体外受精和卵胞浆单精子注射完全受精失败的临床因素分析

【目的】分析体外受精(IVF)和卵胞浆内单精子注射(ICSI)治疗中完全受精失败(TFF)发生的临床原因。【方法】收集本中心2007年1月至2011年5月间辅助生殖治疗数据,分IVF组(5778例)、half-ICSI组(146例)、ICSI组(821例)和PESA-ICSI组(274例)进行χ2检验、t-检验和Logistic回归分析等统计分析,并对部分ICSI完全受精失败卵母细胞进行免疫荧光染色和激光共聚焦显微镜观察。【结果】IVF组和ICSI组TFF发生率分别为2.1%和2.3%(P>0.05);half-ICSI组IVF部分TFF发生率为21.9%,显著高于其他各组(P<0.01)。除half-ICSI组,其他各组中获成熟卵数≤3的患者TFF发生率高于获成熟卵数>3患者(P<0.01)。单纯畸精子症对IVF和ICSI治疗周期受精结果的影响无统计学意义(P>0.05),且前次IVF受精失败不影响再次ICSI的受精结局(P>0.05),但少精和弱精是辅助生殖治疗周期受精失败的高危影响因素(P<0.05)。【结论】低获卵数是辅助生殖治疗中完全受精失败的高危因素,获取适当数目成熟卵母细胞是治疗成功的关键;畸精子症对IVF或ICSI的受精结局无显著影响;ICSI治疗是前次IVF治疗完全受精失败患者的首选。

IVF完全受精失败周期分半IVF/ICSI和Re-ICSI结果比较

在体外受精-胚胎移植（IVF—ET）治疗中，有5％～10％完全受精失败。本中心对不明原因原发不孕5年以上可能存在精卵结合障碍的患者，在IVF第1周期分别采用分半IVF／ICSI（Half—ICSI）和短时受精联合早期补救ICSI（Re—ICSI）方法，以期提高妊娠成功率。本文回顾性分析在常规IVF完全受精失败周期，两种方法的受精率、卵裂率、优胚率及妊娠结局。

ICSI完全受精失败的机制、原因及处理

卵胞浆内单精子注射(ICSI)已广泛用于治疗男性因素不育,但ICSI后完全受精失败(total fertilization failure,TFF)的发生率仍有1%~4%。卵子激活失败(oocyte activation failure,OAF)是ICSI-TTF的主要机制。本文综述了卵母细胞激活的机制、ICSI-TTF的发生机制和原因、OAF的鉴别方法以及相应的处理策略。

线粒体ND6基因变异和完全受精失败的相关性

目的:探讨线粒体ND6基因变异与完全受精失败的相关性。方法:2011年7月至2014年4月,共收集了232例新鲜IVF周期或者half-ICSI周期中的汉族人精子进行回顾性对照研究。研究组45例精子来源于IVF完全受精失败,对照组187例精子来源于正常受精夫妇的精子(受精率>50%)。精子线粒体的基因变异是通过巢式PCR和DNA测序来确定。结果:共发现21个纯合变异,其中7个纯合变异具有统计学意义(P<0.05),它们分别是:m.14182T>C(4.44%vs 0%)、m.14284C>T(4.44%vs 0%)、m.14362C>T(4.44%vs 0%)、m.14386T>C(4.44%vs 0%)、m.14457T>C(4.44%vs 0%)、m.14494T>C(6.67%vs 0%)和m.14659C>T(4.44%vs 0%),其中m.14457T>C变异为错义变异。另外,新发现1个纯合变异14170A>T。结论 :精子线粒体ND6基因m.14182T>C、m.14284C>T、m.14362C>T、m.14386T>C、m.14457T>C、m.14494T>C和m.14659C>T等7个位点变异可能是发生完全受精失败的危险因素。

不同时间行早期补救ICSI在IVF完全受精失败周期中的临床结局

目的探讨短时授精后判定为完全受精失败患者于不同时间行补救ICSI的临床结局。方法回顾性分析2010年1月至2019年4月在南京医科大学第一附属医院临床生殖医学中心行短时授精后完全受精失败的补救ICSI周期。符合纳入标准的病例共607个周期,根据IVF授精后行补救ICSI时间的不同分为4组:授精后4~5 h(A组,n=55);B组:授精后5~6 h(B组,n=219);C组:授精后6~7 h(C组,n=117);授精后>7 h(D组,n=216)。统计分析各组患者的一般临床资料、实验室数据和临床结局指标。结果4组的正常受精率、多精受精率、卵裂率和流产率比较均无统计学差异(P>0.05);D组的优质胚胎率显著低于其他3组(50.91%vs.59.14%、63.14%、56.80%)(P<0.05);D组的临床妊娠率、胚胎着床率和每移植周期活产率均低于其他3组,且与B组和C组有统计学差异(P<0.05)。结论对于短时授精发生完全受精失败的周期,授精后4~7 h行补救ICSI可获得理想的临床结局,其中授精后5~6 h行补救ICSI的临床结局最好,应尽量避免授精后7 h行补救ICSI。

