麻荆止咳颗粒对咳嗽变异性哮喘模型豚鼠肺组织瞬时受体电位通道香草醛类受体1型表达的影响

目的:研究麻荆止咳颗粒对咳嗽变异性哮喘(Cough Variant Asthma,CVA)豚鼠瞬时受体电位通道香草醛类受体1型表达及肺组织病理形态的影响。方法:将豚鼠随机分为空白组、模型组、地塞米松组及中药组。豚鼠通过卵蛋白致敏制备CVA大鼠模型;药物干预10 d,观察各组大鼠一般状态、咳嗽次数;通过苏木素-伊红染色观察肺及支气管组织病理形态变化;用免疫组化法观察豚鼠肺组织瞬时受体电位通道香草醛类受体1型蛋白表达情况;以定量聚合酶链反应检测各组豚鼠瞬时受体电位通道香草醛类信使核糖核酸的表达情况。结果:与模型组比较,中药组豚鼠经麻荆止咳颗粒干预后咳嗽次数明显减少(P<0.05),肺及支气管组织病理变化明显减轻,且瞬时受体电位通道香草醛类受体1型蛋白表达明显降低(P<0.05),瞬时受体电位通道香草醛类信使核糖核酸表达明显降低(P<0.01)。结论:麻荆止咳颗粒可通过抑制瞬时受体电位通道香草醛类受体1型的表达降低气道反应性,发挥对CVA模型豚鼠的治疗作用。

ATP敏感钾通道参与大鼠前脂肪细胞增殖和分化(英文)

为了探讨ATP敏感钾通道在前脂肪细胞增殖分化中作用,本实验用逆转录实时定量PCR方法检测大鼠前脂肪细胞和诱导5 d获得的脂肪细胞中该通道磺脲类受体2(sulphonylurea receptor 2,SUR2)mRNA表达,探讨该通道阻滞剂格列本脲和激动剂二氮嗪对前脂肪细胞中SUR2 mRNA表达的影响;MTT检测前脂肪细胞增殖;流式细胞仪检测细胞周期;油红O染色法检测细胞内脂质含量;Image-Pro Plus 5．0软件测量细胞直径;逆转录PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPAR-γ)mRNA表达。结果显示:前脂肪细胞及诱导5 d获得的脂肪细胞均有SUR2 mRNA表达,且后者明显高于前者;格列本脲抑制前脂肪细胞SUR2 mRNA表达,剂量依赖性地促进前脂肪细胞增殖,增加G2／M +S期细胞百分比,增加细胞脂质含量,使脂肪细胞直径增大,增加PPAR-γmRNA的表达;二氮嗪在这些方面的作用与格列本脲相反。以上结果提示,ATP敏感钾通道在前脂肪细胞增殖和分化中可能起调节作用,PPAR-γ可能参与这些作用。

激活瞬时受体电位香草醛亚家族1抑制RhoA/Rho激酶改善高脂介导的血管舒张功能异常

目的探讨膳食辣椒素通过激活瞬时受体电位香草醛亚家族1(TRPV1)对高脂饮食介导的血管功能障碍的作用及机制。方法 10周龄雄性C57BL/6 J小鼠,分别给予普通饮食(普通饲料)、普通饮食+辣椒素(普食+0.01%辣椒素)、高脂饮食(高脂饲料)、高脂饮食+辣椒素(高脂饲料+0.01%辣椒素)干预,20周后观察鼠尾血压、离体主动脉环血管收缩和舒张功能、血管电压依赖型钾通道Kv1.4和RhoA/Rho激酶蛋白表达。结果高脂饮食组内皮依赖和非内皮依赖的舒张反应分别为(26±12)%和(18.9±13.0)%,均明显低于普通饮食组的100%和100%(P均<0.01)。高脂饮食+辣椒素组的内皮依赖和非内皮依赖的舒张反应分别为(69±15)%和(46.5±6.0)%,均明显高于高脂饮食组(P均<0.05),但仍明显低于普通饮食组(P<0.05,P<0.01)。高脂饮食组大鼠的血压明显高于普通饮食组[(135±7)mmHg比(116±5)mmHg,P<0.01]。W estern blot检测结果显示,普通饮食+辣椒素组大鼠的Kv1.4蛋白表达明显高于普通饮食组(P<0.05),高脂饮食+辣椒素组大鼠的Kv1.4蛋白表达明显高于高脂饮食组(P<0.05);高脂饮食组大鼠RhoA/Rho激酶蛋白的表达明显高于普通饮食组(P<0.05),普通饮食+辣椒素组明显低于普通饮食组(P<0.05),高脂饮食+辣椒素组明显低于高脂饮食组(P<0.05)。结论膳食辣椒素能够改善高脂介导的血管舒张功能异常,可能与其激活TRPV1通道,从而上调钾通道和抑制RhoA/Rho激酶信号通路相关。

