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表达小鼠精子受精素β胞外区减毒沙门菌疫苗株的构建 被引量:1
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作者 李彦锋 靳风烁 +2 位作者 何畏 王洛夫 靳文生 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2001年第4期215-219,共5页
目的 :构建表达鼠精子抗原受精素 β亚单位 (Fβ)胞外区的可口服减毒沙门菌活疫苗株。 方法 :设计一对引物 ,应用PCR方法获得Fβ 胞外区cDNA片断 ,将其插入表达载体pYA3 14 9中 ,构建重组质粒pFEC ,将该重组质粒转入鼠沙门菌疫苗株X4 6... 目的 :构建表达鼠精子抗原受精素 β亚单位 (Fβ)胞外区的可口服减毒沙门菌活疫苗株。 方法 :设计一对引物 ,应用PCR方法获得Fβ 胞外区cDNA片断 ,将其插入表达载体pYA3 14 9中 ,构建重组质粒pFEC ,将该重组质粒转入鼠沙门菌疫苗株X4 63 2 ,获得杂合菌株X4 63 2 (pFEC)。该重组菌口服免疫雌鼠 ,通过ELISA方法检测其诱导雌鼠血清IgG抗体和阴道分泌物IgA抗体滴度变化。 结果 :此疫苗株X4 63 2 (pFEC)可稳定表达被Fβ 抗体识别的重组Fβ 胞外区蛋白 ,口服该菌株不但可激发雌鼠产生高水平血清抗重组Fβ 蛋白IgG抗体 ,而且在阴道分泌物中可出现一定程度抗重组Fβ 蛋白IgA抗体 ,无明显毒性作用。 结论 :X4 63 2 (pFEC)疫苗株的构建为研究以Fβ 为靶抗原的精子抗原避孕疫苗打下了基础。 展开更多
关键词 受精素 沙门菌 疫苗 避孕 精子抗原
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表达人受精素β去整合素结构域的重组沙门菌疫苗株的构建 被引量:1
2
作者 张军 靳风烁 +1 位作者 江军 李彦锋 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期520-522,共3页
目的 构建表达人受精素 β去整合素结构域的重组沙门菌疫苗株。 方法 应用PCR方法获得人受精素 β去整合素结构域的cDNA片断 ,将其插入高拷贝表达载体pYA3 3 3 9中 ,构建重组质粒pYA3 3 3 9 hf2 79,将该重组质粒转入鼠沙门菌疫苗株X45... 目的 构建表达人受精素 β去整合素结构域的重组沙门菌疫苗株。 方法 应用PCR方法获得人受精素 β去整合素结构域的cDNA片断 ,将其插入高拷贝表达载体pYA3 3 3 9中 ,构建重组质粒pYA3 3 3 9 hf2 79,将该重组质粒转入鼠沙门菌疫苗株X45 5 0 ,获得重组菌株X45 5 0 (pYA3 3 3 9 hf2 79)。结果 该重组疫苗株可稳定表达能被抗人受精素 β多克隆抗体识别的重组蛋白HF93 ,其分子量约为 16× 10 3。结论 该疫苗株的构建为进一步研究以人受精素 展开更多
关键词 受精素 去整合 沙门菌 基因重组
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精子抗原受精素β的研究进展 被引量:2
3
作者 张军 李彦锋 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2004年第1期52-54,58,共4页
