TRPC1/STIM1复合体调节人脐静脉内皮细胞钙池操纵性钙通道和受体操纵性钙通道介导的钙内流和NO生成

目的研究瞬时受体电位通道1(TRPC1)/基质交联分子1(STIM1)复合体在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)钙池操纵性钙通道(SOCC)和受体操纵性钙通道(ROCC)介导的钙内流和NO生成中的作用。方法取2~3代HUVEC,将构建的TRPC1和STIM1干扰质粒分别转染HUVEC,观察细胞转染效果的同时采用real-time PCR和Western blot检测TRPC1、STIM1 mRNA和蛋白的表达。将细胞分别与钙敏感受体(CaR)激动剂精胺、ROCC模拟剂(TPA)+CaR负性变构调节剂Calhex231、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Ro31-8220及经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967孵育后,用荧光探针Fura-2/AM及DAF-FM负载方法同步检测[Ca2+]i和NO生成的变化;随后用TRPC1和STIM1干扰质粒同时转染HUVEC,与精胺孵育后检测[Ca2+]i和NO生成,免疫共沉淀法检测TRPC1和STIM1的相互作用。结果与Control组相比,TRPC1转染组和STIM1转染组TRPC1、STIM1 mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05);在四种不同处理作用下,TRPC1转染组和STIM1转染组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05);与Control组、TRPC1转染组及STIM1转染组相比,TRPC1和STIM1共转染组[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值均明显降低(P<0.05);TRPC1与STIM1相互作用形成复合体,且在CaR激动剂的剌激下作用增强。结论 TRPC1/STIM1复合体共同调节CaR经SOCC和ROCC激活介导的钙内流和NO生成。

旋覆代赭汤对反流性食管炎家兔食管下括约肌受体操纵性钙通道调控作用的研究

目的:研究旋覆代赭汤对反流性食管炎家兔食管下括约肌(LES)受体操纵性钙通道(ROCC)的调控机制。方法:制备家兔反流性食管炎模型,用磷脂酶C(PLC)特异性抑制剂(U-73122)抑制PLC、三磷酸肌醇受体拮抗剂(2-APB)阻断三磷酸肌醇受体(IP3R),比较各组LES环行肌受体操纵性钙通道阻断前后张力幅度的差异。结果:用U-73122、2-APB阻断ROCC前后各组LES环行肌张力比较:正常组、全方组、甘升组、去苦降组、去升降相因组LES环行肌钙释放相、内流相张力均高于模型组(P<0.05或P<0.01),而苦降组、升降相因组、去甘升组LES环行肌钙释放相与模型组比较有显著性差异(P<0.01),正常组与全方组LES环行肌钙释放相、内流相张力相比无显著性差异(P>0.05)。结论:旋覆代赭汤方可以通过调控ROCC、活化PLC、恢复IP3R孔道开放,使胞浆中的钙离子浓度增加而提高LES环行肌张力;旋覆代赭汤全方对反流性食管炎治疗效果最好。

钙离子通道在肺动脉高压发病机制中作用的研究进展

肺动脉高压(PAH)是一组以不受控制的肺血管重塑、持续的血管收缩和原位血栓形成为特征的临床综合征。PAH的发病机制至今仍不完全清楚,但越来越多研究表明,离子通道在PAH发病机制中具有重要作用。在离子通道中,Ca2+作为第二信使,能够参与人体内众多的生理和病理过程。电压门控钙通道、钙库操纵性钙通道、受体操纵性钙通道、牵拉激活离子通道中的Piezo1、N-甲基-D-天冬氨酸受体等钙离子通道对细胞内钙稳态至关重要,不仅可通过Ca2+浓度改变引起肺血管收缩,还可通过不同信号通路引起肺血管重塑,从而参与PAH的发生、发展。但钙离子通道在PAH中的具体作用机制仍需进一步探索。

