甲状腺激素受体介导的荧光素酶报告基因试验筛查内分泌干扰化学物

目的采用人源性甲状腺激素受体(TRα/β)的荧光素酶报告基因试验系统筛查内分泌干扰化学物(EDCs),评估双酚A(BPA)、甲萘威和1-萘酚(1-NAP)的拟/抗甲状腺激素活性。方法以恒河猴肾细胞(LLCMK2)作为转染细胞,通过瞬时转染的方法分别构建基于pGL3-promega和pGL4.27的TRα/β的报告基因试验。用三碘甲状腺氨酸(T3)、甲状腺氨酸(T4)作为阳性受试物评价两个检测系统的灵敏性,并检测BPA、甲萘威和1-NAP的拟/抗甲状腺激素活性。结果基于pGL3-promega的TRβ的报告基因试验,T3的最低检测限为1.216×10^(-11) mol/L,在7.482×10^(-6) mol/L时诱导荧光素酶(Luc)的表达倍数是对照组的5.98倍,半数有效浓度(EC_(50))为3.327×10^(-8) mol/L;T4最低检测限为1.622×10^(-8) mol/L,最大诱导Luc表达的倍数为3.4倍,EC_(50)为2.213×10^(-7) mol/L。基于pGL4.27的TRβ的报告基因试验中,T3的最低检测限为9.863×10-12 mol/L,在1.671×10^(-6) mol/L时产生最大诱导Luc表达的倍数为对照组的8.57倍,EC_(50)为3.327×10^(-8) mol/L;T4最低检测限为1.349×10^(-9) mol/L,最大诱导Luc表达的倍数是4.6倍,EC_(50)为4.074×10^(-7) mol/L。用TRβ的报告基因试验系统评价BPA、甲萘威和1-NAP都无甲状腺受体激动剂活性,甲萘威和1-NAP有一定受体拮抗性。结论本研究建立的基于pGL3-promega和pGL4.27的TRβ的报告基因试验都有较高的灵敏性,pGL4.27相对更高,可以用来筛查内分泌干扰化学物,检测化学物质的拟/抗甲状腺激素活性。