狼疮肾炎不同中医虚证患者外周血单个核细胞TNF-α信号通路主要受体衔接蛋白的表达变化

目的探讨狼疮肾炎(LN)不同本虚证候患者外周血单个核细胞(PBMCs)内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)信号通路主要受体衔接蛋白-TNF相关死亡结构域蛋白(TRADD)、Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)、受体相互作用蛋白-1(RIP-1)和TNF受体相关因子-2(TRAF-2)表达变化。方法确诊的51例LN住院患者辨证分型为阴虚内热证组(13例)、气阴两虚证组(26例)及脾肾阳虚证组(12例),设健康志愿者17名为正常组。收集外周静脉血,分离PBMCs,采用实时荧光定量PCR检测上述4种受体衔接蛋白、Caspase-3和白介素-1β(IL-1β)的mRNA表达水平。结果(1)与正常组比较,阴虚内热组、气阴两虚组、脾肾阳虚组TRADD mRNA表达均显著降低,分别为正常组的0.54、0.32和0.38倍(P<0.05,P<0.01),3组之间差异无统计学意义(P>0.05);(2)FADD mRNA表达分别为正常组的0.79、0.62和0.72倍,仅气阴两虚组降低差异具有统计学意义(P<0.05);(3)RIP-1 mRNA表达分别为正常组的0.79、0.50和0.60倍,气阴两虚组和脾肾阳虚组降低差异具有统计学意义(P<0.01,P<0.05),3组之间差异无统计学意义(P>0.05);(4)TRAF-2 mRNA表达分别为正常组的0.70、0.52和0.50倍,后两组降低差异有统计学意义(P<0.01),各LN组间差异无统计学意义;(5)3组LN患者PBMCs中Caspase-3 mRNA表达均显著升高(均P<0.01);(6)阴虚内热证组IL-1β mRNA显著降低,且显著低于气阴两虚及脾肾阳虚证组(均P<0.05)。结论LN各虚证患者PBMCs中TRADD、FADD、RIP-1和TRAF-2 mRNA表达均不同程度低于正常组,其中气阴两虚组、脾肾阳虚组降低幅度较阴虚内热证组相对较小。这些信号蛋白介导的凋亡信号可能参与了LN本虚证候的形成。

Toll样受体4信号通路中髓样分化因子88和β干扰素Toll/IL-1受体结构域衔接蛋白在皮肤恶性黑素瘤中的表达及意义

目的探讨Toll样受体4(tol-likereceptor4,TLR4)信号通路下游的髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88,MyD88)和β干扰素Toll/IL-1受体结构域衔接蛋白(toll-like receptor-associated activator of interferon,TRIF)在皮肤恶性黑素瘤(cutaneous malignant melano ma,CMM)中的表达及与临床特征之间的关联。方法应用免疫组化方法检测40例CMM患者肿瘤组织、10例痣细胞痣患者皮损组织和10例健康皮肤组织中MyD88和TRIF的表达水平,采用SPSS22.0统计学软件进行t检验及Pearson检验处理分析。结果CMM中的MyD88及TRIF的表达强度显著高于痣细胞痣与正常皮肤组织(P<0.05);MyD88、TRIF的表达与CMM患者的年龄、性别等因素无明显相关性,而与发病部位、Clark分级、Breslow厚度、溃疡等因素相关,其中发生于肢端相较于非肢端的恶性黑素瘤表达更显著(P-0.002,0.001);随着Clark分级的增加,原位与浸润肿瘤之间,MyD88、TRIF的表达水平也增加(P=0.001,0.012);随着Breslow厚度的增加,两者表达水平也增加(P=0.004,0.026);合并溃疡的CMM中,MyD88表达增加,有统计学意义(P=0.019);TRIF表达强度无统计学差异(P>0.05);MyD88和TRIF均与CMM患者的淋巴结转移无相关性(P0.05)。结论TLR4下游的MyD88和TRIF相互协同,共同参与CMM的发生与发展。