受精素 β是精子表面特异性抗原 ,主要通过其去整合素结构域在受精过程中发挥重要的生理功能。本文对受精素β的蛋白质结构、定位及在受精过程中的作用进行了综述 ,并提出受精素 β可作为免疫避孕疫苗研究中重要的靶分子 。
关键词 受精素β 精子 免疫避孕 疫苗 精子抗原
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鼠受精素β亚单位胞外区的真核表达质粒pSG.SS.YL-F_β.ECD的构建与表达 被引量:1
4
作者 孙中义 靳风烁 +1 位作者 李彦锋 张军 《重庆医学》 CAS CSCD 2007年第9期832-833,共2页
目的构建表达鼠受精素β(Fβ)胞外区的真核表达重组质粒pSG.SS.YL-Fβ.ECD并对其表达进行检测。方法应用PCR方法获得鼠Fβ的cDNA片断,将其插入pSG.SS.YL中,经酶切鉴定正确后转染HEK293细胞,并利用间接免疫荧光结合激光共聚焦技术对Fβ... 目的构建表达鼠受精素β(Fβ)胞外区的真核表达重组质粒pSG.SS.YL-Fβ.ECD并对其表达进行检测。方法应用PCR方法获得鼠Fβ的cDNA片断,将其插入pSG.SS.YL中,经酶切鉴定正确后转染HEK293细胞,并利用间接免疫荧光结合激光共聚焦技术对Fβ的表达进行检测。结果构建成功后的pSG.SS.YL-Fβ.ECD在HEK293细胞中能够表达Fβ。结论Fβ在真核细胞中的成功表达为后续研究Fβ的高表达对受精过程的影响奠定了基础。 展开更多
关键词 受精素β亚单位 载体构建 表达 间接免疫荧光
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小鼠受精素β亚单位真核表达载体pSG.SS.C3d3.YL-F_β构建及在HEK293细胞中的表达分析
5
作者 孙中义 靳风烁 +1 位作者 李彦锋 张军 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2007年第4期297-301,共5页
目的:构建表达小鼠受精素β去整合素结构域(Fβ)的真核表达重组载体pSG.SS.C3d3.YL-Fβ,并对其在HEK293细胞中的表达进行分析。方法:应用PCR方法获得Fβ的cDNA片断,将其插入pSG.SS.C3d3.YL中,经酶切鉴定正确后转染HEK293细胞,并利用间... 目的:构建表达小鼠受精素β去整合素结构域(Fβ)的真核表达重组载体pSG.SS.C3d3.YL-Fβ,并对其在HEK293细胞中的表达进行分析。方法:应用PCR方法获得Fβ的cDNA片断,将其插入pSG.SS.C3d3.YL中,经酶切鉴定正确后转染HEK293细胞,并利用间接免疫荧光结合激光共聚焦技术、Western印迹技术、免疫组织化学染色技术及流式细胞仪检测技术对Fβ的表达进行检测。结果:成功构建了Fβ的真核表达重组载体pSG.SS.C3d3.YL-Fβ,该重组载体在HEK293细胞中能够表达Fβ。结论:Fβ在真核细胞中的成功表达为后续研究Fβ的高表达对受精过程的影响奠定了基础。 展开更多
关键词 受精素β亚单位 载体构建 表达 间接免疫荧光 HEK293细胞 小鼠
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受精素和整合素在哺乳动物精卵质膜融合过程中是必需的吗?
