应用受体技术从传统中草药中筛选新药

受体技术作为当今药物研究的一个崭新工具,正在对新药的研究和开发产生巨大影响。受体技术在中草药的筛选和研究的应用前景非常令人乐观,将使我国的中药新药筛选由传统的整体动物模型发展到以微量受体筛选为导向的分子水平,极大地提高我国的新药研究和开发水平,使中药新药(尤其是Ⅰ、Ⅱ类中药)研究步入高效率筛选的新阶段。

受体技术与新药开发

本文介绍应用受体技术筛选新药的优点，以及当前国外一些制药业利用该技术开发新药方面的信息。并简介近年来在受体与药物研究方面的某些进展概况，包括受体亚型、药效基团、受体导向、ＤＮＡ受体序列和ＰＥＴ技术等。

受体技术与中药研究

将受体学理论和实验技术引用到中药研究领域应用前景广阔。本文从受体角度和从中药生物效应入手,提出了中药生物效应鉴定法,其意义在于搞清有效中药的作用机制和药效物质基础,实现中药质量研究标准化、规范化,使中药鉴定学科直接服务于临床、服务于现代中药新药的研制与开发。本文就受体学基本理论和实验技术进行了介绍。

生物技术的新领域──受体技术

生物技术的新领域──受体技术傅启高，洛秋江（新疆农业大学动物营养室乌鲁木齐８３００５２）现代有牧生产受两种因素制约，一是社会对畜产品需求日益增长，二是生产资源日益暖乏。如何在现有畜禽种质资源和饲料资源条件下提高畜牧生产效率，是畜牧生产中的中心内容。从...

受体技术与新药筛选

目的 较系统地介绍受体技术在新药筛选中的应用,为我国开展以受体为靶标的新药筛选提供参考。方法 接受体技术的基本原理和方法、优点、受体筛药模型、应注意的问题和展望分别进行介绍。结果与结论 用受体技术对新药进行筛选是一项高效的筛选法。

嵌合抗原受体(CAR)技术在血液肿瘤免疫治疗中的应用及策略

嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)技术作为一种重新定向T淋巴细胞到靶抗原的一种新兴免疫治疗策略,已经从涉及基因工程多个领域的复杂技术转变成为治疗病毒感染性疾病、恶性肿瘤一种新型免疫治疗策略。CAR技术具有使得T细胞突破了HLA-1类分子的限制,增加了T细胞识别肿瘤抗原的特异性和靶点范围,同时增加了过继输注T细胞治疗的安全性。本文主要回顾CAR技术在血液肿瘤免疫治疗中的应用以及应用中获得的改善CAR技术的策略。

嵌合抗原受体(CAR)技术在血液肿瘤治疗中的研究进展

嵌合抗原受体是一种基础性的免疫治疗,经过近二十五年的发展,它已经成了治疗恶性肿瘤的新希望。随着对新的特异性肿瘤标志物的不断发现以及基因工程技术的不断发展,嵌合抗原受体技术越来越成熟,即将在临床上得到广泛应用。嵌合抗原受体技术治疗方法在血液肿瘤的治疗中存在显著的优势,取得了新的突破。本文主要对嵌合抗原受体技术在血液肿瘤免疫治疗中的应用进行回顾性分析,对其优势、创新、应用现状以及未来发展进行了深入分析。

叶酸受体介导上皮细胞染色技术在HPV阳性患者分流中的应用

目的探讨叶酸受体介导上皮细胞染色技术(FRD)在人乳头瘤病毒(HPV)阳性患者分流中的应用。方法对HPV16/18阴性而其他高危亚型阳性、宫颈细胞学检查结果≥无明确诊断意义的鳞状上皮细胞病变(ASC-US)的658例患者进行FRD宫颈染色、液基细胞学检测(TCT)、宫颈活检。以组织病理学诊断结果为标准,评价FRD检测分流HPV16/18阴性而其他高危亚型阳性患者的价值。结果658例患者FRD宫颈染色阳性率为33.43%。组织病理学诊断结果显示CINⅠ级205例,CINⅡ级96例,CINⅢ级52例,癌18例。FRD检测分流组织病理学诊断CINⅡ级及以上患者的灵敏度为0.837,特异度为0.835,阳性预测值为0.632,阴性预测值为0.938。FRD检测分流的阴道镜转诊率为33.43%,明显低于TCT分流的100.00%(P<0.05)。结论FRD检测可用于HPV16/18阴性而其他高危亚型阳性患者的分流,以减少不必要的阴道镜检查。