家族性高胆固醇血症(FH)致病基因的研究进展

家族性高胆固醇血症(familial hypercholesterolemia,FH)的临床特征为血总胆固醇升高,尤其是低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-c)升高,沉积于组织,形成皮肤或肌腱黄色瘤,导致动脉粥样硬化甚至早发冠心病。FH的发病机制为LDL受体(LDL receptor,LDLR)或apoB基因突变引起LDL受体途径功能缺陷,主要为常染色体显性遗传疾患,具有基因剂量效应;部分患者为常染色体隐性遗传,机制为LDL受体衔接蛋白1(LDL receptor adaptor protein 1,LDLRAP1)失功能型突变,导致LDL内化活性降低。罕见的人类枯草溶菌素转化酶9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)发生功能型突变也可引起严重的FH表型。PCSK9通过降解LDLR蛋白间接下调LDL受体途径,其失功能突变可致血浆LDL水平下降。因此PCSK9是目前降脂药物的研究热点。

TRIF在血栓闭塞性脉管炎患者血管组织中的表达水平及临床意义

目的探讨β干扰素Toll样受体结构域衔接蛋白(TRIF)在血栓闭塞性脉管炎(TAO)患者血管组织中的表达水平及临床意义。方法取因TAO行截肢手术的26例患者(TAO组)和因非血管疾病行截肢手术的18例患者(对照组)的血管组织,采用反转录PCR(RT-PCR)及Western blot检测两组患者血管组织中的TRIF表达水平并进行组间比较。进一步采用免疫荧光共聚焦技术观察TRIF在TAO患者血管组织中的表达特点。结果TAO患者血管组织中TRIF的mRNA和蛋白表达水平明显高于对照组(P<0.05)。并且,在TAO患者中,TRIF主要表达于血管平滑肌细胞。结论TRIF的表达与TAO的起病关系密切,TRIF信号通路诱导的炎性反应可能是TAO发病的重要因素之一。

慢病毒介导短发夹RNA干扰技术建立小鼠肺组织TRIF沉默模型

目的通过慢病毒介导的短发夹RNA(shRNA)干扰技术建立小鼠肺组织β干扰素Toll/白细胞介素1受体结构域衔接蛋白(TRIF)沉默模型。方法构建TRIF的siRNA干扰质粒及慢病毒载体。将18只Balb/c小鼠随机分为空白组、实验组、对照组,每组6只。分别将含TRIF-shRNA、对照慢病毒载体的病毒液经鼻滴入转染实验组、对照组小鼠的肺组织。第8天处死小鼠取肺组织检测绿色荧光蛋白表达情况,取肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、心脏组织检测TRIF mRNA和蛋白的表达水平。结果实验组肺组织中可见明显绿色荧光蛋白表达,且肺组织中的TRIF mRNA和及蛋白表达水平均低于空白组及对照组(均P<0.05)。3组肝脏、脾脏、肾脏、心脏组织中的TRIF mRNA表达水平差异无统计学意义(均P>0.05)。结论使用滴鼻方法可有效建立肺组织局部TRIF沉默小鼠模型。

家族性高胆固醇血症相关基因研究进展

家族性高胆固醇血症(FH)是一种常染色体(共)显性遗传病。相关研究认为低密度脂蛋白受体(LDLR)、载脂蛋白-B(ApoB)、前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)、LDLR衔接蛋白1(LDLRAP1)等基因可能与FH发病有关,本文就FH相关基因研究进展作一综述。

中国汉族人群TIRAP基因编码区多态性与结核病易感性的相关性研究

目的筛选中国汉族人群TIRAP基因编码区多态性位点，并分析其与结核病易感性的相关性。方法在小样本中测序筛选TIRAP基因编码区多态性位点，再用连接酶特异检测技术在大样本中进行SNP分型，并通过统计学方法分析基因多态性与结核病易感性的相关性。结果共筛选到4个TIRAP基因编码区多态性位点。G394A位点在结核病人中的突变频率高于健康人，该位点等位基因频率在两组人群中差异具有统计学意义（P〉0．05）。G164A位点跟结核病病情有关，复治病人与健康人该位点等位基因差异具有统计学意义（P〈0．05），同时肺部形成空洞病人与菌阳病人突变率均比健康人要低。结论TIRAP基因编码区多态性可能是中国汉族人群结核病发生发展的危险因素。