卵胞浆内单精子显微注射完全受精失败的原因和处理对策

卵胞浆内单精子注射(ICSI)中发生完全受精失败(TFF)的发生率是1%~4%。发生ICSI-TFF的原因可能是卵母细胞激活失败、卵子质量差、精子异常、ICSI的实验室技术和环境等,临床对策有卵母细胞人工激活、形态学选择性单精子卵胞浆内显微注射、优化促排卵方案、供精或供卵等。本文对ICSI-TFF发生可能的原因及临床对策进行了综述。

PLCG1、KIF2B和KIF4B基因与完全受精失败的相关性分析

目的筛选与完全受精失败相关的基因,探讨完全受精失败的分子机制。方法对64对IVF完全受精失败夫妇(实验组)和157对IVF受精正常夫妇(对照组)进行全外显子测序,AdapterRemoval软件对测序结果进行处理,采用Sentieon软件的Haplotyper算法进行单核苷酸多态性(SNP)检测,根据不同分组SNP位点的突变频率,采用R语言chisq.test(data)命令进行卡方检验(chi-square test),分析找到完全受精失败相关的候选基因,使用公共数据库对候选基因的功能进行分析。结果在女性和男性群体中分别获得148和120个与完全受精失败相关的候选基因,分别含有164和132个突变位点。经基因显著性分析及数据库功能验证,在女性群体中筛选到与完全受精失败相关的PLCG1基因(rs2228246),实验组的突变率[6.15%(4/64)]显著高于对照组(0/157)(P<0.05)。在男性群体中发现与完全受精失败相关的KIF2B(rs76337756)和KIF4B(rs10056252)基因,实验组中突变率为4.61%(3/64),显著高于对照组(0/157)(P<0.05)。结论在IVF完全受精失败夫妇中筛选到PLCG1、KIF2B和KIF4B基因,这为后期探究完全受精失败过程中的分子机制奠定基础。

体外受精中的受精失败

受精是雌雄配子结合形成合子的过程,它标志着一个新生命的开始,是自然界最神秘和复杂的事件之一.受精失败（Total fertilization failures, TFF）特指在体外受精（in vitro fertilization, IVF）培养过程的一定时段内[包括常规受精和卵胞浆内单精子注射（ICSI）],精卵没能结合为合子,形态学上没有看到精原核和卵原核形成的状态.

畸形精子症与常规体外受精失败

目的:回顾性分析常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中受精完全失败的可能原因。方法:选择在2007年1月至2008年8月期间完成的第1次常规体外受精病例,共552对夫妇。男方的精子要求为:妻子取卵当日精液处理后a+b级精子总数>1×106,在术前1年内,按照Kruger/Tygerberg标准,精子畸形率<96%者。结果:552对夫妇中,515对常规体外受精成功,占93.3%,其受精率为:78.67%,此组为受精组;37对受精完全失败,发生率为6.7%,为受精失败组。将两组进行比较,受精失败组中原发不孕和畸形精子症的比例显著高于受精组(P<0.05),而两组促排卵天数、获卵数、促性腺激素用量、男女方年龄、长短方案的应用及少弱精子症的比例均没有显著性差异。结论:按照Kruger严格评分法对于男方畸形精子症者,应考虑行部分卵子ICSI,以避免受精失败。

齿轮状透明带卵母细胞受精失败分析

目的:研究齿轮状透明带卵母细胞的受精、胚胎发育和临床妊娠结局。方法:选取2010年1月至2016年12月在湖北医药学院附属人民医院生殖医学中心就诊且由于齿轮状透明带卵母细胞导致IVF治疗周期中完全受精失败的12例不孕患者和透明带形态正常治疗周期完全受精失败的82例患者为研究对象。将前者12例患者设为实验组,后者82例患者设为对照组。分析比较两组患者年龄、不孕类型、不孕年限、促排卵时间、Gn总用量、HCG日E2和LH水平、获卵数、MII卵数、卵裂率、优胚率、胚胎种植率、临床妊娠率等。结果:实验组患者ICSI受精率稍低于对照组ICSI受精率,其差异无统计学意义;实验组第5天囊胚形成率明显低于对照组第5天囊胚形成率,其差异具有统计学意义;其余各项指标两组差异均无统计学意义。结论:这类齿轮状透明带形态的卵母细胞常规体外受精会导致受精失败,早期识别此类卵母细胞并进行及时的补救ICSI,可以改善临床妊娠结局。