以受体为靶点的药物筛选模型的建立和应用

我国的新药研制工作面临着十分严峻的竞争和挑战。在创制新药的研究中寻找和发现具有生物活性的先导化合物是至关重要的环节之一，而对大量化合物进行活性筛选则是发现先导化合物的主要手段和途径。近年来，我们应用以受体为靶点的药物筛选模型筛选新药技术，已取得了一定的经验。所谓受体配体结合技术，就是利用从器官中分离出细胞膜受体或重组受体技术制备的受体作为筛选模型，利用受体和配体结合的高度特异性以及放射性核素测量的高灵敏度的特点，用放射性核素标记配体（＊L），在一定的条件下，使其与受体（R）结合，形成受体——配体复合物（R·＊L），通过测量R＊L的放射性，达到了解受体的结合活性的目的，使用这种技术测定标记配体的类似物和受体的亲和力，来比较一系列的化合物与受体结合的亲和力。由于受体配体结合分析操作快速，简便，药品用量少，可作为药物构效关系研究的工具。通过大量类似活性药物结构的化合物研究，不难总结出构效关系，明确定位出药物活性的分子部位，指导化学合成，研制安全有效的新型特异性药品提供可靠的评价手段。我们利用这种技术已建立了二十六种受体配体结合技术模型，并在这些模型上分别筛选到了有价值的亲和力大小和功能活性的新化合物参数，从而大大加快了先导化合物发现的进程。

01041 Biomimic将开发能表达结合毒素受体的细菌

Biomimic是澳大利亚一家新公司，是由Imugene公司和阿德雷德大学共同组建，主要开发用于人类胃肠道疾病治疗的受体模拟技术(RMT)。Imugene公司已经从该大学获得将这种技术用于治疗猪疾病的特许。

CAR-T细胞椎管内注射治疗复发胶质瘤患者的护理

对8例复发胶质瘤患者行CAR-T细胞椎管内注射治疗。在常规护理的基础上密切观察和积极救治细胞因子释放综合征及中枢神经系统毒性反应,精心护理皮肤损害,细化腰大池置管护理和心理支持。结果8例患者顺利完成疗程,治疗相关并发症得到有效控制;5例病情好转出院,3例病情进展(2例出院,1例再次手术)。个体化精细护理有助于患者顺利完成治疗。

基于2A多肽策略的抗CD19嵌合抗原受体表达载体的构建与应用

目的:构建最优的基于2A多肽策略的抗CD19嵌合抗原受体表达载体,为后期的B细胞恶性肿瘤临床治疗研究提供基础。方法:通过分子克隆技术构建pGIZ-EF1α-19CAR和4-1BBL表达载体,然后连接到pGIZ-EF1α-19CAR-P2A-4-1BBL表达载体中。将构建的重组质粒与两种包装质粒(psPAX.2和PMD2.G)共转染293T细胞以制备所需的慢病毒;MACS珠粒分选技术在分选健康人外周血T细胞时,利用antiCD2-antiCD3-antiCD28单克隆抗体磁珠加IL-2 体外扩增培养T 细胞;浓缩后的慢病毒感染 T 细胞,建立CAR-T细胞,利用流式细胞术检测19CAR和4-1BBL的共表达;通过细胞杀伤实验等手段检测CAR-T特异性杀伤细胞的功能。结果:①通过琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定构建的pGIPZ-19CAR-P2A-4-1BBL慢病毒表达载体构建成功。②19CAR-P2A-4-1BBL慢病毒转染 293T细胞,制得CAR-T 细胞,并利用流式细胞仪检测阳性细胞百分率,测定 CAR 的表达,流式结果表明CD19-CAR-构建成功,可以在细胞膜表面表达。③制备的病毒溶液感染T细胞。通过19CAR-IRES-4-1BBL和19CAR-P2A-4-1BBL感染T细胞后杀伤能力比较。两者均随效靶比的递增,细胞杀伤力变大,当CAR-T细胞与靶细胞比例达到40 ∶1时,细胞裂解率达到90%左右。两者CAR-T细胞的细胞杀伤能力差异无统计学意义( P >0.05)。结论:本课题成功构建了基于2A肽策略的慢病毒表达载体,通过转染获得所需病毒颗粒,慢病毒颗粒感染磁珠分选的 T细胞获得抗CD19 CAR-T细胞,初步构建了治疗B淋巴细胞白血病的CAR-T技术平台。

生长激素释放因子肝脏定向表达复合物在家兔体内的表达

外源基因在体内的转染及表达存在转染效率低、表达时间短等缺点 ,利用受体介导基因转移技术 ,可以将基因定向转入到特定组织 ,并且能提高转染效率和表达时间。在本试验中 ,利用肝脏去唾液酸糖蛋白受体 (ASGR)将生长激素释放因子 (GRF)基因定向转入到家兔肝脏组织并得到了表达。首先通过 DNA阻滞试验确定质粒 DNA与多聚赖氨酸 (poly- L- lysine,PL L)的结合比例及反应液的最佳 Na Cl浓度 ,然后将 PL L 与 α- D-吡喃半乳糖苯基异硫氰酸盐 (α-D- galactopyranosylphenyl isothiocyanate) (物质的量之比为 8∶ 1)在 p H9.0的 Na2 CO3溶液中进行糖基化反应 ,得到糖基化的 PL L(gal PL L)后透析除去未反应的糖并测定反应物糖含量。将糖基化的 PL L 与克隆有 GRF基因的 pc D-NA3- GRF质粒 (质量比为 3.16∶ 1)在 1.0 31m ol/ L的 Na Cl溶液中进行连接 ,最终得到 DNA- gal PL L复合物 ,电镜观察其结构。耳缘静脉注射质粒复合物到家兔体内 (1.5 mg/只 ) ,用 RT- PCR和 EL ISA检测不同组织的表达情况。结果注射后 7d家兔的肝脏 RT- PCR结果呈阳性 ,2 7d仍能检测到 GRF蛋白 ,但同时在其他的组织也检测到表达。并且进行了增重试验 ,发现定向转移