双歧杆菌在过敏性哮喘治疗中的作用机制研究进展

过敏性哮喘是一种由多种炎性因子介导的气道慢性炎症,以气道高反应和可逆性呼气气流受限为临床特征。肠道菌群失调可能与过敏性哮喘的发生有关。双歧杆菌是一种肠道有益菌。双歧杆菌可以通过色氨酸代谢途径,促进芳基烃受体(AHR)配体表达,调节辅助性T细胞/调节性T细胞平衡,抑制气道的炎症反应;AHR可通过抑制活性氧簇(ROS)-核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3通路,减轻气道炎症反应及黏液分泌,缓解过敏性哮喘的发展。双歧杆菌可促进短链脂肪酸的生成,下调核因子-κB信号通路、抑制转化生长因子/Smads信号通路及上调G蛋白受体41和G蛋白受体43表达,减轻气道炎症、降低气道高反应,缓解过敏性哮喘的发展。双歧杆菌可抑制Toll样受体3/β干扰素TIR结构域衔接蛋白信号通路,减轻气道炎症及结构重塑,缓解过敏性哮喘的发展。

SH2B1基因多态性与2型糖尿病发病相关性的研究进展

遗传易感性在2型糖尿病(T2DM)的发生发展过程中具有重要作用。类固醇受体共激活因子同源性2B衔接蛋白1(SH2B1)是一种重要的调节人体代谢的衔接蛋白,通过参与瘦素、胰岛素等多种激素的信号转导途径,影响T2DM的发病及病程进展。研究显示,SH2B1基因多态性与T2DM显著相关,SH2B1通过增加胰岛素信号及调控β细胞参与胰岛素信号转导,通过增加瘦素信号来参与瘦素信号转导,通过增加成脂转录调节因子的表达来参与脂肪细胞分化。研究SH2B1基因多态性与T2DM发病的相关性,可为糖尿病的预防及治疗提供新的思路。

黄芩总黄酮改善哮喘模型小鼠气道炎症及对TLR3/TRIF通路表达的影响

目的探讨黄芩总黄酮对哮喘小鼠气道炎症的改善作用及对Toll样受体3(Toll-likereceptor3,TLR3)/β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TIRdomain-containing adaptorinducing interferon-beta,TRIF)通路表达的影响。方法随机将50只4~6周龄雌性Balb/c小鼠分为正常对照组、模型组、阳性对照组(地塞米松,1mg/kg)、黄芩总黄酮低剂量组(25mg/kg)、黄芩总黄酮高剂量组(50mg/kg),每组各10只小鼠。除正常对照组外,其余各组构建支气管哮喘(以下简称为哮喘)小鼠模型。苏木精-伊红(hematoxylin-eosinstaining,HE)染色法观察小鼠肺组织病理改变,并根据病理图片分析小鼠气道重塑情况,计算支气管壁面积/内周长(W/Pi)、支气管平滑肌面积/内周长(S/Pi)和平滑肌细胞核数/内周长(N/Pi)值。采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorben tassay,ELISA)法检测肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavagefluid,BALF)中白细胞介素6(interleukin6,IL-6)和IL-8水平。实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-timepolymerase chain reaction,qPCR)检测小鼠肺组织中TLR3、TRIFmRNA表达水平。Westernbolt检测小鼠肺组织中TLR3、TRIF蛋白表达水平。结果病理结果显示,正常对照组的支气管腔和肺泡均保持良好的完整性;模型组的小鼠表现出黏膜水肿、炎性细胞浸润(黏膜下层和黏膜层)以及气道壁炎性细胞浸润数量增加,给予黄芩总黄酮后小鼠支气管腔和肺泡炎性细胞浸润减少,且黄芩总黄酮高剂量组炎性细胞数少于黄芩总黄酮低剂量组。与正常对照组相比,模型组W/Pi、S/Pi、N/Pi,IL-6、IL-8,TLR3、TRIFmRNA和蛋白水平,均显著增加(P均<0.05);与模型组相比,黄芩总黄酮低、高剂量组和阳性对照组W/Pi、S/Pi、N/Pi,IL-6、IL-8,TLR3、TRIFmRNA和蛋白水平,均显著降低(P均<0.05);黄芩总黄酮低剂量组W/Pi、S/Pi、N/Pi,IL-6、IL-8,TLR3、TRIFmRNA和蛋白水平,均显著高于黄芩总黄酮高剂量组(P均<0.05);黄芩总黄酮高剂量组与阳性对照组各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论黄芩总黄酮可有效改善哮喘模型小鼠的气道炎症,其机制可能与抑制TLR3/TRIF信号通路,降低炎症反应,缓解气道重塑有关。

