酪氨酸蛋白激酶受体EphA2及其配体EFNA1在23种肿瘤细胞系中的表达及其意义

背景与目的:酪氨酸蛋白激酶受体EphA2及其配体EFNA1可能在肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用。本研究探讨EphA2/EFNA1在不同肿瘤细胞中的表达及其意义。方法:用RT-PCR方法,检测了23种人类肿瘤细胞系中EphA2/EFNA1在mRNA水平上的表达。并用Western blot方法检测了EphA2蛋白在不同肿瘤细胞系中的表达水平。结果:RT-PCR结果显示,除白血病细胞K562和HL60,以及视网膜母细胞瘤RB几乎检测不到EphA2/EFNA1外,EphA2/EFNA1高表达于肝癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌、前列腺癌、胃腺癌、脑胶质瘤、膀胱癌、成骨肉瘤及恶性黑色素瘤等20种细胞系中。Western blot结果显示,除K562外,EphA2蛋白在不同肿瘤细胞系中均有表达。结论:EphA2/EFNA1高表达于人类多种肿瘤细胞中,并且EFNA1的表达水平相对低于EphA2的表达。E-phA2/EFNA1可作为一个较为广谱的肿瘤标记,并有可能成为肿瘤治疗的靶点。

胰腺癌患者血清外泌体酪氨酸蛋白激酶受体EphA2蛋白表达变化及其意义

目的观察胰腺癌患者血清外泌体酪氨酸蛋白激酶受体EphA2蛋白表达变化,并探讨其临床意义。方法选取胰腺癌患者105例(胰腺癌组)、同期体检健康者70例(健康组),采用酶联免疫法检测两组血清外泌体EphA2蛋白。以胰腺癌患者血清外泌体EphA2蛋白表达水平中位数为临界值,将105例胰腺癌患者分为EphA2蛋白高表达者、EphA2蛋白低表达者,分析血清外泌体EphA2蛋白表达水平与胰腺癌患者临床病理参数的关系。以胰腺癌患者血清外泌体EphA2蛋白表达水平中位数为临界值,将随访资料完整的胰腺癌患者分为EphA2蛋白高表达组、EphA2蛋白低表达组,采用Kaplan-Meier生存分析法分析血清外泌体EphA2蛋白表达水平与胰腺癌患者预后的关系。结果胰腺癌组、健康组血清外泌体EphA2蛋白表达水平分别为(1956±216)ng/L、(474±51)ng/L,两组相比,P<0.05。血清外泌体EphA2蛋白表达水平与胰腺癌TNM分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),与患者的性别、年龄、吸烟史、酗酒史无关(P均>0.05)。EphA2蛋白高表达组3年生存率为14.9%,EphA2蛋白低表达组3年生存率为37.7%,两组相比,P<0.05。结论胰腺癌患者血清外泌体EphA2蛋白表达水平升高,与胰腺癌TNM分期、淋巴结转移有关;血清外泌体EphA2蛋白高表达的胰腺癌患者3年生存率低于低表达者。

EphA2受体表达与卵巢癌侵袭性的关系

目的探讨酪氨酸蛋白激酶受体EphA2在卵巢癌组织中的表达意义及其与卵巢癌微血管生成之间的相关性。方法应用免疫组化方法检测76例卵巢癌标本和20例卵巢良性病变中EphA2蛋白的表达情况,并分析EphA2表达与卵巢癌临床病理学因素及微血管生成之间的关系。结果卵巢癌中EphA2的阳性表达率77.6%(59/76)明显高于卵巢良性病变的表达率25.0%(5/20),P<0.01。晚期卵巢癌(III/IV期)EphA2的阳性表达率84.4%(54/64)明显高于早中期卵巢癌(I/II期)41.7%(5/12),P<0.01。高级别卵巢癌(III级)E-phA2的阳性表达率82.5%(52/63)高于低级别卵巢癌(I/II级)的阳性表达率53.8%(7/13),P<0.05。EphA2表达与患者的年龄、肿瘤的组织学类型、淋巴结转移及有无腹水无明显相关性(P>0.05)。免疫组化结果还发现,除卵巢癌细胞外,肿瘤组织内微血管内皮细胞也有EphA2受体蛋白表达。CD34染色后卵巢癌的微血管密度(MVD)与EphA2表达水平有显著相关性(P<0.05),EphA2阳性表达强度高的肿瘤区域有较高的微血管密度。结论EphA2过表达提示卵巢癌具有较强的侵袭性,或可作为卵巢癌一个重要的治疗靶点。