6
作者 李世峰 严缘昌 李逸平 《生命的化学》 CAS CSCD 2004年第2期98-100,共3页
精子膜蛋白受精素 (fertilin)和卵子膜蛋白整合素 (integrin)是精卵质膜融合侯选蛋白中最受关注之一 ,认为它们之间的相互作用介导了精卵质膜的融合。最近的基因剔除研究结果显示 ,受精素被剔除的精子和整合素α6 β1被剔除的卵子仍具... 精子膜蛋白受精素 (fertilin)和卵子膜蛋白整合素 (integrin)是精卵质膜融合侯选蛋白中最受关注之一 ,认为它们之间的相互作用介导了精卵质膜的融合。最近的基因剔除研究结果显示 ,受精素被剔除的精子和整合素α6 β1被剔除的卵子仍具有一定的受精能力 ,因此 ,受精素和卵子整合素在精卵质膜融合中的重要作用值得进一步研究。 展开更多
关键词 精卵融合 受精素 整合
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精子膜蛋白受精素(Fertilin)研究进展 被引量:1
7
作者 李林林 马恒东 《畜禽业》 2006年第4期35-37,共3页
精子膜蛋白受精素(Fertilin)是参与精卵质膜间相互作用最有特征性的候选分子之一。受精素由α、β两个亚基组成,为精子表面的异二聚体跨膜糖蛋白。fertilin-α(Fα)、Fertilin-β(Fβ)可能在精子发生、精子成熟、精子获能及精卵结合和... 精子膜蛋白受精素(Fertilin)是参与精卵质膜间相互作用最有特征性的候选分子之一。受精素由α、β两个亚基组成,为精子表面的异二聚体跨膜糖蛋白。fertilin-α(Fα)、Fertilin-β(Fβ)可能在精子发生、精子成熟、精子获能及精卵结合和融合中发挥重要作用。 展开更多
关键词 受精素 受精精卵结合/融合
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受精素β基因mRNA在绵羊睾丸组织中的表达
8
作者 娜仁花 旭日干 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第3期44-46,共3页
利用RT-PCR法和原位杂交技术,研究受精素βmRNA在睾丸和附睾中的表达特征。结果显示,受精素βmRNA只有在睾丸组织中表达,并且主要分布在精细管上皮圆形精细胞中,而附睾不同部位均无表达。上述结果表明,受精素βmRNA是睾丸特异性表达的... 利用RT-PCR法和原位杂交技术,研究受精素βmRNA在睾丸和附睾中的表达特征。结果显示,受精素βmRNA只有在睾丸组织中表达,并且主要分布在精细管上皮圆形精细胞中,而附睾不同部位均无表达。上述结果表明,受精素βmRNA是睾丸特异性表达的精子膜蛋白。 展开更多
关键词 受精素β RT—PCR 原位杂交 绵羊
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受精素在精卵结合与融合中作用的研究进展
9
作者 张进隆 《动物医学进展》 CSCD 2006年第7期27-30,共4页
哺乳动物的受精过程是一个十分复杂的动态过程,在这一过程中,精子表面的膜蛋白发挥着重要作用。受精素α和β是精子表面的膜蛋白,也是精子表面的特异性抗原。研究发现小鼠和人的受精素基因分别位于5号和8号染色体,只在睾丸中特异性表达... 哺乳动物的受精过程是一个十分复杂的动态过程,在这一过程中,精子表面的膜蛋白发挥着重要作用。受精素α和β是精子表面的膜蛋白,也是精子表面的特异性抗原。研究发现小鼠和人的受精素基因分别位于5号和8号染色体,只在睾丸中特异性表达。受精素β在精子成熟前分布于整个头部,要在附睾成熟后受精素只分布于头后部区域。受精素β基因敲除的小鼠精子与卵细胞的结合能力明显下降,特异性抗体的抑制作用及合成肽竞争性抑制作用可以抑制精卵结合。受精素β通过去整合素与卵细胞表面的整合素结合,在精卵细胞的结合中发挥着重要的作用。精卵质膜的融合主要是由Izumo蛋白完成。 展开更多
关键词 受精素 精卵结合 融合 作用
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精子膜表面糖蛋白受精素β的研究进展 被引量:1
10
作者 丽娜 付琳 +1 位作者 梁磊 娜仁花 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第8期85-88,共4页
作为少数几种在精卵质膜结合与融合中发挥重要作用的精子膜表面蛋白之一,受精素β是多种哺乳动物精子均具有的重要物质。它是ADAMs家族的一种融合蛋白,具有ADAMs家族的完整结构域;同时,因其结构域中去整合素区域的结构特点在精卵质膜结... 作为少数几种在精卵质膜结合与融合中发挥重要作用的精子膜表面蛋白之一,受精素β是多种哺乳动物精子均具有的重要物质。它是ADAMs家族的一种融合蛋白,具有ADAMs家族的完整结构域;同时,因其结构域中去整合素区域的结构特点在精卵质膜结合与融合过程中扮演着重要角色,而被认为是一种重要的疫苗靶抗原。 展开更多
关键词 受精素β 去整合结构域 精卵结合与融合
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表达鼠精子受精素β的减毒沙门菌疫苗株的构建
11
作者 李彦锋 靳风烁 +2 位作者 何畏 王洛夫 靳文生 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期487-490,共4页
目的 构建表达鼠精子抗原受精素 β亚单位 (Fβ)的可口服减毒沙门菌活疫苗株。 方法 通过酶切从克隆载体TOPO中获得FβcDNA片段 ,将其插入表达载体PYA314 9中 ,构建重组质粒pFFL ,将该重组质粒转入鼠沙门伤寒杆菌疫苗株X4 6 32 ,获... 目的 构建表达鼠精子抗原受精素 β亚单位 (Fβ)的可口服减毒沙门菌活疫苗株。 方法 通过酶切从克隆载体TOPO中获得FβcDNA片段 ,将其插入表达载体PYA314 9中 ,构建重组质粒pFFL ,将该重组质粒转入鼠沙门伤寒杆菌疫苗株X4 6 32 ,获得重组菌株X4 6 32 (pFFL) ,行Westernblot分析及初步毒性试验。 结果 此无抗药性的重组菌株X4 6 32 (pFFL)可稳定表达被Fβ 抗体识别的重组Fβ 蛋白 ,口服该菌株无明显毒性作用。 结论 该疫苗株的构建为研究以Fβ 为靶抗原的精子抗原避孕疫苗打下了基础 ,值得进一步行诱导免疫观察。 展开更多