精子存活率对完全受精失败的影响

目的探讨精子存活率对IVF短时受精完全受精失败的影响。方法对精液未见明显异常,获卵数≥8个的,MII卵数≥6个的第一周期IVF周期(卵母细胞未见明显异常)患者,行短时受精。分别计数完全受精失败(total fertilizatian faiure,TFF)组和正常受精组受精皿和受精管中8 h和24 h精子活力,计算精子活力系数(sperm motility index,SMI)。结果本研究共纳入短时受精80个周期(正常受精组50周期,TFF组30周期)。两组一般情况无统计学差异;TFF组与正常受精组比较:8 h受精皿SMI(0.892±0.042 vs.0.920±0.027),受精管SMI(0.895±0.039 vs.0.917±0.025)均明显降低(P<0.05);24 h受精皿SMI(0.830±0.039 vs.0.851±0.027),受精管SMI(0.827±0.038 vs.0.849±0.027)均明显降低(P<0.05)。结论8 h和24 h SMI可作为预测精子TFF的指标。

不孕类型和不孕年限与常规体外受精结局的相关性分析

目的分析不孕类型和年限与常规体外受精(IVF)失败的相关性。方法回顾性分析内蒙古医科大学附属医院生殖医学中心2014年3月-2016年10月常规体外受精周期1 128个。根据不孕类型分为原发不孕组和继发不孕组,比较两组间不孕年限不同时间段的受精结局。结果 (1)原发不孕组与继发不孕组在受精率(69.36%vs 72.99%)、正常受精率(60.48%vs 62.00%)、卵裂率(94.96%vs 95.84%)、早期补救卵胞浆内单精子注射(ICSI)率(8.96%vs 2.23%)比较,差异有统计学意义(χ~2=27.175、4.085、4.494和22.775,P=0.000、0.043、0.043和0.000);(2)两组不孕年限不同时间段比较,原发不孕组中不孕年限4~6年及大于6年的受精失败率高于继发不孕组,差异有统计学意义(χ~2=4.528和4.580,P=0.034和0.049)。结论行常规IVF受精时,原发不孕及不孕年限长的患者存在受精失败的风险较高,建议行短时受精并及时进行早期补救ICSI。

短时受精卵丘消化程度对IVF结局的影响

目的:探讨短时受精去颗粒细胞时卵丘消化程度对受精情况的影响。方法:共纳入187个周期,根据卵冠丘复合物消化程度分为完全消化(84例)和未完全消化组(103例),比较两组实验室数据。结果:完全消化组MII卵数、MII卵率(11.1±4.9,86.7%)高于未完全消化组(9.9±5.4,79.2%)(P<0.05)。体外受精(IVF)受精正常周期和补救卵胞浆内单精子注射(ICSI)周期(部分Re-ICSI、全部Re-ICSI)所占比例均无差异(P>0.05)。IVF受精正常周期163例,完全消化组74例,未完全消化组89例,完全消化组MII卵数、MII卵率(10.4±4.7,86.0%)高于未完全消化组(9.7±5.1,79.0%)(P<0.05),IVF受精率、2PN受精率、2PN卵裂率、可用胚胎数、可用胚胎率、优质胚胎率均无差异(P>0.05)。结论:卵丘-卵母细胞复合物消化完全与否不影响IVF受精结局,故不能作为预测IVF受精情况,但其与卵子成熟度有关。

同周期同胞卵实施卵胞浆内单精子注射和常规体外受精增加受孕机会

目的 :比较分析同周期同胞卵分别实施常规体外受精 (IVF)和卵胞浆内单精子注射 (ICSI)的结果和临床预后 .方法 :选择我中心实施体外受精 胚胎移植中的 4 3个治疗周期 ,将同周期同胞卵分成IVF组和ICSI组 ,使用相同的精液标本分别实施IVF和ICSI (IVF +ICSI) ,进行比较分析 .结果 :ICSI组受精率为 6 4 .5 % ,高于IVF组 5 2 .8%的受精率 (P <0 .0 1 ) ;完全受精失败的IVF组占 1 1 .6 % ,而ICSI组无一例完全受精失败 ;ICSI组的优良胚胎率为 6 0 .8% ,显著高于IVF组 30 .1 % (P <0 .0 1 ) ;卵裂率分别为 97.1 %和96 .7% ,无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;用于移植的胚胎数ICSI组为 1 2 0个占总移植胚胎数的 6 3.5 % ,IVF组为 6 9个占36 .5 % ;IVF +ICSI总的植入率 1 7.5 % ,显著高于同期单纯实施IVF 1 0 .4 %和单纯实施ICSI 9.8% (P <0 .0 1 ) ;取卵周期临床妊娠率同我中心同期单纯实施IVF和单纯实施ICSI比较 ,具有统计学意义 (P <0 .0 1 ) ,分别为 4 1 .9% ,2 6 .2 %和 2 8.1 % ;抱婴回家率为 77.8% .结论 :同周期同胞卵分别实施常规IVF和ICSI总体上能改善胚胎质量增加受孕机会并提高临床妊娠率 .

