冷暴露对大鼠痛觉和感觉神经元中瞬时受体电位离子通道的影响

目的:探讨冷暴露对大鼠痛觉的影响及其对感觉神经元中瞬时受体电位(TRP)离子通道的调控机制,为阐明冷敏感性疼痛的生物学机制提供依据。方法:16只雌性SD大鼠分为对照组(n=8)和寒冷组(n=8)。对照组大鼠置于(24±2)℃环境中,寒冷组大鼠每日置于人工智能气候室内进行低温(4℃±1℃)刺激4 h,连续1周。采用Von Frey纤维丝检测2组大鼠机械缩足反射阈值(MWT),采用组织免疫荧光染色法观察2组大鼠背根神经节(DRG)组织中TRPA1、TRPM8、TRPV1和TRPV4表达水平,大鼠DRG组织中降钙素基因相关肽(CGRP)和P物质(SP)表达水平以及大鼠滑膜组织中TRPA1、TRPM8、TRPV1和TRPV4表达水平。结果:与对照组比较,寒冷组大鼠MWT明显降低(P<0.05),DRG组织中TRPA1和TRPM8表达水平明显升高(P<0.05),TRPV1表达水平明显降低(P<0.05),TRPV4表达水平差异无统计学意义(P>0.05),CGRP和SP表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,寒冷组大鼠滑膜组织中TRPA1表达水平明显升高(P<0.05),TRPM8、TRPV1和TRPV4表达水平明显降低(P<0.05)。结论:短期冷暴露可引起大鼠痛觉过敏,其机制可能与DRG和滑膜组织中TRP离子通道表达变化有关联。TRPA1感觉神经元在关节局部冷痛中起重要作用。

瞬时受体电位通道在病毒性肺炎发展过程中的关键作用

目的对病毒性肺炎感染过程中与瞬时受体电位(transient receptor potential,TRP)通道家族可能的发生机制进行综述研究。方法通过检索中国知网和PubMed数据库,收集近30年关于TRP通道家族与病毒性肺炎关系研究和机制探讨的相关报道。结果作为细胞膜上的离子受体通道,TRP通道能够调节细胞内外钙离子平衡,抑制或加速病毒入侵宿主;通过加速钙离子内流,激化细胞氧化应激反应,加速细胞自噬或凋亡;通过促进细胞形态变化,增强其对炎症介质和细胞因子的响应等。结论TRP通道是病毒感染宿主过程中的重要调控因子,其对病毒感染过程中的多个生理过程产生直接或间接的影响,进一步对TRP通道家族进行深入研究,可成为抗病毒药物研发的新靶点,为临床抗病毒性肺炎提供新思路。

瞬时受体电位香草酸受体3的功能及其激活因素研究进展

瞬时受体电位香草酸受体(TRPV)通道蛋白是瞬时受体电位通道蛋白超家族中的重要成员。TRPV通道蛋白包括6个成员,其中TRPV3作为一种热敏感通道蛋白,在皮肤等多种组织中都有表达,参与温度传感、炎症反应、毛发生长和皮肤屏障完整性、钙调节等多种生理过程。TRPV3的激活因素包括温度、一些化学配体(如2-氨基乙氧基联苯硼酸盐)、内源性激动剂(如法尼基焦磷酸)和调节因子。

