竞争性受体结合试验检测农药拟雌激素样作用

[目的]应用竞争性受体结合试验检测常用六种农药的雌激素样活性。[方法]选用乐果、乙酰甲胺磷、久效磷、马拉硫磷、对硫磷和对氧磷6种有机磷农药进行大鼠子宫雌激素受体竞争性结合试验。[结果]应用多点饱和分析建立Scatchard图 ,采用10nmol/L3H_E2 作单点饱和分析 ,结果显示这6种有机磷农药的结合率均未下降到50 %。

芦丁拮抗血小板活化因子与受体结合的作用

目的 观察芦丁对血小板活化因子(PAF)与受体结合的拮抗作用。方法 以放射配基结合试验观察[3H]PAF与家兔血小板受体特异性结合的作用;体外以分光光度法测定PAF介导血小板黏附的强度;以Fura- 2荧光分光光度法测定PAF介导的兔多形核白细胞(PMNs)内钙离子浓度的升高。结果 芦丁可浓度依赖地抑制1、2、4 nm ol/L [3H]PAF与血小板受体的特异性结合,其IC50 分别为7.3、8.7、17.2 mm ol/L ;芦丁可明显抑制PAF介导的血小板黏附,IC50 为1.5 1mm ol/L;芦丁浓度为6 8.2～5 4 6 μm ol/L 时可浓度依赖地抑制PAF介导的PMNs内游离钙浓度的升高。结论 芦丁具有抗PAF作用,为一种新的PAF受体拮抗剂。

左旋咪唑与咪唑啉2受体的放射性受体配基实验观察

目的:观察左旋咪唑(LMS)在体外实验中能否与正常大鼠脑组织咪唑啉2受体(I_2R)结合;LMS在体内长期处理能否引起大鼠脑内I_2R的变化。方法:通过正常大鼠脑组织I_2R与放射性配基的竞争结合实验,测定其平衡解离常数(K_i)及50%的放射性配基结合被取代所需的竞争剂浓度(IC_(50)),观察LMS与I_2R在体外的结合能力。通过LMS长期体内处理大鼠脑组织I_2R饱和结合实验,测定LMS长期处理大鼠和对照组大鼠脑组织I_2R密度和亲和力的变化。结果:体外实验发现,LMS能与[~3H]-2BFI竞争结合大鼠脑组织的I_2R,且具有浓度依赖性。IC_(50)值为1.292×10^(-5)mol·L^(-1),K_i值为9.796×10^(-6)mol·L^(-1)。大鼠体内长期LMS处理,其脑组织I_2R密度明显上调(P<0.05),而亲和力两组相比差异无统计学意义。结论:左旋咪唑在体外能与脑组织I_2R直接结合,可能是I_2R的配基。左旋咪唑长期作用于体内能引起脑组织I_2R密度的上调。

EAE大鼠脑组织咪唑受体变化的研究

目的观察炎性脱髓鞘脑病动物模型(EAE)大鼠脑组织咪唑啉2受体(12R)的变化,探讨12R是否参与了炎性脱髓鞘白质脑病的病理过程。方法将大鼠分为EAE模型组及CFA对照组,EAE模型组通过免疫当天予四足垫皮下注射豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)-CFA的方式免疫大鼠,后予腹腔注射NS0.4mL每12h一次,于发病高峰期处死。CFA对照组大鼠通过免疫当天予四足垫皮下注射NS-CFA的方式免疫大鼠,后予腹腔注射NS0.4mL每12h1次,连续19d;所有大鼠均予免疫0,48h腹股沟皮下注射百日咳菌苗0.1mL(1×109菌体)。两组大鼠脑组织12R进行饱和结合试验,检测其密度和亲和力变化。结果 CFA对照组大鼠没有发病,EAE组6只大鼠,发病4只。CFA对照组脑组织12R的Kd和Bmax值分别是3.367±0.94nM和162±22.19fmol·mg-1蛋白。EAE组大鼠脑组织12R的Kd和Bmax值分别是5.416±1.153nM和263.0±31.99fmol·mg-1蛋白;与CFA对照组相比,其受体密度明显上调(n=6,P<0.05),而亲和力明显下降(n=6,P<0.01)。结论炎性脱髓鞘脑病模型EAE大鼠脑内12R受体密度上调,亲和力降低。