关键词 表达 精子受精素β 减毒沙门菌疫苗株 构建 避孕 疫苗
原文传递
精子去整合素和卵子整合素在受精过程中的作用
12
作者 田新勇 洪梅 张树民 《国外医学(计划生育分册)》 2001年第1期9-13,共5页
迄今为止的研究揭示了许多能介导精卵相互作用的分子。精子至少有三种去整合素(α-受精素、β-受精素和Cyritestrin)可介导精卵的结合;在卵子方面则有多种整合素。α-6/β-1整合素似乎能作为β受精素的受体发挥功能。同时,其它一些精子... 迄今为止的研究揭示了许多能介导精卵相互作用的分子。精子至少有三种去整合素(α-受精素、β-受精素和Cyritestrin)可介导精卵的结合;在卵子方面则有多种整合素。α-6/β-1整合素似乎能作为β受精素的受体发挥功能。同时,其它一些精子去整合素及精子表面的其它整合素也可能与α-6/β-1这一受体结合。而β受精素也能与其它一些受体结合。α受精素含有一个去整合素结构域,其胞外段的另一部分与卵子胞膜的相互作用有关,提示它也可能具有多个受体。 展开更多
关键词 去整合 受精素 整合 受精 精子 卵子
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ADAMs与哺乳动物受精 被引量:3
13
作者 徐存拴 熊蕾 卢龙斗 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期51-54,共4页
ADAMs是近几年发现的一类具有多个结构区和广泛生物学功能的糖蛋白 ,它们在哺乳动物受精中的作用日益得到实验结果的支持 ,本文简要总结了近几年ADAMs在哺乳动物受精中作用的研究进展。
关键词 哺乳动物 受精 ADAMS 受精素 整联蛋白
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精子膜抗原的研究新进展 被引量:13
14
作者 戈一峰 黄宇烽 《中华男科学杂志》 CAS CSCD 2003年第4期292-295,共4页
精子表面的膜抗原是精子发生成熟过程中的重要标志分子 ,对其深入研究有助于揭示精子发生成熟及受精过程的生理机制和不育的病理改变。本文回顾了近年来随着分子生物学技术的广泛应用 ,传统的一些重要的精子膜抗原相继得到了克隆和测序 ... 精子表面的膜抗原是精子发生成熟过程中的重要标志分子 ,对其深入研究有助于揭示精子发生成熟及受精过程的生理机制和不育的病理改变。本文回顾了近年来随着分子生物学技术的广泛应用 ,传统的一些重要的精子膜抗原相继得到了克隆和测序 ,一些新的表达精子膜抗原的基因也陆续被发现 ,为从蛋白水平进一步深入研究其功能以及免疫避孕疫苗的筛选奠定了基础。 展开更多
关键词 精子膜抗原 不育症 精子蛋白受精素 避孕 免疫性不育
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一种新的混合斑精子分离方法
15
作者 伍贤军 赵兵 +4 位作者 缪璇 钱程 王冰瑜 李晓萌 杨百全 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2015年第5期886-892,共7页
制备了精子表面膜抗原受精素β蛋白(Fertilinβ)的特异性抗体,通过抗原-抗体反应和抗体固相偶联技术,将抗体连接到琼脂糖球珠上,建立了混合斑精子分离纯化的新方法.首先,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增编码人受精素β蛋白第341~373位... 制备了精子表面膜抗原受精素β蛋白(Fertilinβ)的特异性抗体,通过抗原-抗体反应和抗体固相偶联技术,将抗体连接到琼脂糖球珠上,建立了混合斑精子分离纯化的新方法.首先,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增编码人受精素β蛋白第341~373位氨基酸的基因序列,构建PGEX-4T-1/Fertilinβ原核表达质粒;其次,诱导表达GST-Fertilinβ融合蛋白,制备受精素β蛋白多克隆抗体,免疫荧光检测结果表明,受精素β蛋白定位于精子的头后部,并且阴道上皮细胞没有受精素β蛋白的表达;最后,将受精素β抗体与ProteinA琼脂糖球珠连接构建固相抗体系统,将精子吸附于表面,可从混合斑(精子与阴道上皮细胞混合液)中分离纯化精子.本文为性犯罪案件侦破提供了新的方法. 展开更多
关键词 混合斑 受精素β蛋白 多克隆抗体
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Changes of Calmodulin Distribution in the Embryo Sac of Oryza sativa Before and After Fertilization: an Immunogold Electron Microscope Study 被引量:4
16
作者 杨军 赵洁 +1 位作者 梁世平 杨弘远 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2002年第3期264-272,共9页