瞬时受体电位香草酸亚型1在急性呼吸窘迫综合征中的作用及研究进展

急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)是由肺内和肺外病因引发的一种严重的、以顽固性低氧血症为显著特征的呼吸系统危重症,起病较急,发病率和死亡率较高。随着全球范围内的呼吸道病毒的流行和变异,ARDS的诊疗也变得更加复杂,因此临床上亟待探索有关ARDS发生发展的分子机制和有效的治疗方法。研究发现,ARDS的发病机制涉及炎症反应及氧化还原反应失衡、内皮细胞功能失调、肺泡毛细血管屏障的破坏、凝血功能异常等多个因素的相互作用。虽然基因组学、蛋白质组学等分子生物学技术的发展已为ARDS的发病机制提供了全新视角,但仍缺乏早期诊断ARDS的生物标志物和针对性治疗ARDS的有效药物。目前,越来越多的研究表明,瞬时受体电位香草酸亚型1(transient receptor potential vanilloid-1,TRPV1;即辣椒素受体)广泛分布于上呼吸道、气道平滑肌、肺泡和肺血管等部位,参与调解气道舒张和收缩、咳嗽反射、炎症和疼痛相关的炎症介质释放,以及呼吸系统对温度、化学物质和机械牵拉等刺激的感知并传递各种生物信号,在呼吸系统疾病中扮演着重要角色,且已成为肺炎、肺水肿、咳嗽、哮喘、急性肺损伤等呼吸系统疾病的研究热点。基于此,该文以脓毒症、创伤性脑损伤和呼吸道病毒引发的ARDS与TRPV1的相关性和分子机制为切入点进行综述,总结了调控TRPV1的表达对ARDS发病进程所发挥的积极作用,旨在为加强ARDS的早期诊断和有效干预措施提供参考。

瞬时受体电位信号通路在肝细胞癌中的表达及生物学功能

近年来,在全球范围内肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)的发病率和病死率不断攀升,针对HCC的治疗策略仍然不足,凸显了探讨HCC发病和进展机制的重要性。瞬时受体电位(transient receptor potential, TRP)通路是重要的非选择性阳离子通路,与炎性反应、感觉传导等方面密切相关。目前,多项研究表明,TRP通路也参与了HCC的发生和发展,诱导HCC的侵袭和迁移。然而,TRP通路在HCC中的整体潜在机制和可能的信号转导通路仍不清楚。因此,本文讨论了TRP通路在HCC中的异常表达,并就TRP通路参与肝脏慢性炎症-纤维化进展、HCC细胞增殖、迁移、凋亡以及HCC干细胞生成等HCC形成与进展的关键生物事件进行综述,展望其在HCC治疗中的应用前景。旨在更好地理解TRP通路在HCC中的意义,有助于发现新的治疗靶点和有效的药物,并为未来临床治疗开拓新局面。

基于PiggyBac转座子优化稳定表达细胞系的新型瞬时受体电位M2通道抑制剂筛选

目的:使用PiggyBac(PB)转座系统建立稳定表达瞬时受体电位M2(TRPM2)通道的人胚胎肾细胞HEK293T,并进行TRPM2通道抑制剂筛选,为治疗脑缺血等疾病寻找潜在的药物。方法:根据PB转座原理,构建pPB-hTRPM2真核表达载体。将重组质粒和辅助质粒共同转染至HEK293T细胞中,利用系统携带的荧光与膜片钳鉴定TRPM2基因表达,通过Z'因子评估细胞模型是否适用于钙成像法的高通量筛选。利用钙成像法和膜片钳对11个先导化合物分子进行初步活性评价,测定化合物分子对TRPM2通道的抑制活性。利用氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)损伤模型和细胞计数试剂盒8(CCK-8)方法验证筛选得到的化合物分子对损伤细胞的保护作用。利用流式细胞术检测细胞活性氧水平。利用小鼠短暂性大脑中动脉栓塞(tMCAO)模型评价化合物的神经保护作用。结果:成功构建pPB-hTRPM2真核表达载体,构建出可高效表达TRPM2基因的HEK293T细胞系,并同时表达增强型绿色荧光蛋白(EGFP)。在筛选获得的嘌呤霉素抗性细胞中,所有细胞荧光明亮可见,诱导后细胞表现出经典的TRPM2通道电流特征,TRPM2通道电流值与瞬时转染对照组差异无统计学意义(P>0.05)。该筛选系统进行钙成像实验的Z'因子为0.5416,表明其适用于高通量筛选。通过钙成像法结合膜片钳筛选出化合物6,其具有显著的TRPM2通道抑制作用,且1.0μmol/L的化合物6能够显著提高OGD/R后SH-SY5Y细胞的存活率(P<0.05),降低活性氧水平(P<0.05),0.3、1.0 mg/kg的化合物6能降低tMCAO小鼠脑梗死体积百分比(均P<0.05)。结论:利用PiggyBac基因编辑技术成功构建了TRPM2基因稳定表达细胞系,利用钙成像法和膜片钳在候选化合物中成功筛选出一个高亲和力的新的TRPM2通道抑制剂。该抑制剂可以通过降低细胞活性氧水平缓解OGD/R后细胞损伤,并对小鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用。