羟基红花黄色素A对血小板活化因子的拮抗作用

目的 观察羟基红花黄色素A(HSYA)对血小板活化因子 (PAF)的拮抗作用。方法 以放射受体结合试验观察HSYA抑制 [3 H]PAF与家兔洗涤血小板 (WRP)特异性结合的作用 ,以比浊法观察HSYA抑制PAF介导的WRP及兔多型核白细胞 (PMNs)聚集的作用。结果 HSYA可浓度依赖地抑制 1 ,2及 4nmol·L-1 [3 H]PAF与WRP受体的结合 ;HSYA抑制PAF介导的WRP及兔PMNs聚集 ,均具明显的量效关系 ,其IC50 分别为 0 99及 0 70mmol·L-1 。

杨梅素对血小板活化因子拮抗的作用

目的 研究杨梅素对血小板活化因子 (PAF)的拮抗作用。方法 以放射配体结合试验观察 [3H]PAF与家兔血小板受体特异性结合的作用 ;以分光光度法测定PAF诱发血小板粘附的强度 ;以Fura 2荧光分光光度法测定兔多形核白细胞 (PMNs)内钙离子浓度。结果 杨梅素可浓度依赖地抑制 [3H]PAF与血小板受体的特异性结合 ,其IC50分别为 34 8,85 7和 118 6 μmol·L- 1 ;该药可明显抑制PAF诱发的血小板粘附及PMNs内游离钙浓度的升高 ,且呈明显的量效关系 ,其抑制血小板粘附的IC50 为 13 1μmol·L- 1 。结论 杨梅素具有抗PAF作用 。

红花黄色素抑制血小板激活因子诱导的内皮细胞炎性因子蛋白表达升高作用的研究

目的:观察红花黄色素(SY)抑制血小板激活因子(PAF)诱发的内皮细胞炎性因子蛋白表达升高及抑制PAF与其受体特异性结合的作用。方法:用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测SY缓解1μmol/L PAF刺激脐静脉内皮细胞株Eahy926培养液中的炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α的蛋白表达水平的变化;以放射配基结合试验观察SY抑制[3H]标记的PAF与家兔血小板膜和膜蛋白PAF受体特异性结合的作用。结果:与正常组比较,PAF损伤组内皮细胞培养上清液中IL-1β、IL-6及TNF-α蛋白表达水平明显升高(P<0.001),SY处理组(浓度为4.5×10-5,4.5×10-4,4.5×10-3g/L)时可明显抑制Eahy926培养液中IL-1β、IL-6及TNF-α蛋白表达水平的升高(P<0.05,0.01,0.001);受体结合实验结果表明浓度为16.49g/L的SY可抑制0.17 nmol/L[3H]PAF与家兔血小板膜的特异性结合,浓度为11.17和22.08g/L的SY分别可抑制0.083及0.25nmol/L[3H]PAF与兔血小板膜蛋白的特异性结合。结论:SY通过抑制PAF与其受体的特异性结合缓解了PAF诱发的血管内皮细胞炎症介质IL-1β、IL-6及TNF-α蛋白的高表达。

化合物XZ07抗精神分裂症活性及作用机制研究

目的 了解化合物XZ07抗精神分裂症活性,并对其作用机制进行初步探讨.方法 采用阿扑吗啡诱导小鼠攀爬模型及地卓西平（MK-801 ）诱导小鼠高活动性模型,观察化合物XZ07对模型小鼠攀爬行为及活动总路程的影响来了解化合物XZ07抗精神分裂活性;大鼠断头取脑后提取脑内多巴胺（D2）、5-羟色胺1A（5-HT1A）及5-羟色胺2A（5-HT2A）受体蛋白,采用体外配体受体结合试验,通过观察化合物XZ07与D2、5-HT1A及5-HT2A受体的亲和性来初步了解其作用机制.结果 化合物XZ07高、中、低3个剂量都能剂量依赖性地抑制阿朴吗啡小鼠攀爬行为,显著减少小鼠攀爬试验中评分（P〈0.01）;化合物XZ07高、中剂量能显著减少MK-801诱导的高活动性小鼠90 min内总活动路程（P〈0.01）;体外受体试验发现,化合物XZ07与D2、5-HT1A及5-HT2A受体均具有较高的亲和力.结论 化合物XZ07具有较好的抗精神分裂活性,有望开发成抗精神分裂症的新药,其作用机制可能与D2、5-HT1A及5-HT2A受体有关.

