目的:探究不同剂量麦芽总生物碱(total barley maiya alkaloids,TBMA)对产后缺乳大鼠乳汁分泌的影响及机制。方法:产后24 h内SD大鼠随机分为对照组、模型组、胃复安组、7.5 g组(成人日服7.5 g生麦芽所含TBMA,下同)、15 g组、30 g组、60 g组,灌胃溴隐亭建立产后缺乳大鼠模型,各组灌胃相应药物,持续12 d。观察母鼠泌乳量、仔鼠12 d窝重净增量;用HE染色观察各母鼠乳腺组织病理变化;ELISA测定各组大鼠血清泌乳素(prolactin,PRL)、雌二醇(sstradiol2,E2)、孕酮(progesterone,P)水平;Western Blot检测母乳腺组织PRL、泌乳素受体(prolactin receptor,PRLR)、β-酪蛋白(β-casein)蛋白表达;免疫组化检测母鼠乳腺组织PRLR、非受体型酪氨酸蛋白激酶2(janus kinase 2,JAK2)、信号传导及转录激活蛋白5(signal transducer and activator of transcription 5,Stat5)蛋白表达。结果:15 g组母鼠泌乳量和仔鼠12 d窝重净增量显著升高(P<0.05、P<0.01),大鼠乳腺小叶明显扩张、乳汁充盈,血清PRL、E2、P水平均显著升高(P<0.05、P<0.01),乳腺组织中PRL、β-casein、PRLR蛋白表达明显升高(P<0.05),JAK2、Stat5蛋白表达升高;而7.5,30,60 g组均无上述作用。结论:15 g生麦芽所含TBMA能有效促进泌乳,其作用机制可能与由PRLR介导的JAK2/Stat5信号通路有关。

基于miRNA-146a/JAK/STAT/SOCS-3信号通路探讨安肠汤对溃疡性结肠炎大鼠炎症免疫的影响

目的:研究安肠汤低、中、高剂量对SD大鼠溃疡性结肠炎的抗炎作用,通过研究不同给药剂量对miRNA-146a/非受体型酪氨酸蛋白激酶(JAK)/信号传导与转录激活因子(STAT)/细胞因子信号传导抑制蛋白-3(SOCS-3)信号通路及其下游蛋白的影响探讨安肠汤防治溃疡性结肠炎的可能机制。方法:实验大鼠分为正常组,模型组,美沙拉嗪组(1 g·kg^(-1)),安肠汤低、中、高剂量组(6,12,24 g·kg^(-1)),每组10只。除正常组外,其余各组均采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠法建立溃疡性结肠炎大鼠模型,分别给药14 d。观察大鼠神态、大便性状、毛发等一般情况的变化,并参照疾病活动指数(DAI)表进行评分,苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠结肠组织病理改变,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-10(IL-10),IL-17,IL-1β,IL-6水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中JAK2,磷酸化STAT3(p-STAT3),STAT3,SOCS-3蛋白表达的变化,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定大鼠结肠组织中JAK2,p-STAT3,STAT3,SOCS-3 mRNA以及血浆miRNA-146a的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠JAK2,p-STAT3,STAT3蛋白表达及JAK2,p-STAT3,STAT3 mRNA表达明显增高(P<0.05),模型组大鼠miRNA-146a,SOCS-3 mRNA以及SOCS-3蛋白表达明显降低(P<0.05);与模型组比较,给药组大鼠精神状态,进食量,毛色等情况均明显改善,DAI评分明显降低(P<0.05),给药组大鼠结肠溃疡组织明显改善,给药组大鼠结肠组织JAK2,p-STAT3,STAT3蛋白表达及JAK2,p-STAT3,STAT3 mRNA表达明显降低(P<0.05),给药组大鼠miRNA-146a,SOCS-3 mRNA以及SOCS-3蛋白表达明显增高(P<0.05)。结论:安肠汤可能通过影响miRNA-146a/JAK/STAT/SOCS-3信号转导通路相关基因及蛋白表达,抑制溃疡性结肠炎病情的发展。

信号转导和转录激活因子3与基质金属蛋白酶9在肠屏障功能障碍小鼠肠组织的表达及其关系

目的探讨信号转导和转录激活因子3(STAT3)与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在脂多糖诱导炎症性损伤致肠屏障功能障碍中的作用及其关系。方法 32只8~9周龄雄性BALB/c小鼠随机数字表法分为Stattic 7 d组、Stattic 14 d组、假手术组(Sham组)和空白对照组(NC组), 每组8只。Stattic 7 d组和Stattic 14 d组分别给予Stattic 15 mg/(kg·d)腹腔注射7 d和14 d, Sham组给予同等容量生理盐水腹腔注射14 d;NC组不做预处理。预处理后4组小鼠单次腹腔注射脂多糖(LPS), 12 h后观察存活情况并取材, 比较各组小鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)及二胺氧化酶(DAO)水平、小肠Chiu’s评分、肠组织STAT3、磷酸化STAT3(p-STAT3)、MMP-9及闭合蛋白Occludin表达情况。组间比较采用χ^(2)/F检验。结果 Sham组和NC组血清DAO高于Stattic 7 d组和Stattic 14 d组[(125.71±31.10)、(125.91±40.54)、(62.86±14.79)、(58.95±22.35) ng/ml, F=18.329, P<0.01], 差异有统计学意义;Sham组和NC组Chiu’s评分高于Stattic 7 d组和Stattic 14 d组[(2.54±0.53)、(2.24±0.38)、(1.10±0.38)、(0.89±0.30)分, F=32.303, P<0.01], 差异有统计学意义;p-STAT3、MMP-9, Sham组和NC组免疫组织化学阳性面积高于Stattic 7 d组和Stattic 14 d组[(10.34±2.55)、(18.60±2.61);(17.34±2.86)、(19.84±3.50);(9.48±2.64)、(8.53±4.04);(10.34±2.55)、(9.71±3.37)%, F=29.025、23.656, P<0.01], 差异有统计学意义;p-STAT3、MMP-9, Sham组和NC组蛋白相对表达量高于Stattic 7 d组和Stattic 14 d组(0.35±0.06、0.74±0.13;0.32±0.07、0.73±0.11;0.19±0.02、0.36±0.11;0.20±0.04、0.40±0.09), 差异有统计学意义(F=21.852、27.125, P<0.01), Stattic 7 d组和Stattic 14 d组Occludin高于Sham组和NC组(0.39±0.09、0.46±0.10、0.21±0.06、0.21±0.16, F=23.504, P<0.01), 差异有统计学意义。结论 IL-6/JAK2/STAT3通路参与肠黏膜中MMP-9的表达调控, 并影响肠屏障功能。