瞬时受体电位通道5对间歇性低氧致心肌焦亡的影响

目的探讨瞬时受体电位通道5(TRPC5)对间歇性低氧致心肌焦亡的影响。方法TRPC5^(-/-)大鼠及SD大鼠各12只,两种大鼠分别随机分为慢性间歇性低氧组(CIH组)和常氧组(Control组),即WT-Control组、WT-CIH组、TRPC5^(-/-)-Control组、TRPC5^(-/-)-CIH组,每组6只。通过Masson染色观察大鼠心肌纤维化情况,ELISA检测血清炎症因子水平,Western blot检测TRPC5及焦亡相关蛋白相对表达水平。结果Masson染色显示,TRPC5^(-/-)-CIH组胶原容积分数高于TRPC5^(-/-)-Control组,低于WT-CIH组。ELISA结果显示,TRPC5^(-/-)-CIH组血清IL-1、IL-6、TGF-β水平高于TRPC5^(-/-)-Control组,低于WT-CIH组。Western Blot结果显示,TRPC5^(-/-)-CIH组焦亡相关蛋白Caspase-1、NLRP3、GSDMD、GSDMD-N相对表达量高于TRPC5^(-/-)-Control组、低于WT-CIH组。结论TRPC5缺乏减轻间歇性低氧导致的心肌焦亡,并改善心肌纤维化。

靶向瞬时受体电位香草酸亚型1离子通道的Nplus-RhTx多肽抑制剂理性设计及功能验证

目的:获得靶向瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)通道的多肽抑制剂。方法:基于已有的靶向TRPV1通道的多肽激动剂红头蜈蚣毒素(RhTx)进行理性设计,在其氨基末端增加带正电荷的氨基酸,并在细胞上使用膜片钳电生理验证设计的多肽对TRPV1通道的抑制作用。结果:理性设计了8条Nplus-RhTx多肽,在膜片钳电生理记录中发现其中4条可以抑制TRPV1的辣椒素激活,4条Nplus-RhTx多肽的半数有效抑制浓度分别为(188.3±4.7)、(193.6±18.0)、(282.8±11.9)和(299.5±6.4)µmol/L。结论:通过对RhTx多肽的氨基端进行理性设计改变其性质,可获得靶向TRPV1的多肽抑制剂。

ST段抬高型心肌梗死病人瞬时受体电位通道1、肌肉生长抑制素表达与心功能、预后的关系

目的:探讨ST段抬高型心肌梗死(STEMI)病人血清中瞬时受体电位通道1(TRPC1)、肌肉生长抑制素(MSTN)表达与心功能、预后的关系。方法:选取2019年3月—2021年3月安阳市人民医院收治的急性STEMI病人110例作为研究组,另选取同期体检健康者90名为对照组。收集研究对象临床资料,检测研究对象血清TRPC1、MSTN水平;采用Killip分级方法评估病人的心功能;采用Spearman相关性分析法分析TRPC1、MSTN与STEMI病人Killip分级的相关性。根据预后是否发生主要不良心脏事件(MACE)将STEMI病人分为预后良好组(83例)和预后不良组(27例);受试者工作特征(ROC)曲线分析血清TRPC1、MSTN水平对STEMI病人预后的预测价值。结果:STEMI病人总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、N末端B型钠尿肽前体(NT-proBNP)及血清TRPC1、MSTN水平高于对照组(P<0.001),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平低于对照组(P<0.001)。不同Killip分级的STEMI病人血清TRPC1、MSTN水平比较差异有统计学意义(P<0.001),Killip分级越高,血清TRPC1、MSTN水平越高。STEMI病人血清TRPC1、MSTN水平与Killip分级呈正相关(P<0.05);预后不良组血清TRPC1、MSTN水平明显高于预后良好组(P<0.001);血清TRPC1、MSTN单独及联合预测STEMI病人预后的曲线下面积(AUC)分别为0.763,0.891,0.942,敏感度分别为77.27%、86.36%和95.45%,特异度分别为74.36%、75.64%和88.46%;二者联合预测优于TRPC1、MSTN各自单独预测(P<0.05)。结论:STEMI病人血清TRPC1、MSTN水平明显升高,与病人心功能密切相关,且二者联合检测有利于早期评估病人MACE发生情况。