水稻CSC11介导干热风/干旱诱导的钙信号调控雄蕊发育

【目的】水稻花期偶遇干热风/干旱,导致脆弱的生殖细胞快速失水,极大地降低产量,这一过程中钙离子作为通用的第二信使传导了干旱或其他逆境信号,但背后的分子机制尚不清楚。分析钙离子透过性胁迫反应阳离子通道家族(calcium-permeable stress-responsive cation channels,CSCs)基因的生理和分子功能,为研究作物干热风的感应机制提供新的理论基础和思路。【方法】采用电生理学和遗传学方法,利用双电极电压钳技术在水稻中鉴定得到一个具有典型特征的受体类-钙通道蛋白,名为OsCSC11,对其蛋白序列进行生物信息学和进化关系分析。运用qRT-PCR和GUS报告基因活性分析确认OsCSC11的表达模式,在拟南芥原生质体细胞和洋葱表皮细胞中瞬时表达OsCSC11-GFP融合蛋白,验证OsCSC11的亚细胞定位;同时利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得OsCSC11的突变体,并通过细胞学等手段分析突变体表型和相关生理功能。【结果】蛋白序列比对发现,OsCSC11具有CSCs家族成员典型的保守结构域DUF221,但与其他成员序列差异大,存在不同于其他成员的特异结构域(motif)属于独立的亚家族。OsCSC11主要在水稻的花药和叶片中表达,进一步分析发现全长OsCSC11处于静息状态,可被高渗透溶液激活;但是删除N端156氨基酸(TM1-3)之后的OsCSC11^(ΔTM1-3)具有组成型的通道活性,特异选择钙、镁二价阳离子;推测TM1-3是这类通道的受体结构域,感应干热风胁迫,而OsCSC11^(ΔTM1-3)区域负责钙信号产生。OsCSC11和OsCSC11^(ΔTM1-3)均定位在细胞质膜上,与其干热风的受体功能相适应。与野生型相比,功能缺失突变体oscsc11-1和oscsc11-2的雄蕊较小、花药表面蹙皱,整体多呈弯曲状态,花粉含水量较低,败育率高达60%—70%。【结论】OsCSC11是水稻感应短期干热风/干旱刺激、介导钙离子内流,调控花药水分状态和花粉发育的受体类钙通道,可能参与了水稻雄蕊应对干热风的原初感应过程。

脑水肿治疗新见解

缺血性脑卒中、脑外伤、脑血管破裂及脑瘤患者常有脑水肿。虽然脑水肿的原因多种多样,但水肿的病理生理过程却有相似的分子机制。坚硬的颅骨固定了颅腔容积,脑水肿引起的继发性神经元损伤的后果常常十分棘手。随着细胞内、外容积的变化,脑水肿必然影响局部或全脑的血液循环和代谢,甚至产生致命的脑组织挤压。脑水肿常规的治疗不外乎皮质醇、利尿剂、脑代谢抑制剂和渗透疗法,而渗透疗法仍然是最有效的治疗方法之一,且在临床广泛应用。新近发现Na+-K+-2Cl-转运体1和磺脲类受体1调控、三磷腺苷敏感的非选择性阳离子通道(如磺脲类受体1-瞬时受体电位M4通道)是脑水肿治疗的新靶点。目前已经证明这2个与离子转运有关的蛋白质在损伤引起的脑水肿中起着关键作用,特异性地抑制它们可明显减缓脑水肿的发生。另一类有应用前景的治疗脑水肿药物是血管升压素受体拮抗剂。很多导致脑水肿的神经疾病常出现正常容量性低钠血症,血管升压素V1A/V2受体拮抗剂考尼伐坦有促进水排出,保留电解质的利水作用,因此,可用于治疗伴有低钠血症的脑水肿。

辣椒素抑制血管紧张素Ⅱ介导的血管收缩

目的观察长期应用辣椒素作为瞬时受体电位通道香草醛类受体1型(TRPV1)激动剂对C57BL/6J小鼠胸主动脉收缩功能的作用。方法2月龄的雄性C57BL/6J小鼠,完全随机分为:普通饲料组(普食组,n=12)和普通饲料+辣椒素组(辣椒素组,n=12)。干预开始及结束时测鼠尾动脉收缩压;喂养6月后,颈动脉插管测颈动脉血压及心率。取小鼠胸主动脉,利用体外血管环张力测定技术,检测其对氯化钾(KCl)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、苯肾上腺素(PE)的收缩反应。采血测血浆肾素、AngⅡ、醛固酮浓度。培养C57BL/6J小鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMC),辣椒素(1μmol/L)孵育24 h后,应用Western-blot法检测VSMC的AngⅡ1型受体(AT1R)的表达,应用比率荧光成像系统测定AngⅡ(1μmol)对细胞内游离钙浓度的影响。结果6月后,两组间鼠尾动脉收缩压和颈动脉平均动脉压及心率无显著性差异。两组间胸主动脉对PE诱导的收缩反应无显著性差异;辣椒素组胸主动脉对AngⅡ诱导的收缩反应[(37.5±1.6)%]明显低于普食组[(59.8±1.4)%,P<0.05]。两组间血浆肾素、AngⅡ、醛固酮浓度无显著差异。培养的VSMC,辣椒素干预后AT1R蛋白表达仅为普食组的(62.4±16.6)%(P<0.05)。辣椒素组AngⅡ诱导的细胞内游离钙浓度(0.91±0.12)增加低于对照组(1.37±0.35,P<0.05)。结论应用辣椒素激活TRPV1受体能有效抑制动脉血管对AngⅡ的收缩反应,其机制与下调AT1R的表达,降低AngⅡ诱导的细胞内游离钙增加有关。