显微注射生长激素基因导入中国对虾（Penaeus chinensis）受精卵的研究

本实验采用显微微量注射方法，将羊生长激素基因导入中国对虾受精卵，受精卵发育到状幼体第三期后采样检测。ＰＣＲ检测结果表明：７个样品共９３尾幼体，有３个样品呈现阳性信号，基因转移比率至少在３％以上。同时斑点杂交结果也证明有两个明显阳性斑点。

显微注射法制备转基因小鼠的技术研究

转基因技术是发生工程学或胚胎操作技术中的一部分。这一技术包括有受精卵的采集，受精卵的体外培养，胚胎移植等技术，转基因动物制作是其应用技术之一，它是将外源ＤＮＡ片段用显微注射法直接注入受精卵原核，使外源ＤＮＡ随机整合到寄主基因组中而形成转基因小鼠。我们建立完善这一技术的目的是在实验动物的生产中为转基因动物的生产提供稳定可靠的保证。我们将ｐＣＸＴＧＡＰ、ｐＣＳＬＮ等基因分别注入受精卵原核制备相应的转基因动物模型，并从中总结较佳的操作技术。结果经检测阳性转基因小鼠占出生幼鼠的１６３８％。我们认为不仅要有精细的微注射技术、动物的选用和饲育、严密的胚胎操作都是转基因动物制作成功的重要条件。

转基因显微注射的剂量控制与效果分析

为了分析转基因显微注射的注射剂量对胚胎发育效果的影响，用尖端直径为０．５～１．０ｕｍ的显微注射针在不同气压和不同时间的条件下进行微注射测试，并对１３３枚小鼠受精卵分别注射不同剂量，观察注射后胚胎发充情况。实验采用的气压电控式显微注射器，具有注射时间短（ｍｓｅｃ），注射的可控性和可重复性好的特点，在相同条件下重复注射时，误差小于０．００４ｐｌ。结果表明，小鼠受精卵原核内注射剂量在２～４ｐｌ时，胚胎体外发育不受影响，当大于１０ｐｌ时，胚胎在注射后１ｈ内全部死亡，也证明了注射针尖端直径小于１．０ｕｍ时，导致细胞损伤和影响胚胎发育的主要因素是注射剂量的大小。因此，对于小鼠胚胎原核内注射剂量２～４ｐｌ是较为合适的“

转基因小鼠技术中获得原核期受精卵最适时间的研究

显微注射法是制备转基因动物的首选方法 ,而原核清晰受精卵的获得是影响显微注射成败的关键。本文对小鼠HCG超排注射后大量原核期受精卵获得的最佳时间进行了研究 ,以提高显微注射成功率。结果显示采集雄性原核清晰受精卵的最佳时间段为注射HCG后 2 5～ 2 7h。

影响小鼠显微注射胚胎质量的若干因素

显微注射法是目前国际公认的制备转基因动物的首选方法 ,有重大的应用价值。保证显微注射胚的质量是转基因工作的关键。本文根据我们显微注射的工作 。

影响小鼠胚胎显微注射成功率的若干因素

显微注射法是目前国际公认的制备转基因动物的首选方法 ,有重大的应用价值 ,影响小鼠显微注射成功有许多因素。本文根据我们显微注射的工作 ,着重探讨影响小鼠显微注射成功的受精卵的质、量和原核清晰度三个关键因素。

影响小鼠转基因原核胚体外发育的若干因素

探讨了显微注射不同浓度的外源 DNA以及温度、培养基等对小鼠原核胚体外培养发育能力的影响。显微注射 1 .5、1 5、3 0 mg/L的衰变加速因子 ( CD55)、膜反应溶解因子 ( CD59)基因后 ,小鼠原核胚发育到囊胚的比率随 DNA质量浓度的升高而依次降低为 57.7%、3 6.6%、1 0 .4 % ,差异极显著 ( P <0 .0 1 )。注射 1 .5mg/L外源 DNA,原核胚的囊胚率 ( 57.7% )比对照组 ( 54.5% )稍有提高 ,但差异不显著 ( P >0 .0 5)。 1 .5mg/L为本试验最佳外源 DNA注射质量浓度。 3 7℃、CZB培养液或改进的 Whitten氏培养液 ,可取得较好的体外培养效果。

慢病毒载体法制备遗传工程猴和小型猪的现状及应用前景展望

较小鼠等啮齿类动物而言,猴和小型猪等大型实验动物在亲缘关系上与人类更为接近,在解剖、生理生化代谢及疾病发病机制等多方面与人类更接近,使它们在复制人类疾病模型,研究疾病发病机制和新药研发等中有无可替代的应用。而制备遗传工程大动物可以更深入地解析人类疾病,并可为器官移植和新药研发提供更充分的实验材料。基于慢病毒介导的转基因方法近几年已越来越多地被用来制备遗传工程猴和小型猪。与传统的原核显微注射方法和体细胞核移植法相比,慢病毒介导的转基因方法转基因效率高,操作更简单。因此,构筑基于慢病毒介导的转基因方法制备遗传工程猴和小型猪的技术平台将对生物医学研究产生巨大推动作用。