浸润性乳腺癌组织肝配蛋白A型受体2(EphA2)高表达且与细胞焦亡负相关

目的探讨肝配蛋白A型受体2(EphA2)参与浸润性乳腺癌中细胞焦亡(pyroptosis)的机制。方法采用Western blot法检验乳腺癌患者癌组织、癌旁组织和正常乳腺组织EphA2、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)的蛋白表达水平;采用免疫荧光技术检测45例乳腺癌患者癌组织和癌旁组织中EphA2表达情况;用Pearson相关系数对患者癌组织EphA2的蛋白表达与细胞焦亡相关蛋白NLRP3、caspase-1和IL-1β进行相关性分析。结果与正常乳腺组织及癌旁组织相比,乳腺癌组中NLRP3、caspase-1、IL-1β和ICAM-1的蛋白表达水平明显降低,EphA2蛋白表达明显升高;EphA2水平与细胞焦亡相关蛋白NLRP3、caspase-1和IL-1β均呈负相关性。结论乳腺癌组织EphA2高表达,且与细胞焦亡呈负相关。

EphA2/ephrinA1与人脑胶质瘤发生的关系及靶向治疗潜能探讨

恶性脑胶质瘤发生发展同酪氨酸蛋白激酶(receptor tyrosine kinases,RTK)受体EphA2及其配体ephrinA1的表达功能与肿瘤细胞中的信号转导密切相关,EphA2和ephrinA1的表达受肿瘤细胞种类和微环境的影响,进而诱导肿瘤细胞及相关细胞信号转导,产生相应的生物学行为。EphA2、ephrinA1系统有望成为恶性脑胶质瘤药物治疗的新靶点。

抑制EphA2受体对内毒素性急性肺损伤的保护作用

目的:探讨抑制EphA2受体对内毒素性急性肺损伤的保护作用。方法:将成年SD大鼠随机分为对照组(C组)、LPS组(L组)和抑制剂组(M组),检测给予LPS后1 h、3 h和6 h血清中炎症细胞因子肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素(IL-6)水平的变化,检测大鼠肺组织湿/干重(W/D)比值,检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性的变化。结果:与对照组相比,L组在3个时间点TNF-α和IL-6的含量升高(P<0.05);而给予EphA2/Fc后,M组TNF-α和IL-6的含量低于L组(P<0.05);与对照组相比,LPS组肺组织W/D的比值和MPO活性升高(P<0.05),而给予EphA2/Fc后,M组W/D的比值和MPO活性低于L组(P<0.05)。结论:使用抑制剂EphA2/Fc抑制EPh A2受体对内毒素性急性肺损伤有保护作用,EphA2受体可以作为急性肺损伤研究治疗的新靶点。

抑制EphA2受体对内毒素性急性肺损伤的保护作用研究

分析抑制EphA2受体对内毒素性急性肺损伤的保护作用。选取我院收治的39例内毒素性急性肺损伤患者为观察组,另选取39例同一时期的健康志愿者作为对照组,观察两组治疗前后TNF-a水平、IL-6水平、MPO活性水平的变化情况。观察组治疗前TNF-a水平、IL-6水平、MPO活性水平显著高于对照组(P<0.01),差异具有统计学意义。采用抑制EphA2受体治疗后,观察组的TNF-a水平、IL-6水平、MPO活性水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。在内毒素性急性肺损伤患者的临床治疗中,抑制EphA2受体具有显著的保护作用,可作为治疗急性肺损伤患者的新靶点。