梗阻性黄疸大鼠肝脏GHR最大结合容量及结合力的改变

目的 研究梗阻性黄疸大鼠肝脏生长激素受体 (GHR)表达及结合力的改变。方法 采用受体放射配体结合分析(RBA)技术检测肝脏GHR的最大结合容量和解离常数 ,并与血清总胆红素、前白蛋白、肿瘤坏死因子 α作相关分析。结果 梗阻性黄疸大鼠肝脏GHR最大结合容量 (Bmax)明显下降 ,解离常数 (kd)明显增加。Bmax值与血清前白蛋白水平呈正相关 ,与血清总胆红素、肝组织匀浆肿瘤坏死因子 α水平呈明显负相关 ;而kd 值与血清前白蛋白呈负相关 ,与血清总胆红素、肝组织匀浆肿瘤坏死因子 α水平呈明显正相关。结论 梗阻性黄疸大鼠GHR的最大结合容量和结合能力均明显降低 ,可能与梗阻时TNF α等炎症因子的高表达、肝细胞胆盐蓄积等有关。GHR容量和结合能力的降低 ,可显著下调肝脏蛋白合成 ,并且可加重肠粘膜屏障的损伤 ,促进内毒素的吸收、TNF α等炎症因子的释放。因此GHR的最大结合容量及结合力的降低是梗阻性黄疸时病理生理改变的重要环节。

肿瘤血管活性肠肽受体显像剂的研究

目的 研究肿瘤血管活性肠肽受体 (VPAC受体 )显像剂的生物活性和药物动力学特性。方法 在血管活性肠肽 (VIP)C 末端加上His tag,作为水合羰基锝螯合位点和金属离子螯合层析纯化标签 ,进行 [99mTc(H2 O) 3 (CO) 3 ]+ 标记。利用家兔肛门内括约肌舒张实验、免疫细胞化学染色及竞争性受体结合实验鉴定VIP类似物MY34的生理活性。标记产物注入C5 7小鼠体内 ,行药物动力学特性分析。结果 MY34可舒张家兔肛门内括约肌 ,且能与肿瘤细胞膜上VPAC受体结合。标记化合物[99mTc(H2 O) 3 (CO) 3 ] MY34极其稳定 ,产率约为 90 %。MY34或VIP2 8均能竞争性抑制锝标小肽与肿瘤细胞膜上VPAC受体结合。锝标小肽在小鼠体内代谢符合两室开放模型 (Wi =1/C2 ) ,T1/ 2α 为16 .35min ,T1/ 2 β为 10 13.5 6min。结论 MY34具有与天然VIP2

运用反义寡核苷酸研究非洲爪蛙母源基因的功能

母源基因在动物胚胎早期发育中的功能是发育生物学研究领域的难点之一。在过去二十多年里,反义寡核苷酸介导的反向遗传学技术在多种模式生物中均得到广泛应用,在非洲爪蛙母源基因功能分析中,反义寡核苷酸介导的mRNA降解和受体转移(host transfer)技术的联合使用,确立了以转录因子VegT和Wnt信号分子家族成员Wnt11为代表的母源基因在非洲爪蛙胚胎早期图式建成中的重要功能。目前,非洲爪蛙仍然是研究脊椎动物母源基因功能最为方便的模式系统,因此,该文将在简要叙述VegT和Wnt11调控胚胎三胚层的决定与分化和背方组织者中心诱导过程中的作用的基础上,较为详细地介绍反义脱氧寡核苷酸降解母源mRNA的原理和其与受体转移技术结合使用,分析非洲爪蛙母源基因功能的详细技术流程。

生长抑素及其类似物在甲状腺疾病中的诊断与治疗

生长抑素及其类似物(somatostatln analogue,SSA)具有抗肿瘤的作用,生长抑素受体显像技术就是应用有关的放射性核素标记SSA,将放射性核素通过生长抑素受体(somatostatin receptors,SSTR)介导到相关肿瘤组织,进行肿瘤病灶和转移病灶的定位、诊断,以及应用与生长抑素类似物联合的药物进行生长抑素受体敏感的肿瘤的靶向治疗。目前研究表明,生长抑素受体显像技术在诊断甲状腺良、恶性肿瘤、甲状腺癌术后癌残留及手术后的复发方面,以及受体介导靶向放化疗方面具有广泛研究。