鼠受精素β亚单位胞外区的真核表达质粒pSG.SS.YL-F_β.ECD的构建与表达

目的构建表达鼠受精素β(Fβ)胞外区的真核表达重组质粒pSG.SS.YL-Fβ.ECD并对其表达进行检测。方法应用PCR方法获得鼠Fβ的cDNA片断,将其插入pSG.SS.YL中,经酶切鉴定正确后转染HEK293细胞,并利用间接免疫荧光结合激光共聚焦技术对Fβ的表达进行检测。结果构建成功后的pSG.SS.YL-Fβ.ECD在HEK293细胞中能够表达Fβ。结论Fβ在真核细胞中的成功表达为后续研究Fβ的高表达对受精过程的影响奠定了基础。

精子抗原受精素β的研究进展

受精素 β是精子表面特异性抗原 ,主要通过其去整合素结构域在受精过程中发挥重要的生理功能。本文对受精素β的蛋白质结构、定位及在受精过程中的作用进行了综述 ,并提出受精素 β可作为免疫避孕疫苗研究中重要的靶分子 。

小鼠受精素β亚单位真核表达载体pSG.SS.C3d3.YL-F_β构建及在HEK293细胞中的表达分析

目的:构建表达小鼠受精素β去整合素结构域(Fβ)的真核表达重组载体pSG.SS.C3d3.YL-Fβ,并对其在HEK293细胞中的表达进行分析。方法:应用PCR方法获得Fβ的cDNA片断,将其插入pSG.SS.C3d3.YL中,经酶切鉴定正确后转染HEK293细胞,并利用间接免疫荧光结合激光共聚焦技术、Western印迹技术、免疫组织化学染色技术及流式细胞仪检测技术对Fβ的表达进行检测。结果:成功构建了Fβ的真核表达重组载体pSG.SS.C3d3.YL-Fβ,该重组载体在HEK293细胞中能够表达Fβ。结论:Fβ在真核细胞中的成功表达为后续研究Fβ的高表达对受精过程的影响奠定了基础。

受精素β基因mRNA在绵羊睾丸组织中的表达

利用RT-PCR法和原位杂交技术,研究受精素βmRNA在睾丸和附睾中的表达特征。结果显示,受精素βmRNA只有在睾丸组织中表达,并且主要分布在精细管上皮圆形精细胞中,而附睾不同部位均无表达。上述结果表明,受精素βmRNA是睾丸特异性表达的精子膜蛋白。

精子膜表面糖蛋白受精素β的研究进展

作为少数几种在精卵质膜结合与融合中发挥重要作用的精子膜表面蛋白之一,受精素β是多种哺乳动物精子均具有的重要物质。它是ADAMs家族的一种融合蛋白,具有ADAMs家族的完整结构域;同时,因其结构域中去整合素区域的结构特点在精卵质膜结合与融合过程中扮演着重要角色,而被认为是一种重要的疫苗靶抗原。

表达小鼠精子受精素β胞外区减毒沙门菌疫苗株的构建

目的 :构建表达鼠精子抗原受精素 β亚单位 (Fβ)胞外区的可口服减毒沙门菌活疫苗株。 方法 :设计一对引物 ,应用PCR方法获得Fβ 胞外区cDNA片断 ,将其插入表达载体pYA3 14 9中 ,构建重组质粒pFEC ,将该重组质粒转入鼠沙门菌疫苗株X4 63 2 ,获得杂合菌株X4 63 2 (pFEC)。该重组菌口服免疫雌鼠 ,通过ELISA方法检测其诱导雌鼠血清IgG抗体和阴道分泌物IgA抗体滴度变化。 结果 :此疫苗株X4 63 2 (pFEC)可稳定表达被Fβ 抗体识别的重组Fβ 胞外区蛋白 ,口服该菌株不但可激发雌鼠产生高水平血清抗重组Fβ 蛋白IgG抗体 ,而且在阴道分泌物中可出现一定程度抗重组Fβ 蛋白IgA抗体 ,无明显毒性作用。 结论 :X4 63 2 (pFEC)疫苗株的构建为研究以Fβ 为靶抗原的精子抗原避孕疫苗打下了基础。

表达人受精素β去整合素结构域的重组沙门菌疫苗株的构建

目的 构建表达人受精素 β去整合素结构域的重组沙门菌疫苗株。 方法 应用PCR方法获得人受精素 β去整合素结构域的cDNA片断 ,将其插入高拷贝表达载体pYA3 3 3 9中 ,构建重组质粒pYA3 3 3 9 hf2 79,将该重组质粒转入鼠沙门菌疫苗株X45 5 0 ,获得重组菌株X45 5 0 (pYA3 3 3 9 hf2 79)。结果 该重组疫苗株可稳定表达能被抗人受精素 β多克隆抗体识别的重组蛋白HF93 ,其分子量约为 16× 10 3。结论 该疫苗株的构建为进一步研究以人受精素