促红细胞生成素肝细胞A2受体及其配子ephrinA1与恶性肿瘤关系的研究进展

促红细胞生成素肝细胞(EphA2)及其配体ephrinA1的表达、功能及其在肿瘤细胞中的信号转导与多种恶性肿瘤发生发展密切相关,EphA2和ephrinA1的表达受肿瘤细胞种类和微环境的影响,进而诱导肿瘤细胞及相关细胞信号转导,产生相应的生物学行为。EphA2、ephrinA1系统有望成为恶性肿瘤药物治疗的新靶点。

人脑星形细胞瘤中EphA2-ephrinA1、CD105的表达及与预后的关系

目的检测酪氨酸激酶受体EphA2及配体ephrinA1在人脑星形细胞瘤中的表达,并探讨其与脑星形细胞瘤预后的关系。方法采用免疫组织化学法检测55例手术切除人脑星形细胞瘤组织及15例正常脑组织中EphA2、ephrinA1的表达情况,并采用CD105抗体标记微血管内皮细胞,计算微血管密度(MVD)。结果 EphA2(51/55)、CD105-MVD(34.26±12.61)在星形细胞瘤中阳性表达明显高于正常脑组织,两者差异有统计学意义(P<0.01);而且随着星形细胞瘤病理级别越高,EphA2及CD105-MVD蛋白染色强度和阳性细胞数均明显升高,ephrinA1则具有相反的趋势,随星形细胞瘤级别越低ephrinA1表达越高。EphA2表达与CD105-MVD呈显著正相关(r=0.713,P<0.05),ephrinA1表达与CD105-MVD呈显著负相关(r=-0.772,P<0.05),EphA2的表达与ephrinA1的表达呈显著负相关(r=-0.912,P<0.05)。EphA2、CD105-MVD和ephrinA1均是重要的星形细胞瘤预后相关风险因子。EphA2、CD105-MVD阳性ephrinA1阴性的星形细胞瘤患者较三者均阳性或三者均阴性或EphA2、CD105-MVD阴性ephrinA1阳性的患者生存期明显缩短。结论 EphA2及CD105-MVD在星形细胞瘤中特异性高表达、ephrinA1特异性低表达与星形细胞瘤不良预后密切相关,EphA2和ephrinA1有望成为脑星形细胞瘤诊断和特异性靶向治疗及预后评估的新靶点。

屋尘螨提取物激活气道上皮细胞EphA2-STAT3/p38 MAPK信号通路介导气道炎症

目的探讨受体酪氨酸激酶肝配蛋白A型受体2(EphA2)对屋尘螨提取物(HDM)诱导气道上皮细胞表达炎症细胞因子的作用及其机制。方法用EphA2小干扰RNA(siRNA)转染气道上皮细胞株16HBE细胞建立EphA2敲减的细胞模型,HDM刺激16HBE细胞后,采用实时定量PCR检测EphA2、白细胞介素6(IL-6)和IL-8 mRNA水平,细胞因子微球检测技术(CBA)检测IL-6、 IL-8、 IL-17A、 IL-17F和肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白水平;Western blot法检测EphA2、磷酸化的EphA2(p-EphA2)、信号转导子与转录激活子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、 p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化的p38 MAPK(p-p38 MAPK)、核因子κB p65(NF-κB p65)及磷酸化的NF-κB p65(p-NF-κB p65)蛋白水平。STAT3抑制剂Stattic联合HDM或p38 MAPK抑制剂SB203580联合HDM刺激16HBE细胞,实时定量PCR检测IL-6和IL-8 mRNA水平、 CBA检测IL-6和IL-8蛋白水平。结果敲低EphA2显著抑制HDM诱导16HBE细胞表达IL-6和IL-8,降低STAT3及p38 MAPK的总蛋白及磷酸化水平,但对NF-κB p65总蛋白及磷酸化水平均无明显影响。Stattic抑制STAT3表达及活化后,显著抑制HDM诱导16HBE细胞中IL-6和IL-8 mRNA和蛋白表达;而SB203580抑制p38 MAPK信号通路后,抑制HDM诱导16HBE细胞中IL-6和IL-8 mRNA表达水平,而对其蛋白水平无影响。结论 HDM通过激活EphA2-STAT3/p38 MAPK通路诱导16HBE细胞表达IL-6和IL-8参与气道炎症。