包虫囊液对干扰素信号TRIF/IFITM3通路的影响

目的 探索包虫囊液干预人源肝细胞(L02)过程中TRIF/IFITM3通路相关蛋白的变化。方法 从感染细粒棘球蚴病的羊肝中获取囊液,用不同比例囊液浓度(1∶10、1∶100和1∶1000)干预肝细胞并设置阴性对照组(未加囊液干预)。采用囊液浓度(1∶1000)干预肝细胞后分别在0、24、48和72 h收集细胞。实时荧光定量PCR检测TRIF/IFITM3通路相关mRNA的表达,Western blot检测TRIF、IRF3、IFITM3、Foxp3的蛋白表达变化。免疫荧光检测IFITM3、Foxp3的表达和定位。Spearman分析TRIF、IFITM3及Foxp3的相关性。结果 Western blot显示囊液浓度(1∶1000)促进TRIF、IRF3、IFITM3蛋白表达,TRIF的相对表达量分别是(0.45±0.09)、(0.54±0.05)、(1.08±0.24)、(1.75±0.31);IFITM3的相对表达量分别是(1.02±0.41)、(1.00±0.16)、(1.24±0.12)、(1.84±0.20)。囊液浓度(1∶1000)刺激肝细胞0、24、48和72 h后,Western blot显示TRIF、IRF3、IFITM3蛋白表达量逐渐下降,而Foxp3表达量增高。TRIF的相对表达量分别是(1.00±0.31)、(1.08±0.19)、(0.90±0.13)、(0.57±0.05);IFITM3的相对表达量分别是(0.80±0.26)、(0.94±0.09)、(0.82±0.19)、(0.54±0.18)。Foxp3的相对表达量分别是(0.70±0.11)、(0.80±0.02)、(0.83±0.03)、(1.08±0.04)。免疫荧光显示,在泡球蚴感染60 d时,小鼠肝脏IFITM3和Foxp3发生共定位。Spearman分析TRIF与IFITM3存在正相关性(r=0.704,P<0.01),TRIF与Foxp3存在负相关性(r=-0.859,P<0.01),IFITM3与Foxp3存在负相关性(r=-0.686,P<0.01)。结论 较低浓度的包虫囊液刺激TRIF/IFITM3通路相关分子表达,进而激活天然免疫的抗病原体功能;随着囊液干预时间增加TRIF/IFITM3受抑制,而Foxp3高表达,促进包虫在宿主体内慢性寄生。

TIRAP基因多态性与儿童反复下呼吸道感染的关联性

目的探讨Toll/白细胞介素-1受体结构域衔接蛋白(TIRAP)与儿童反复下呼吸道感染(RRTI)易感性的关系及临床价值。方法选择酒泉市人民医院儿科2018年8月-2020年8月收治的反复呼吸道感染患儿102例纳入RRTI组。选择同期于医院进行治疗的社区获得肺炎(CAP)患儿80例为CAP组,选择同期医院进行体检的健康儿童80名作为对照组,聚合酶链式扩增反应检测TIRAP基因rs8177374位点基因分型。分析三组基因型及等位基因分布频率,将RRTI患儿按病情分为病情严重组和病情较轻组,比较不同病情程度RRTI患儿TIRAP基因rs8177374位点基因分布频率差异,并对不同基因RRTI患儿的临床特征进行分析。结果RRTI组TIRAP基因rs8177374位点CC、CT基因型、C等位基因频率分别为36.27%、34.31%、53.43%均高于CAP组及对照组(P<0.05);CAP组与对照组TIRAP基因rs8177374位点基因型、等位基因分布频率比较差异无统计学意义(P>0.05);RRTI组病情严重患儿CC基因型、C等位基因频率分别为51.28%、67.95%均高于病情较轻组(P<0.05),CC/CT型与TT型性别、年龄、病程、年平均发作次数、家族史、呼吸困难比较差异无统计学意义,CC/CT型C-反应蛋白(CRP)水平高于TT型(P<0.05)。结论外周血TIRAP基因rs8177374位点CC基因型、T等位基因频率显著增加本地区儿童RRTI的易感性。