酪氨酸激酶抑制剂对hTrp3蛋白介导的α_(1B)-AR引起的Ca^(2+)内流的影响

目的 探讨Trp3(transientreceptorpotential 3)蛋白是否参与α1B AR引起的Ca2 + 内流以及酪氨酸激酶对其调控作用。方法 采用脂质体转染 ,将hTrp3cDNA分别转染到HEK2 93细胞和已有α1B受体稳定表达的HEK2 93细胞 ;Westernblot方法检测Trp3蛋白表达情况 ;Fura 2 /AM荧光分光光度法 ,测定胞浆游离Ca2 + 浓度。结果 HEK2 93细胞上可检测到hTrp3的内源性表达 ,转染后其表达增加。α1B HEK2 93细胞转染hTrp3cDNA后 ,α1B AR引起的Ca2 +内流显著增加 (P <0 0 1) ;转染hTrp3cDNA对thapsigargin诱导的Ca2 + 内流无作用。 5～ 30 μmol·L-1genistein对转染细胞α1B AR诱发的Ca2 + 内流有抑制作用 ,最大抑制率达(75 2± 12 6 ) %。结论 Trp3cDNA转染可能主要通过非CRAC(calciumreleaseactivatedcalcium )途径增加α1B AR引起的Ca2 + 内流 。

糖尿病血管平滑肌细胞钙离子稳态调节的改变与细胞增殖

糖尿病已成为第三大威胁人类健康的疾病。目前虽然在临床上能有效控制患者血糖水平,但是糖尿病患者最终死亡于合并症。研究表明,糖尿病可加速动脉粥样硬化,粥样斑块的平滑肌细胞显示更强的增殖能力。Ca2+作为胞内重要的信使参与细胞的许多生理活动,如细胞的增殖、凋亡等等。胞内钙离子的升高主要来源于胞外钙离子的内流与胞内钙池的释放。胞内钙池主要由IP和ryanodine两大钙池系统组成,它们共同调节着胞内钙离子运动。

肺动脉平滑肌细胞上的钙离子通道研究进展

钙离子（Ca2＋）为肺动脉平滑肌细胞（PASMC）内至关重要的第二信史，其细胞内浓度的精细变化直接受到多种Ca2＋通道的调控。按照细胞内Ca2＋的来源，位于细胞膜上，调控细胞外Ca2＋进入细胞的通道称为钙内流通道，位于肌质网上调控内质网／肌质网内钙库的Ca2＋释放的通道称为钙释放通道。根据Ca2＋通道激活方式的不同，Ca2＋内流的通道主要分为电压依赖性Ca2＋通道（VDCC）和非电压操纵性Ca2＋通道（non-VDCC）。目前发现PASMC上表达的VDCC为CaVL 2L型通道，nonVDCC包括受体操纵性通道和钙库操纵性通道。PASMC上的钙释放通道主要包括三磷酸肌醇受体系统和雷诺定受体系统。这些Ca2＋通道通过对细胞内Ca2＋的精细调节，使PASMC对各种信号刺激发生反应。

木犀草素对大鼠肠系膜上动脉舒张作用的影响

目的观察木犀草素对大鼠肠系膜上动脉的舒张作用并探讨其作用机制。方法采用离体血管环实验方法,1×10^(-6.1)、1×10^(-5.6)、1×10^(-5.1)、1×10^(-4.6)、1×10^(-4.1)、1×10^(-3.6)、1×10^(-3).1mol·L^(-1)木犀草素加药组为实验组,同时设立等体积累加生理盐水组为对照组。使用Myograph动态描记系统分别记录高K+、苯肾上腺素(PE)对大鼠离体血管环的收缩作用;观察不同浓度木犀草素对高K^(+)、PE预收缩血管环的舒张作用;同时采用多种工具药干预,探讨木犀草素舒张血管作用与内皮、钾通道及钙通道的相关性。结果木犀草素对高K+和PE预收缩的内皮完整的微动脉血管最大舒张率分别为(42.75±3.13)%和(82.64±1.80)%;其对去内皮微动脉血管环的最大舒张率为(94.52±0.76)%;在灌注压力存在的条件下,其对高K+和PE预收缩的微动脉舒张外径分别为(160.0±3.2)和(280.0±2.2)μm;当用浓度为1×10-4.6和1×10^(-4).1mol·L^(-1)的木犀草素孵育微动脉环后,PE累积添加浓度为1×10-5mol·L^(-1)时,PE最大收缩率降低,分别为(92.36±6.33)%和(63.76±12.79)%;实验组的上述数据与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论木犀草素对高K+和PE引起的血管收缩有浓度依赖性的舒张作用,其舒血管的机制与受体操纵性钙通道(ROCC)和电压依赖性钙通道(VDCC)有关。