瞬时受体电位家族离子通道与四气五味(辛味)的关系研究

温度型哺乳动物瞬时受体电位(Transient Receptor Potentials,TRPs)家族离子通道相关受体在人体内广泛分布,参与机体的基础代谢调节,是心血管系统疾病、神经系统疾病及肿瘤等的潜在治疗靶点。现描述不同TRPs家族离子通道感受温度的变化和生理功能;通过比较中药药性中的四气理论、五味理论(辛味)和不同TRPs家族通道对温度敏感差异的特性,分析四气理论中寒、凉、温、热和辛味药性与TRPs家族之间生理功能的关系,提出中药药性与现代生物医学研究结合的可能性。

瞬时受体电位通道在治疗重症患者吞咽障碍中研究进展

重症监护室获得性吞咽障碍(intensive care unit-acquired swallowing disorder,ICU-ASD)是指患者拔管后,食物自入口到进入胃内的过程中出现的任何吞咽障碍行为,发生率为3%~62%[1]。ICU-ASD与营养不良、代谢紊乱、脱水等并发症相关,是导致获得性肺炎的重要原因之一。

瞬时受体电位阳离子通道6作为疾病治疗靶点研究进展

瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)在肾、心脏和肺等多个器官均有表达,是构成细胞膜钙库操纵性通道的分子基础,在细胞信号转导中起着重要作用。其基因突变或过量表达可引起细胞内钙离子信号通路异常,使得大量钙离子内流,导致机体各种病理生理过程的变化。通过特异性TRPC6通道抑制剂和RNA干扰技术干预其在相关疾病中的过量表达,可以改善或缓解病情,提示TRPC6可能作为疾病治疗的新靶点。本文就近年来关于TRPC6作为疾病治疗靶点的研究进展进行综述。

5-羟色胺对肺动脉平滑肌细胞瞬时受体电位通道/活化T细胞核因子蛋白表达的影响

目的观察5-羟色胺(5-HT)对肺动脉平滑肌细胞瞬时2受体电位通道(TRPC)/活化T细胞核因子(NFAT)蛋白表达的影响。方法取肺动脉平滑肌细胞,分别采用不同浓度(0μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L、33μmol/L、100μmol/L)5-HT、不同浓度(0μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、3.3μmol/L、10μmol/L)的5-HT2A受体拮抗剂酮色林+10μmol/L5-HT和不同浓度(0μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L、33μmol/L、100μmol/L)的TRPC抑制剂SKF96365+10μmol/L5-HT进行处理。24h后,检测各组细胞中TRPC1、TRPC6和NFATc3的蛋白表达水平。结果与0μmol/L5-HT相比,10μmol/L、33μmol/L、100μmol/L5-HT干预后细胞中TRPC1、TRPC6、NFATc3蛋白表达水平均升高(均P<0.05)。与0μmol/L酮色林+10μmol/L5-HT比较,1μmol/L、3.3μmol/L、10μmol/L酮色林+10μmol/L5-HT干预后细胞中TRPC6及NFATc3蛋白表达水平均降低(均P<0.05)。与0μmol/LSKF96365+10μmol/L5-HT比较,10μmol/L、33μmol/L、100μmol/LSKF96365+10μmol/L5-HT干预后TRPC6、NFATc3蛋白表达水平均降低(均P<0.05)。结论10~100μmol/L的5-HT均可上调肺动脉平滑肌细胞TRPC1、TRPC6和NFATc3蛋白的表达水平,且应用一定浓度的5-HT2A受体拮抗剂酮色林或TRPC抑制剂SKF96365均可抑制5-HT对其中TRPC6和NFATc3蛋白的表达。