转基因动物研究进展

转基因动物技术始于 2 0世纪 80年代 ,近 3 0年来 ,随着研究的深入 ,转基因动物的制作技术得到了突破性的发展。最初的原核注射法是应用最普遍、最可靠、效果最稳定的一种方法。但该方法存在价格昂贵 ,整合率低及不能定点整合的问题 ,所以近几年来转基因动物技术已出现了胚胎干细胞法 ,精子载体法 ,体细胞核移植法和人工酵母染色体法等一系列新方法。随着这些技术的不断发展 ,转基因动物技术应用正以其突出的优越性指导着多个领域的工作。目前 ,它的应用已渗透到基础理论、疾病动物模型、人异种器官移植、制药、畜牧兽医等领域。转基因动物应用正走向产业化的道路 ,具有十分广阔的前景。但作为一个新兴的技术 。

转基因鱼

本文综述了转基因鱼研究的进展,并介绍了目的基因的选择及其导入的主要方法。此外,还对转基因鱼研究中尚存的一些问题作了说明。 自从八十年代中期开始鱼类基因转移研究以来,进展非常迅速。1985年Zhu等成功地将带有小鼠重金属结合蛋白(mMT)启动子的人生长激素(hGH)基因导入鲫鱼受精卵,并获得生长速度快的子代鱼。随后,世界一些国家开展了鱼类基因转移的研究,并取得很大成就。本文拟对转基因鱼研究现状及尚存的问题作一概述,供研究者参考。

转基因鸡制备方法的研究进展

在获得转基因哺乳动物的基础上,由于禽类(鸡)作为生物反应器本身所具有的优势,许多研究者投向制备转基因鸡的研究上。本文简要叙述了常用的制备转基因鸡的方法。其中,结合本实验室的情况,重点介绍了胚盘直接注射法。

转基因小鼠——一种新型实验动物

转基因小鼠是通过人工的方法把外源基因整合到小鼠生殖细胞培育而成的携带外源基因的小,鼠它能把该基因传递给后代。 Gordon等首次将克隆化基因注入小鼠受精卵,再移植于假孕雌鼠输卵管中,育成了转基因小鼠[‘’。尔后,国内外许多学者纷纷从事这方面的研究,并成功地将10多种基因导入小鼠体内,得到各型转基因小鼠。本文简要介绍特基因小鼠培育的方法和意义。

角质细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的研制

本研究采用转基因技术中最常用的受精卵原核显微注射法,制备角质细胞特异性表达Cre重组酶转基因小鼠。我们将经过超排处理的供体雌鼠拉颈处死,从其输卵管壶腹部取出卵丘细胞团,用透明质酸酶消化、清洗,得到形态饱满、极体和双原核明显的受精卵培养。将构建好的包括角质细胞特异性角质素5(K5)启动子、Cre重组酶基因和人生长激素(hGH)polyA的转基因载体pK5-Cre-hGH制备成一定浓度的注射片段,通过显微注射的方法将4.2 kb的转基因片段引入小鼠受精卵的雄原核。共注射了720枚受精卵,移植至29只假孕母鼠的输卵管中发育,获得子代小鼠48只,经PCR鉴定有12只小鼠在基因组上整合有Cre基因,整合率为25%。此结果通过Southern杂交得到进一步证实。

转基因动物与动物营养

1 转基因技术 1.1 显微注射法 在众多转基因技术中,显微注射法因其出现早,研究深入,被推荐为一种最经典有效的方法。显微注射法的基本原理是将外源基因直接用显微注射器注入受精卵(雄原核)内,利用受精卵分裂繁殖中DNA的复制过程,将外源基因整合到DNA中进行表达。显微注射法的优点是导人外源基因的效率较高,常能获得良好的表达,操作简单,易于掌握,注射的基因不受片段大小限制,无需载体。此法不足之处为外源基因绝大部分是头尾相连,拷贝数不等地随机整合到受体染色体上,因而其表达水平在转基因个体间常不稳定。另外,显微注射法不能将外源基因导入发育较晚阶段的胚胎细胞;显微注射法所针对的是受精卵,对一些单胎动物或少胎动物,加之低整合率,阳性后代出现的机率很少。

转基因技术及其在畜禽业上的应用

综述了动物转基因的常见操作方法,扼要介绍了转基因技术在畜禽业上的应用概况,转基因动物中出现的问题,并展望了转基因产品的应用前景。

我国转基因动物研究概况

转基因动物是指用实验方法导入的外源基因在染色体基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。自从80年代初美国科学家首次将大鼠生长激素基因导入小鼠受精卵雄性原核中,获得了个体比对照大一倍的转基因“超级鼠”后,转基因猪、鱼、兔和羊等相继问世,为动物基因工程育种提供了新的途径。本文仅就笔者收集到的资料对国内转基因动物的研究作一简要介绍。