EPHA2抗体对结直肠癌西妥昔单抗耐药的逆转作用

目的明确结直肠癌(CRC)病人西妥昔单抗治疗前后EPHA2的表达水平,并探索EPHA2抗体能否逆转西妥昔单抗的耐药。方法收集8例KRAS野生型CRC病人在西妥昔单抗治疗前及疾病进展后的配对肿瘤组织标本,采用免疫组化方法检测EPHA2的表达水平。使用西妥昔单抗处理其敏感细胞系、原发及继发耐药的CRC细胞系,以MTT方法检测细胞增殖能力。使用EPHA2抗体DS-8895a、西妥昔单抗单药或联合处理原发及继发耐药的CRC细胞,检测各组细胞增殖能力。结果在西妥昔单抗治疗前及进展后的肿瘤组织中,存在治疗后EPHA2表达的上调(t=6.056,P<0.05)。在KRAS野生型CRC细胞系中,DS-8895a与西妥昔单抗有协同增敏作用;而在西妥昔单抗继发耐药CRC细胞系中,DS-8895a可逆转西妥昔单抗的耐药。结论 EPHA2抗体与西妥昔单抗联合可能具有逆转西妥昔单抗继发耐药作用,以及潜在的协同增敏作用。EPHA2有可能成为CRC治疗策略的新突破。

miR-141的过表达抑制MHCC-97H肝癌细胞的增殖和侵袭迁移

目的观察肝细胞癌组织中miR-141的表达水平,通过上调MHCC-97H肝癌细胞中miR-141的水平观察对MHCC-97H细胞增殖、侵袭及迁移的影响。方法实时定量PCR检测miR-141在肝癌及癌旁组织中的表达水平,并分析miR-141表达水平与临床病理指标的关系及生存率。利用人工合成的miR-141模拟物,瞬时转染MHCC-97H细胞。MTT法检测MHCC-97H细胞的增殖,TranswellTM实验检测MHCC-97H细胞的侵袭及迁移,Westernblot法及免疫组织化学检测miR-141下游潜在靶点肝细胞产生的促红素受体A2(EphA2)的表达。结果miR-141在肝癌组织中表达水平显著低于相应癌旁组织;肝癌组织中miR-141低表达与TNM分期、门静脉侵犯及Edmondson分级显著相关;低表达miR-141患者3年生存率明显低于高表达组;miR-141模拟物转染可上调MHCC-97H细胞miR-141水平,上调miR-141可显著抑制MHCC-97H细胞的增殖、侵袭及迁移,并下调EphA2的蛋白水平;miR-141低表达组EphA2蛋白水平明显高于miR-141高表达组,相关性分析显示肝癌组织中miR-141与EphA2蛋白表达呈显著负相关。结论miR-141在肝癌组织中表达下调且与EphA2表达呈显著负相关,其低表达与肝癌恶性临床病理特征有关,上调miR-141表达可抑制EphA2的表达抑制肝癌细胞增殖、侵袭及迁移能力。