Changes of calmodulin (CaM) distribution in the embryo sac of rice (Oryza sativa subsp. Japonica) at various stages before and after fertilization have been investigated by using immunogold electron microscopy. Before... Changes of calmodulin (CaM) distribution in the embryo sac of rice (Oryza sativa subsp. Japonica) at various stages before and after fertilization have been investigated by using immunogold electron microscopy. Before pollination, both cytoplasm and vacuoles of the egg cell, synergids and central cell were labeled by gold particles. A small amount of gold particles were localized in the nucleus, endoplasmic reticulum, mitochondria and dictyosomes. From pollination to fertilization, CaM amount increased in these cells, especially rich in the starch of amyloplasts. Increase of gold particles in the central cell began about 2 h earlier than that in the egg cell. There was no distinct difference of CaM amount between the degenerated and the persistent synergids. It is interesting to observe an obvious change of CaM distribution form during pollination and fertilization from scattered single particles to clustered particles, and back again to single particles after the fertilization finished. CaM was also localized extracellularly in the embryo sac wall as well as in the wall and intercellular space of nucellus cells. The extracellular CaM also changes in its amount and form after pollination. These results suggest that CaM, either intra- or extra-cellular, may play important roles in fertilization and zygote formation. 展开更多
关键词 CALMODULIN POLLINATION FERTILIZATION rice embryo sac immunogold electron microscope localization
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Effects of Cumulus Cells on in vitro Fertilization of Bovine 被引量:3
17
作者 佟桂芝 王洪宝 宋斌 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2017年第2期299-302,共4页
[Objective] The aim was to explore the effect of cumulus cells on the in vitro fertilization of in vitro matured bovine oocytes. [Method] The in vitro matured oocytes were divided into three groups of cumulus cells re... [Objective] The aim was to explore the effect of cumulus cells on the in vitro fertilization of in vitro matured bovine oocytes. [Method] The in vitro matured oocytes were divided into three groups of cumulus cells removal, partial removal and no removal. [Result] In the co-culture with cumulus cells, the oocytes of the removal group had higher cleavage rate and blastocyst rate (74.4%±4.1, 53.7%±5.1) than those of the no removal group (72.7%±5.1, 52.4%±3.5), but the difference was not significant (P〉0.05), while both groups had better performances than the re- moval group (39.6%±4.5, 18.8%±4.6) with the difference reaching the significant level (P〈0.05). All the three groups showed significant difference with the control. The combination of cumulus cells and melatonin achieved the best effects as the cleavage rate and blastocyst rate of the partial removal group (79.8%±3.7, 56.5%±5.1) were better than those of the no removal group (78.2%±2.6, 55.8%±4.6), and the difference was not significant, while both group had better performances than the removal group (48.3%±5.5, 22.7%±4.3) and the control group with the differences reaching the significant level (P〈0.05). [Conclusion] The study provided technical support for the production of dairy cows and beef cattle. 展开更多
