受体报告基因实验及其在维甲酸和维甲酸X受体干扰物监测中的应用

受体报告基因实验具有快速、经济、灵敏、方便等诸多优势,在高通量筛选类或抗雌雄激素等通过核受体起作用的环境内分泌干扰物方面得到了广泛的应用。环境中的维甲酸和维甲酸X受体干扰物如有机锡等有着类似的作用机制,研究者也开始采用受体报告基因实验的方法对该类污染物进行筛选与监测。本文综述了受体报告基因实验的技术方法,包括报告基因和宿主细胞的选择,并介绍了该方法在人工合成的维甲酸和维甲酸X受体干扰物筛选以及环境样品中该类污染监测中的应用。综述总结了应用受体报告基因实验检测环境内分泌干扰物研究中的不足并对该方法的未来发展进行了展望,希望为该方法在环境监测和评估中的应用提供新的思路。

雄激素受体(hAR)CAT报告基因筛选AR激动剂和拮抗剂的方法研究

[目的]建立雄激素受体(hAR)报告基因实验,为AR激动剂和拮抗剂活性筛选提供检测方法。[方法]构建受雄激素效应元件(ARE)调控的氯霉素乙酰转移酶(CAT)报告基因质粒pMMTV-CAT,将该质粒与hAR表达质粒AR/pcDNA3.1和阳性对照质粒pSV-β-Gal共转染非洲猴肾细胞株CV-1。以AR激动剂5α-双氢睾酮(5α-DHT)、糖皮质激素受体(GR)激动剂地塞米松和AR拮抗剂氟鲁他明为受试物,研究它们对AR的激动或拮抗作用。[结果]10^(-9)mol/L的5α-DHT显著诱导CAT的表达,诱导倍数为56.67,10^(-8)mol/L时达最大值,诱导倍数为79.30,在10^(-8)mol/L～10^(-6)mol/L范围内CAT的表达量维持在较高的平台水平。地塞米松不诱导CAT的表达。氟鲁他明在10^(-7)mol/L～10^(-5)mol/L浓度范围内显著拮抗1nmol/L的5α-DHT诱导的CAT的表达。[结论]5α-DHT对CAT的诱导和氰鲁他明对CAT的拮抗呈剂量-效应关系。该方法不存在与GR激动剂的交叉反应,具有较高的特异性。雄激素受体报告基因实验可以作为化学物(抗)雄激素活性筛选的方法。