MiR-127-5p通过靶向调节adipoR1促进骨关节炎软骨细胞的增殖

脂联素(adiponection)与骨关节炎(osteoarthritis,OA)的发病密切相关,且主要通过其受体adipoR1发挥作用。而骨关节炎中脂联素的表达是否受miRNA表达的影响却未见报道。本文旨在研究miR-127-5p对骨关节炎软骨细胞中脂联素及细胞增殖的影响。分离培养人原代OA软骨细胞及对应正常细胞,甲苯胺蓝染色和II型胶原免疫细胞化学染色进行鉴定。Real-time PCR结果表明,OA软骨细胞中miR-127-5p的表达与正常软骨细胞中的相比较显著下降。MiR-127-5p转染可显著降低荧光素酶报告基因的荧光强度(P<0.05),表明adipoR1为miR-127-5p的靶向基因。MiR-127-5p mimic转染软骨细胞后,MTT法研究结果表明,miR-127-5p mimic可显著促进软骨细胞增殖,Western印迹结果表明,脂联素及其受体(adipoR1)表达显著上升,p65的表达以及p38、ERK1/2以及Ik Bα的磷酸化水平显著下降。ELISA结果表明,MMP-1、MMP-3、MMP-13的含量显著下降。实验结果提示,miR-127-5p通过靶向下调adipoR1及脂联素的表达,促进软骨细胞增殖,并且抑制NF-κB信号通路,进而抑制炎性反应。

补中益气汤通过Adipor1/AMPK/PGC-1α调节脂代谢治疗运动性疲劳

目的:探讨补中益气汤通过脂联素受体1(Adipor1)/磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/过氧化物酶体增生物激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)对运动性疲劳(EIF)小鼠骨骼肌中脂代谢的影响。方法:将C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、补中益气汤低、中、高剂量组、维生素C组。空白组不施加任何干预,其余组通过力竭游泳建立EIF模型。力竭游泳前1 h,空白组、模型组灌服0.2 mL蒸馏水,补中益气汤低、中、高剂量组分别灌胃4.1、8.2、16.4 g·kg^(-1)的补中益气汤,维生素C组灌胃0.04 g·kg^(-1)剂量维生素C,持续6周。实验6周后,计算小鼠体质量增长率、脏器指数、力竭游泳时间;酶比色法检测小鼠血清中尿素氮(BUN)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、乳酸(LD)的水平;苏木素-伊红(HE)染色观察骨骼肌组织病理变化;透射电镜(TEM)观察骨骼肌组织超微结构;微板法检测血清中游离脂肪酸(NEFA)、甘油三酯(TG)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定骨骼肌中Adipor1、磷酸化(p)-AMPK/AMPK、PGC-1α和己糖激酶2(HK2)蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠的体质量增长率、胸腺指数降低,血清中BUN、CK、LD、LDH水平升高(P<0.01),NEFA、TG含量下降(P<0.01),骨骼肌组织Adipor1、p-AMPK/AMPK、PGC-1α、HK2蛋白表达下降(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,补中益气汤高剂量组体质量增长率、胸腺指数、力竭游泳时间显著升高(P<0.01),BUN、CK、LD、LDH显著下降(P<0.01),NEFA、TG显著升高(P<0.01),骨骼肌组织Adipor1、p-AMPK/AMPK、PGC-1α、HK2蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01);维生素C组胸腺指数、力竭游泳时间明显提高,BUN、CK、LD明显下降(P<0.05,P<0.01),NEFA、TG显著升高(P<0.01),骨骼肌组织Adipor1蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论:补中益气汤能够延缓EIF的发生,其机制可能与调节Adipor1/AMPK/PGC-1α信号通路,提高骨骼肌对脂肪的利用率有关。

特发性脊柱侧弯脂联素与软骨细胞增殖

[目的]探讨脂联素是否对特发性脊柱侧弯(idiopathic scoliosis,IS)患者关节突软骨细胞的增殖和肥大过程产生影响。[方法]酶联免疫吸附测定法检测IS患者和正常人组的血浆脂联素水平;提取IS患者和正常人组的关节突原代软骨细胞,用蛋白质免疫印迹方法检测脂联素及其受体Adipo R1、软骨细胞标志蛋白ColⅡ和肥大标志物Col X的表达情况。不同浓度脂联素刺激IS组软骨细胞,检测相关蛋白的表达情况。[结果]IS患者血浆脂联素水平显著高于正常人组[(19.3±11.5)μg/ml vs(9.5±8.4)μg/ml,P<0.05],且IS组女性[(19.3±11.5)μg/ml vs(11.9±8.8)μg/ml,P<0.05]和男性患者[(9.3±4.5)μg/ml vs(3.7±3.3)μg/ml,P<0.05]的血浆脂联素水平分别显著高于正常人组女性和男性的水平。IS患者软骨细胞中脂联素[(1.4±0.3)vs(1.0±0.1),P<0.05]、Adipo R1[(1.3±0.3)vs(1.0±0.2),P<0.05]和ColⅡ[(1.8±0.7)vs(1.0±0.7),P<0.05]的蛋白水平显著高于正常人组,而Col X[(0.2±0.1)vs(1.0±0.8),P<0.05]的蛋白水平则低于正常人组。不同浓度脂联素刺激IS组软骨细胞后,Adipo Q、AdipoR1的表达水平呈浓度依赖性升高(P<0.05),ColⅡ和抗凋亡因子Bcl2的蛋白水平也显著升高(P<0.05),而ColX、Bax蛋白水平则显著降低(P<0.05)。[结论]血浆中升高的脂联素水平可能通过上调AdipoR1、Bcl2和ColⅡ,以及下调Bax和Col X来促进IS患者软骨细胞的增殖并抑制其肥大进程。