中国汉族人群TIRAP基因编码区多态性与结核病易感性的相关性研究

目的筛选中国汉族人群Toll／白细胞介素1受体结构域衔接蛋白（TIRAP）基因编码区多态性位点，并分析其与结核病易感性的相关性。方法在小样本中测序筛选TIRAP基因编码区多态性位点，再用连接酶特异检测技术在大样本中进行单核苷酸多态性（SNP）分型，并通过统计学方法分析基因多态性与结核病易感性的相关性。结果共筛选到4个TIRAP基因编码区多态性位点。G394A位点在结核病病人中的突变频率高于健康人，但是该位点等位基因频率在两组人群中的差异没有统计学意义（P〉0．05）。G164A位点跟结核病病情有关，复治病人与健康人该位点等位基因差异具有统计学意义（P〈0．05），同时肺部形成空洞病人与菌阳病人突变率均比健康人要低。结论TIRAP基因编码区多态性可能是中国汉族人群结核病发生发展的危险因素。

TLR2和TIRAP基因多态性与隐性感染性结核的相关性研究

目的 探讨Toll样受体(toll-like receptors, TLR)2和含Toll白细胞介素-1受体域衔接蛋白(toll interleukin-1 receptor domain contain adapter protein, TIRAP)基因的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)与隐性感染性结核的相关性。方法 研究纳入健康正常人(对照组)316名和隐性感染性结核患者(病例组)322例,采用SNaPshot微测序技术分析TLR2基因2个位点(rs5743708、rs3804099)和TIRAP基因4个位点(rs595209、rs7932766、rs8177374和rs8177400)的多态性,通过比较基因型和等位基因频率的差异,分析TLR2和TIRAP基因位点多态性与隐性感染性结核的相关性。结果 TLR2和TIRAP基因的6个位点的基因频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律。病例组rs5743708、rs3804099和rs8177374的基因型及等位基因与对照组相比,差异均无统计学意义。rs595209位点的等位基因T相对于G发病风险降低21.5%(OR=0.785,95%CI:0.621~0.992),rs7932766位点的等位基因T相对于C发病风险降低78.7%(OR=0.213,95%CI:0.071~0.633),且差异均有统计学意义(χ^(2)=4.102、9.336,P<0.05)。rs595209位点的基因型TT相对于GG发病风险降低43.2%(OR=0.568,95%CI:0.348~0.928),相对于(GT+GG)发病风险降低42.0%(OR=0.580,95%CI:0.363~0.925),且差异均有统计学意义(χ^(2)=5.178、5.321,P<0.05);rs7932766位点的基因型CT相对于CC发病风险降低79.2%(OR=0.208,95%CI:0.070~0.622),且差异有统计学意义(χ^(2)=9.503,P<0.05)。结论 TIRAP基因的rs595209位点的基因型TT及等位基因T、rs7932766位点的基因型CT及等位基因T均为隐性感染性结核的保护性因素。

肺结核患者外周血TIRAP S180L基因多态性与疾病易感性及病情的关系

目的探讨肺结核患者外周血白细胞介素1受体结构域衔接蛋白(TIRAP)S180L基因多态性与疾病易感性及病情严重程度的关系。方法选择琼海巿人民医院感染科2017年5月-2020年5月收治的肺结核患者140例为研究对象,选择同期医院体检健康志愿者80名作为对照组。采用聚合酶链式扩增反应扩增TIRAP基因S180L位点目标序列。通过凝胶成像仪观察分型结果。结果研究组TIRAP基因S180L位点TT基因型、T等位基因频率高于对照组(P<0.05),C等位基因频率低于对照组(P<0.05)。TT型肺结核患者胸部CT评分分级3/4级频率高于CC/CT型患者,CD4^(+)/CD8^(+)水平低于CC/CT型患者(P<0.05),两组结核空洞情况比较差异无统计学意义;两组治疗失败、临床复发、死亡及结核耐药情况比较差异无统计学意义;校正性别、年龄、体质量指数(BMI)等常量因素后,多元Logistic回归分析结果发现,在隐性模型及加性模型下,肺结核发病风险显著增加(P<0.05)。结论TIRAP S180L基因突变与本地区居民肺结核易感性有关,T等位基因为风险基因,与患者免疫程度相关,但与治疗效果无关。