脉络膜黑色素瘤中上皮酪氨酸激酶受体A2的表达与血管生成拟态的关系及其临床病理学意义

目的探讨在脉络膜黑色素瘤中上皮酪氨酸激酶受体A2（EphA2）的表达与血管生成拟态（VM）的关系及其临床病理学意义。方法回顾性系列病例研究。收集天津医科大学第二附属医院眼科1992年1月至2005年12月56例脉络膜黑色素瘤标本及患者的临床病理学资料。采用免疫组织化学方法检测脉络膜黑色素瘤组织中EphA2的表达情况。经CD31／PAS双重染色证实VM存在，依据有无VM将标本分为VM（＋）组和VM（-）组。结合肿瘤细胞EphA2表达的阳性率和染色强度结果综合评估，将标本分为低表达和高表达。采用）（。检验和t检验分别分析计数资料和计量资料；Kaplan—Meier法分析不同组患者的生存时间；Cox比例风险模型分析影响患者预后的因素。结果56例脉络膜黑色素瘤中有VM26例，无VM30例；VM与细胞类型、肿瘤大小、复发与转移有关，差异均有统计学意义（x2=4．612、5．346、5．213，P=0．036、0．021、0．027）。在VM（＋）组中EphA2表达的阳性率（92．3％，25／26）高于VM（-）组（70．O％，21／30），差异有统计学意义（t=2．247，P=0．009）；在不同组织学类型肿瘤中EphA2高表达情况依次为：上皮细胞型（10／12），混合型（11／15），梭形细胞型（41．40％），差异有统计学意义（X2=6．513，P=0．010）；EphA2高表达与肿瘤大小、复发与转移有关，差异有统计学意义（X2=4．556、8．211，P=0．016、0．005）；Kaplan—Meier生存分析提示，EphA2高表达与低表达患者生存时间的差异有统计学意义（t=9．263，P=0．000）；Cox比例风险模型分析表明，EphA2高表达与VM是影响脉络膜黑色素瘤患者预后的独立危险因素（x2=12．041，P=0．001），且二者呈正相关关系（r=0．412，P〈0．05）。结论EphA2高表达与VM是影响预后的不利因素，EphA2高表达促进了VM形成，且与肿瘤的分化、侵袭、转移密切相关，可作为评估预后的重要指标。

EphA2、EphrinA 1在膀胱癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨膀胱癌组织中EphA2、EphrinA1的表达及其与临床病理因素的关系,以及联合检测在膀胱癌预后中的意义.方法 采用S-P免疫组织化学技术检测75例膀胱癌切除术后的组织石蜡标本中EphA2和EphrinA1的表达,并结合临床病理因素进行分析.结果 （1）膀胱癌组织中EphA2和EphrinA1的阳性表达率分别为61.3%（46/75）和46.7%（35/75）.（2）EphA2的阳性表达率与膀胱癌患者的性别、年龄、病理类型均无显著相关性（P＞0.05） 而与肿瘤大小、有无淋巴结转移及TNM分期显著相关（P＜0.05）.（3）EphrinA1的阳性表达率与膀胱癌患者的性别、年龄、病理类型、TNM分期均无显著相关性（P＞0.05） 而与肿瘤大小、有无淋巴结转移显著相关（P＜0.05）.（4）EphA2的阳性表达率与EphrinA1的阳性表达率显著相关（P＜0.05）.结论 EphA2和EphrinA1与膀胱癌的发生、发展有关,联合检测有助于客观评估膀胱癌的生物学行为,可用来指导临床用药和判断预后.

促红细胞生成素产生肝细胞受体2在脑胶质瘤中的研究进展

促红细胞生成素产生肝细胞受体2(EphA2)是受体酪氨酸激酶最大家族中最广泛表征的成员,被认为是调节恶性肿瘤进展的关键因素。EphA2在胶质瘤中高表达,对胶质瘤的发生、发展起到重要的作用。文章就EphA2的结构、功能及其在脑胶质瘤中的表达情况、在胶质瘤细胞迁移、维持胶质瘤干细胞、血管生成中的作用及靶向治疗进行综述。