瞬时受体电位通道蛋白A1和V1在正常小鼠耳蜗中的定位表达

目的研究瞬时受体电位通道蛋白A1(TRPA1)和V1(TRPV1)在正常小鼠耳蜗中的定位与表达。方法选择12只健康成年BALB/c小鼠,应用免疫荧光染色方法和蛋白质印迹技术检测TRPA1和TRPV1在耳蜗中的定位与表达,同时结合电生理指标听脑干反应(auditory brainstem response,ABR)测试小鼠的听力。结果 TRPA1和TRPV1在小鼠耳蜗螺旋器的内、外毛细胞、螺旋神经节细胞和血管纹边缘细胞等都有表达,且主要定位于细胞膜;蛋白质印迹检测结果亦显示小鼠耳蜗中有TRPA1和TRPV1的表达。结论 TRPA1和TRPV1在正常BALB/c小鼠耳蜗的多种细胞中均有表达,这为深入研究二者在内耳听觉生理和病理生理中的作用奠定基础。

瞬时受体电位香草酸亚型1通道影响支气管哮喘大鼠气管平滑肌细胞增殖和炎症的研究

目的探讨瞬时受体电位香草酸亚型1（TRPV1）通道对支气管哮喘大鼠气管平滑肌细胞增殖和炎症的影响。方法 2013年6月—2014年6月,选取5～6周龄清洁级健康雄性SD大鼠60只,采用随机数字表法分为：正常对照组、支气管哮喘组、支气管哮喘＋辣椒素（CAP）组、支气管哮喘＋辣椒卓平（CPZ）组,每组15只。支气管哮喘组、支气管哮喘＋CAP组、支气管哮喘＋CPZ组大鼠制作支气管哮喘模型,支气管哮喘＋CAP组大鼠给予含有0.01%CAP的饲料喂养,支气管哮喘＋CPZ组大鼠给予含有0.01%CPZ的饲料喂养。病理学检查显微镜下找到完整肺内支气管横断面,计算管壁面积（WA）/管腔内周长（Pi）、支气管平滑肌面积（S）/Pi、支气管平滑肌细胞核数（N）/Pi,采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应（RT-q PCR）和Western blotting法检测气管平滑肌组织TRPV1、增殖细胞核抗原（PCNA）mRNA及其蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测大鼠气管平滑肌组织白介素（IL）-4、IL-5、IL-13表达水平。结果支气管哮喘组和支气管哮喘＋CAP组大鼠气管WA/Pi、S/Pi、N/Pi高于对照组（P〈0.05）;支气管哮喘＋CAP组大鼠气管WA/Pi、S/Pi、N/Pi高于支气管哮喘组（P〈0.05）;支气管哮喘＋CPZ组大鼠气管WA/Pi、S/Pi、N/Pi低于支气管哮喘＋CAP组（P〈0.05）。支气管哮喘组和支气管哮喘＋CAP组大鼠气管平滑肌组织TRPV1、PCNA mRNA及其蛋白、IL-4、IL-5、IL-13表达水平高于对照组（P〈0.05）;支气管哮喘＋CAP组大鼠气管平滑肌组织TRPV1、PCNA mRNA及其蛋白、IL-4、IL-5、IL-13表达水平高于支气管哮喘组（P〈0.05）;支气管哮喘＋CPZ组大鼠气管平滑肌组织TRPV1、PCNA mRNA及其蛋白、IL-4、IL-5、IL-13表达水平低于支气管哮喘和支气管哮喘＋CAP组（P〈0.05）。结论 TRPV1、PCNA mRNA及其蛋白、IL-4、IL-5、IL-13在支气管哮喘大鼠气管平滑肌组织中高表达,阻断TRPV1通道后,气管平滑肌组织增生和炎症均明显减轻,提示TRPV1通道可能在支气管哮喘大鼠气管平滑肌细胞增殖和炎症形成中发挥重要作用。