决明子提取物对大鼠主动脉扩血管作用的机制

背景决明子在动物实验和临床实践中发现有降压作用,但降压机制的研究未见报道。目的研究决明子提取物的扩血管作用并探讨其机制。方法制备SD大鼠有内皮和去内皮胸主动脉环,分别预先做氯化钾和去氧肾上腺素(PE)处理,制备量效曲线,观察决明子提取物0.1及1.0mg/L在有内皮、无内皮细胞,有钙及无钙等不同条件下,对氯化钾和PE量效曲线的影响(n=6),以及血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)引起人脐静脉内皮细胞(HUVEC)一氧化氮、总一氧化氮合酶(TNOS)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)的变化。化学法检测细胞上清液中一氧化氮含量,重氮法检测细胞匀浆中TNOS和iNOS的活性(n=7)。结果决明子提取物能使有内皮血管环氯化钾缩血管量效曲线向右下移,对去内皮血管环氯化钾量效曲线无明显影响;对去内皮和有内皮血管环PE缩血管量效曲线均有明显向右下移作用;对无钙克氏液中PE引起的血管收缩无影响。溶液Ca2+分别为1.1和2.2mmol/L时,决明子1.0及0.1mg/L都有减少PE引起血管收缩的作用。决明子还能对抗AngⅡ(10-6mol/L)引起内皮细胞培养液NO下降,iNOS增高的作用。结论决明子提取物的扩血管作用可能与抑制受体操纵性钙通道开放、调节血管内皮细胞iNOS和一氧化氮释放有关。

TRPC6介导肺动脉高压大鼠肺动脉张力和肺动脉平滑肌细胞Ca^(2+)浓度的升高

经典瞬时感受器电位通道6(transient receptor potential channel6,TRPC6)蛋白是受体操纵性Ca2+通道(ROCC)的分子基础。本文旨在研究TRPC6/ROCC在野百合碱(monocrotaline,MCT)诱发的肺动脉高压大鼠模型中的作用。Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组(CON组)和MCT组,CON组正常饲养三周,而MCT组按60mg/kg剂量一次性腹腔注射2%MCT,建立MCT诱导的慢性肺动脉高压大鼠模型。通过测定右心室收缩压(RVSP)和右心室重量指数(RVMI)、HE染色观察肺动脉血管形态,分析肺动脉结构重建。半定量RT-PCR和Western blot检测大鼠肺动脉TRPC6 mRNA和蛋白表达水平。血管张力实验中用可特异性激活ROCC、可透膜的DAG拟似物1-oleoyl-2-acetyl-sn-glycerol(OAG)检测大鼠离体肺动脉环的收缩效应。用荧光探针Fluo3-AM测定OAG诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)胞浆游离Ca2+浓度([Ca2+]i)。结果显示,与CON组相比,MCT组的RVSP、RVMI均明显增高(P<0.01);形态学观察可见肺小动脉平滑肌层明显增厚,管腔减小;TRPC6的mRNA和蛋白质表达无明显变化。在CON组,OAG几乎不引起肺动脉环收缩,而在MCT组,肺动脉环的收缩反应显著增强,差别有显著性意义(P<0.01)。相比较于CON组,MCT也可使OAG触发的PASMCs[Ca2+]i增量值显著升高(P<0.05)。上述结果提示,MCT预处理对肺动脉TRPC6mRNA和蛋白质水平的表达无显著增强效应,但可促进TRPC6/ROCC介导的PASMCsCa2+内流和肺动脉张力升高,诱导大鼠产生肺动脉高压,并进一步诱发肺血管及右心室重构。

Ca^2+在低氧性肺血管收缩中的作用

急性接触低氧环境时,肺血管收缩并分布血流到通气较好的区域,以保持肺内通气/血流比值充分匹配,这一过程称为低氧性肺血管收缩(HPV)。持续低氧状态下,肺血管可发生不可逆性重塑,表现为肺动脉中层平滑肌细胞以及外层纤维细胞增生,导致管腔狭窄,进而引发肺动脉高压(PAH),造成心室后负荷增加,严重者可以引发右心衰竭。肺动脉平滑肌细胞(PASMC)内Ca^2+浓度升高是其收缩、迁移和增殖的重要刺激因素。本文对近年来有关Ca^2+促进HPV方面的研究进行汇总,以期为临床预防低氧和治疗性PAH提供依据。