体外受精-胚胎移植中完全受精失败的原因分析

目的:寻找预测体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中受精失败的可能因素。方法:回顾性分析IVF-ET中完全受精失败患者(研究组,n=32)不孕年限、发病史、促排天数、hCG注射日的性激素水平[LH、E2和孕酮(P)]、精子表面抗体IgG混合凝集反应(MRA)、抗精子抗体、精子畸形率等指标,并匹配同一日取卵,放在同一培养箱受精率≥50%的IVF-ET患者作为对照组(n=56)。结果:研究组在不孕年限、超促排卵天数、原发比例、hCG注射日P水平>3.12 nmol/L的比例及严重畸形精子(畸形率>95%)比例显著高于对照组,分别为6.4±3.1年、12.6±2.2 d、56%、43%、43%比4.6±2.9年、11.6±1.3 d、33%、23%、23%(P<0.05或P<0.01)。结论:原发性不孕患者,不孕年限及超促排卵天数较长(>6.4年和>12.6 d)同时合并有hCG注射日P水平升高(>3.12 nmol/L)或畸精子率>95%,应将该患者纳入受精失败的高危人群。

透明带形态异常卵母细胞在IVF完全受精失败后行补救ICSI的临床结局

目的:研究透明带形态异常卵母细胞的受精、胚胎发育和临床结局。方法:以在IVF完全受精失败(TFF)周期中透明带形态异常的15名患者为研究组(A组),非透明带形态异常的完全受精失败周期的63例患者为对照组(B组),回顾性分析比较患者的一般临床情况、IVF结局及行补救ICSI(R-ICSI)的临床结局。结果:除受精率组间有显著性差异(65.52%vs 78.86%,P<0.01)外,其余各指标(年龄、不孕年限、不孕类型、不孕原因、基础内分泌水平、基础卵泡数、降调节天数、Gn使用天数、Gn使用总量、hCG注射日直径≥16 mm卵泡数、hCG注射日E2、P和LH水平、获卵数、MII卵数、行R-ICSI的受精率、卵裂率、优质胚胎率、种植率、临床妊娠率和流产率)组间均无统计学差异。结论:IVF完全受精失败周期透明带形态异常卵母细胞行R-ICSI虽受精率较低,但及早发现受精失败并行R-ICSI,可使65.52%的卵子受精,从而改善临床结局。

精子低渗肿胀试验在短时受精完全受精失败中的作用

目的比较精子低渗肿胀试验(HOS)亚型在短时受精完全受精失败组和正常受精组中的区别。方法短时受精补救单精子卵泡浆内显微注射(RE-ICSI)的为完全受精失败组(TFF),受精正常的为对照组。HOS根据精子尾部肿胀部位分为HOS 1、HOS 2、HOS 3和HOS 4等4个亚型,排除自发的精子尾部肿胀(SDTS),在精液密度梯度离心处理前和处理后分别计数HOS的4个亚型和SDTS。结果精液密度梯度离心处理前,TFF组和对照组HOS 1、HOS 2、HOS 3和HOS 4比较,差异均无统计学意义(P>0.05);除外SDTS后,两组HOS 1、HOS 2、HOS 3和HOS 4比较差异均无统计学意义(P>0.05)。精液密度梯度离心处理后,TFF组和对照组HOS 1、HOS 2、HOS 3和HOS 4比较,差异均无统计学意义(P>0.05);除外SDTS后,两组HOS 1、HOS 2和HOS 4比较,差异均无统计学意义(P>0.05),对照组HOS 3明显高于TFF组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论精液密度梯度离心在除外SDTS后HOS 3低的患者应警惕IVF受精失败的可能。但有部分患者HOS 3与对照组相似,这部分患者完全受精失败的原因可能是卵子方面的原因。

短时受精补救ICSI后完全受精失败一例及原因初探

病例：患者女,40岁,1994年结婚,婚后未避孕,2008年妊娠,孕50天自然流产,行清宫术,术后未避孕,至今未育。男方精液密度为15.6×106/ml,精子活动力a＋b为18.3%。因双方年纪较大,采用辅助生殖助孕。患者采用GnRHA;;方案促排卵,得卵21枚,加精子6h后,拆卵观察,见MⅡ卵16个,MⅠ卵1个,GV卵4个。16个成熟卵均未见第二极体,

男性大Y染色体核型早补ICSI完全受精失败一例

病例：患者女,28岁,2003年结婚,婚后同居,性生活正常未避孕未育。初潮年龄14岁,月经周期3-5/30-50天,输卵管通液数次诉双侧输卵管通畅。2005年外院子宫输卵管造影（HSG）示子宫大小形态正常,右侧输卵管远端积水,左侧伞端粘连,间质部狭窄。身高168cm,体重52kg。