瞬时受体电位锚蛋白1离子通道与咳嗽关系的研究概述

瞬时受体电位锚蛋白1(TRPA1)离子通道是温度感受器,在人体内低于17℃可被激活,但其激活阈值与物种相关。异硫氰酸烯丙酯、肉桂醛、香烟浓集物等激动剂可以通过调节TRPA1离子通道进而引发咳嗽,并且G蛋白偶联受体在其激活过程中起着重要作用。辛温类中药方剂应用于冷过敏咳嗽疗效确切,推测其治疗机制可能是通过抑制TRPA1通道开放实现的。目前针对咳嗽的TRPA1拮抗剂主要是HC-030031和GRC-17536,辛温类中药作为止咳药的开发或可一定程度弥补西医治疗的不足,但仍需深入研究。

当归补血汤对尿毒症大鼠心肌纤维化组织瞬时受体电位M7通道表达及胶原蛋白合成的影响

目的观察当归补血汤(DBD)对尿毒症大鼠心肌组织瞬时受体电位M7通道(TRPM7)表达及胶原蛋白合成的影响,探讨DBD抗尿毒症心肌纤维化(UMF)作用机制。方法采用腺嘌呤核苷酸灌胃制作尿毒症模型,雄性SD大鼠32只,随机分为对照组、模型组、依那普利组及DBD组。依那普利和DBD组自造模第1天开始分别以依那普利10 mg/(kg·d)或DBD 6 g/(kg·d)灌胃;直至第21天,模型组和对照组以等体积的生理盐水灌胃。造模后第21天处死大鼠,留取血液标本检测血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)和心肌肌钙蛋白Ⅰ(c TnⅠ)。留取心肌标本,行苏木精-伊红染色(HE)和Masson染色,观察各组大鼠心肌组织病理改变。采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测心肌组织TRPM7 m RNA和转化生长因子-β1(TGF-β1)m RNA的表达。应用Western blot检测心肌组织TRPM7、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和Ⅲ型胶原蛋白(ColⅢ)的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠心肌病理评分增加,心肌间质胶原蛋白相对面积增大,血清BUN、Scr和(c TnⅠ)水平提高,TRPM7 m RNA和TGF-β1m RNA的表达增强,心肌组织TRPM7、ColⅠ和ColⅢ的表达增强。与模型组比较,经依那普利和DBD治疗后,心肌组织病理评分和心肌间质胶原蛋白相对面积缩小,血清BUN、Scr和c TnⅠ水平下降,TRPM7 m RNA和TGF-β1m RNA的表达减弱,心肌组织TRPM7、ColⅠ和ColⅢ的表达减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。与依那普利组比较,DBD组能明显降低TGF-β1m RNA的表达。结论 DBD可减轻尿毒症大鼠心肌纤维化程度,这一作用与抑制心肌组织TRPM7表达,从而抑制胶原蛋白合成有关。