关键词 Cumulus cells in vitro fertilization CO-CULTURE MELATONIN OPU Cleavage rate Blastocyst rate
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基础理论
18
《中国计划生育和妇产科》 2002年第5期2-258,共3页
关键词 米非司酮 基础理论 人精子 顶体反应率 卵母细胞 A23187 孤雌激活 受精素 考马斯亮蓝G250 表皮生长因子
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基础理论
19
《中国计划生育和妇产科》 2004年第4期241-242,共2页
关键词 基础理论 阴道毛滴虫 生殖细胞 顶体酶活性 精子蛋白 精原干细胞 神经营养因子 男科学 胶质细胞源性 受精素
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Innate immune reactivity of the liver in rats fed a choline-deficient L-amino-acid-defined diet 被引量:5
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作者 Hideto Kawaratani Tatsuhiro Tsujimoto +4 位作者 Toshiyuki Kitazawa Mitsuteru Kitade Hitoshi Yoshiji Masahito Uemura Hiroshi Fukui 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2008年第43期6655-6661,共7页
AIM: To investigate the innate immune reactivity of tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), Toll-like receptor 4 (TLR4), and CD14 in the liver of non-alcoholic steatohepatitis (NASH) model rats. METHODS: Male F3... AIM: To investigate the innate immune reactivity of tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), Toll-like receptor 4 (TLR4), and CD14 in the liver of non-alcoholic steatohepatitis (NASH) model rats. METHODS: Male F344 rats were fed a cholinedeficient L-amino-acid-defined (CDAA) diet. The rats were killed after 4 or 8 wk of the diet, and their livers were removed for immunohistochemical investigation and RNA extraction. The liver specimens were immunostained for TNF-α, TLR4, and CD14. The gene expressions of TNF-α, TLR4, and CD14 were determined by reverse-transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). Kupffer cells were isolated from the liver by Percoll gradient centrifugation, and were then cultured to measure TNF-α production. RESULTS: The serum and liver levels of TNF-~ in the CDAA-fed rats increased significantly as compared with the control group, as did the immunohistochemical values and gene expressions of TNF-α, TLR4, and CD14 with the progression of steatohepatitis. TNF-α production from the isolated Kupffer cells of the CDAAfed rats was elevated by lipopolysaccharide stimulation. CONCLUSION: The expressions of TNF-α, TLR4, and CD14 increased in the NASH model, suggesting that 展开更多
关键词 Nonalcoholic steatohepatitis Kupffer cells Toll-like receptor 4 CD14 ENDOTOXINS Tumor necrosisfactor-alpha
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