环境抗雄激素检测方法

环境抗雄激素是内分泌干扰物中的一大类 ,可与雄激素受体 (AR)竞争性结合 ,阻止体内雄激素与AR的结合 ,从而抑制雄激素活性 ,发挥抗雄激素作用。其对人类生殖健康的影响已引起人们广泛的关注 ,因此建立一套快速有效的筛检测试环境抗雄激素的方法已成为当务之急。为了综合评价环境抗雄激素 ,需使用成套的体内和体外方法。体内试验主要包括Hershberger试验、青春期雄鼠试验等 ,体外试验主要包括雄激素受体结合试验、雄激素依赖细胞增埴筛选试验。

3,4-亚甲二氧苯基甲酰吗啉与AMPA受体的结合作用研究

目的研究3,4-亚甲二氧苯基甲酰吗啉(化合物1)与AMPA受体的结合作用。方法采用放射性配体受体结合试验测定化合物1与AMPA受体结合的IC50值;采用分子对接技术研究化合物1与AMPA受体的结合能力和结合模式。结果化合物1与AMPA受体结合的IC50值为1.74×10^(-9)mol·L^(-1),具有较强的结合能力;化合物1与AMPA受体的结合能为-5.46 kcal·mol^(-1),同样表明结合能力较强。结合的驱动力主要是氢键、疏水作用和静电作用。化合物1结构中O原子可与AMPA受体的Ser108、Ser242氨基酸残基形成氢键,这可能是该化合物与AMPA受体结合的重要位点。结论化合物1可与AMPA结合,且结合能力较强。

μ阿片受体研究新进展

自从70年代初证明阿片受体在脑组织中确实存在以来,使阿片受体的研究一直成为神经生物学及分子神经药理学研究的热点。从阿片受体确认存在于脑组织,引发了寻找内源性阿片肽的热潮,很快发现了多种内源性阿片肽,也推动了阿片受体多型性的研究,阐明至少存在μ、δ、κ三类阿片受体。为搞清阿片受体结构本质,70年代中期以后又掀起了分离纯化阿片受体蛋白的工作。经过10多年的努力,由于阿片受体在脑组织含量太低。

银杏内酯B衍生物抗血小板聚集作用和作用机制(英文)

目的:探讨银杏内酯B衍生物(XQ)抗血小板聚集的作用及其机制。方法:运用比浊法测定静脉给药后PAF诱导的家兔血小板聚集作用,采用放射配基结合试验观察[3H]PAF与兔血小板受体特异性结合的作用。结果:XQ1.95、3.90、7.80mg·kg-1对家兔血小板聚集的抑制率分别为29.8%、43.5%和55.2%(P<0.01),PAF与家兔血小板膜上PAF受体结合的平衡解离常数(KD)=8.31×10-5mmol·L-1,最大结合容量(BMAX)=2.62×10-9mmol/108血小板。XQ和银杏内酯B(GB)可抑制[3H]PAF与兔血小板受体的特异性结合,抑制常数(Ki)分别为8.72×10-8、7.13×10-7mol·L-1。结论:XQ具有抗血小板聚集作用,Ki值接近,其拮抗PAF受体的能力与GB相似。

不同形态GⅡ．4型诺如病毒类病毒颗粒的制备及免疫原性研究

目的采用汉逊酵母系统重组表达GⅡ．4型诺如病毒（norovirus，NoV）主要结构蛋白VPl，对纯化后获得的两种不同形态类病毒颗粒（virus-1ikeparticles，VLPs）分别进行理化性质鉴定和免疫效果评价。方法将表达GlI．4型VPl蛋白的重组工程菌高密度发酵．纯化后获得两种不同形态的VLPs；通过Westernblot、SEC．HPLC、动态光散射法和透射电镜等方法检测两种VLPs的理化性质。将两种VLPs分别免疫BALB／c小鼠，比较免疫血清对两种颗粒的抗体结合性和组织血清抗原（histo-blood group antigen，HBGA）．VLPs阻断水平。结果纯化后可获得两种不同直径的VLPs，颗粒均一度良好；动态光散射测定两种颗粒水合粒径分别为53．98nm和45．18nm。两种VLPs与HBGA受体结合类型和程度相似，大颗粒VLPs的免疫血清对两种颗粒的结合性和HBGA-VLPs阻断抗体水平均高于小颗粒VLPs，但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论汉逊酵母表达NoVGⅡ．4VPl蛋白，可形成形态不同的两种重组VLPs，两种VLPs具有相似的理化性质和免疫原性，但大粒径VLPs可能更适合作为重组人诺如病毒疫苗的抗原组分。