瞬时受体电位香草酸亚型1激活通过抑制线粒体通透性转换孔开放保护急性心肌梗死小鼠的心肌细胞抗凋亡

瞬时受体电位香草酸亚型1(TRPV1)在心肌缺血激活后可传导心绞痛信号,释放神经肽,减轻心肌梗死后的心肌细胞凋亡。目前,TRPV1激活抑制心肌梗死后细胞凋亡的具体机制尚不清楚。线粒体通透性转换孔(MPTP)的开放与心肌细胞缺血再灌注损伤密切相关,抑制其开放可保护心肌缺血后的心肌细胞抗凋亡。本研究证明,TRPV1激活通过抑制MPTP开放而减少心肌细胞凋亡。首先,本研究利用左冠状动脉前降支结扎术建立了TRPV1基因敲除(TRPV1-/-)和野生型(WT)小鼠心肌梗死模型,辅以环孢素A(CSA)预处理抑制MPTP开放,比较观察TRPV1、MPTP在心肌梗死中的作用。心肌组织切片氯化三苯基四氮唑(TTC)染色显示,心肌缺血24 h,TRPV1-/-小鼠的心肌梗死面积明显大于WT型小鼠。而经CSA预处理的TRPV1-/-小鼠比TRPV1-/-小鼠梗死面积明显减小。TUNEL检测心肌细胞凋亡指数(AI)揭示,WT型心肌梗死小鼠的AI明显低于TRPV1-/-心肌梗死小鼠,而CSA预处理明显降低TRPV1-/-小鼠心肌细胞的AI。Western印迹检测胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶9、Bcl-2、Bax、p53和细胞色素C(Cyt-C)水平。结果证明,TRPV1的激活可抑制MPTP的开放,减少线粒体Cyt-C的外溢,降低胱天蛋白酶9和胱天蛋白酶3的表达。GENMEN光度法检测MPTP开放实验显示,激活的TRPV1明显抑制了MPTP的开放。本研究证实,急性心肌梗死后的TRPV1激活可能通过抑制MPTP开放而抵抗心肌细胞凋亡,对心肌起保护作用。

大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后纹状体和海马区瞬时受体电位通道蛋白4的表达增加

实验在大鼠大脑中动脉阻塞性脑缺血(middle cerebral arterv occlusion,MCAO)模型上采用Western Blot方法检测脑缺血再灌注不同时程(6h、12h、1d、3d)脑组织中瞬时受体电位通道蛋白4(transient receptor potential channel4,TRPC4)的表达情况,并与正常对照组相比,结果显示,12 h、1 d、3 d组纹状体、海马区域TRPC4含量明显高于正常组(P<0.05)。采用免疫组织化学定位检测,显示TRPC4主要表达在神经元细胞膜上;免疫组化阳性细胞统计分析显示,在不同时程缺血组中纹状体、海马区域TRPC4的表达与正常组相比有所增加,其中纹状体、海马区缺血再灌注1 d、3 d组缺血同侧1RPC4阳性细胞升高显著(P<0.05)。脑缺血再灌注损伤后TRPC4相对含量增加,提示TRPC4可能参与脑缺血引起的急性和迟发性神经元损伤。

瞬时受体电位通道1在大鼠脑缺血后钙超载致神经元损伤中的作用机制

目的研究大鼠脑缺血后瞬时受体电位通道1(transient receptor potential channel 1,TRPC1)在神经元钙超载中的作用,探讨TRPC1参与脑缺血后神经元凋亡及突触功能障碍的机制。方法120只6周龄SD大鼠随机分为正常对照组、全脑缺血模型组、SKF96365干预模型组、DMSO干预对照组。四血管阻塞法建立大鼠全脑缺血模型,全脑缺血前立体定向注射SKF96365建立干预模型组,注射DMSO建立干预对照模型组。在缺血后的1,3,5,7,10 d收集大鼠双侧海马标本,进行形态学染色,用电镜观察细胞超微结构,Fura-2AM检测胞内Ca 2+浓度,Western blot检测TRPC1蛋白的动态表达,TUNEL检测海马神经元凋亡情况,用Morris水迷宫评估大鼠海马记忆功能,通过体视学分析计算海马CA1区中存活神经元的数量。结果形态学研究发现,全脑缺血后神经元肿胀,髓鞘结构破坏,片层结构消失。与正常组相比,全脑缺血模型组海马TRPC1蛋白表达持续升高,在3 d达到高峰,同时海马神经元胞内Ca 2+浓度及TUNEL阳性细胞数达到峰值(P<0.05)。给予TRPC1通道阻断剂SKF96365后,与全脑缺血模型组相比,干预模型组海马TRPC1的蛋白表达被抑制,海马神经元钙内流减低,TUNEL阳性细胞数显著降低,大鼠神经行为学及记忆功能评分改善(P<0.05)。结论TRPC1与脑缺血后钙超载导致的迟发性神经元凋亡密切相关,抑制TRPC1产生的钙内流可缓解海马神经元细胞凋亡,改善海马的空间记忆功能。