表达鼠精子受精素β的减毒沙门菌疫苗株的构建

目的 构建表达鼠精子抗原受精素 β亚单位 (Fβ)的可口服减毒沙门菌活疫苗株。 方法 通过酶切从克隆载体TOPO中获得FβcDNA片段 ,将其插入表达载体PYA314 9中 ,构建重组质粒pFFL ,将该重组质粒转入鼠沙门伤寒杆菌疫苗株X4 6 32 ,获得重组菌株X4 6 32 (pFFL) ,行Westernblot分析及初步毒性试验。 结果 此无抗药性的重组菌株X4 6 32 (pFFL)可稳定表达被Fβ 抗体识别的重组Fβ 蛋白 ,口服该菌株无明显毒性作用。 结论 该疫苗株的构建为研究以Fβ 为靶抗原的精子抗原避孕疫苗打下了基础 ,值得进一步行诱导免疫观察。

受精素和整合素在哺乳动物精卵质膜融合过程中是必需的吗?

精子膜蛋白受精素 (fertilin)和卵子膜蛋白整合素 (integrin)是精卵质膜融合侯选蛋白中最受关注之一 ,认为它们之间的相互作用介导了精卵质膜的融合。最近的基因剔除研究结果显示 ,受精素被剔除的精子和整合素α6 β1被剔除的卵子仍具有一定的受精能力 ,因此 ,受精素和卵子整合素在精卵质膜融合中的重要作用值得进一步研究。

精子膜蛋白受精素(Fertilin)研究进展

精子膜蛋白受精素(Fertilin)是参与精卵质膜间相互作用最有特征性的候选分子之一。受精素由α、β两个亚基组成,为精子表面的异二聚体跨膜糖蛋白。fertilin-α(Fα)、Fertilin-β(Fβ)可能在精子发生、精子成熟、精子获能及精卵结合和融合中发挥重要作用。

受精素在精卵结合与融合中作用的研究进展

哺乳动物的受精过程是一个十分复杂的动态过程,在这一过程中,精子表面的膜蛋白发挥着重要作用。受精素α和β是精子表面的膜蛋白,也是精子表面的特异性抗原。研究发现小鼠和人的受精素基因分别位于5号和8号染色体,只在睾丸中特异性表达。受精素β在精子成熟前分布于整个头部,要在附睾成熟后受精素只分布于头后部区域。受精素β基因敲除的小鼠精子与卵细胞的结合能力明显下降,特异性抗体的抑制作用及合成肽竞争性抑制作用可以抑制精卵结合。受精素β通过去整合素与卵细胞表面的整合素结合,在精卵细胞的结合中发挥着重要的作用。精卵质膜的融合主要是由Izumo蛋白完成。

精子去整合素和卵子整合素在受精过程中的作用

迄今为止的研究揭示了许多能介导精卵相互作用的分子。精子至少有三种去整合素(α-受精素、β-受精素和Cyritestrin)可介导精卵的结合;在卵子方面则有多种整合素。α-6/β-1整合素似乎能作为β受精素的受体发挥功能。同时,其它一些精子去整合素及精子表面的其它整合素也可能与α-6/β-1这一受体结合。而β受精素也能与其它一些受体结合。α受精素含有一个去整合素结构域,其胞外段的另一部分与卵子胞膜的相互作用有关,提示它也可能具有多个受体。

ADAMs与哺乳动物受精

ADAMs是近几年发现的一类具有多个结构区和广泛生物学功能的糖蛋白 ,它们在哺乳动物受精中的作用日益得到实验结果的支持 ,本文简要总结了近几年ADAMs在哺乳动物受精中作用的研究进展。

精子膜抗原的研究新进展

精子表面的膜抗原是精子发生成熟过程中的重要标志分子 ,对其深入研究有助于揭示精子发生成熟及受精过程的生理机制和不育的病理改变。本文回顾了近年来随着分子生物学技术的广泛应用 ,传统的一些重要的精子膜抗原相继得到了克隆和测序 ,一些新的表达精子膜抗原的基因也陆续被发现 ,为从蛋白水平进一步深入研究其功能以及免疫避孕疫苗的筛选奠定了基础。

一种新的混合斑精子分离方法

制备了精子表面膜抗原受精素β蛋白（Fertilinβ）的特异性抗体,通过抗原-抗体反应和抗体固相偶联技术,将抗体连接到琼脂糖球珠上,建立了混合斑精子分离纯化的新方法.首先,通过聚合酶链式反应（PCR）扩增编码人受精素β蛋白第341~373位氨基酸的基因序列,构建PGEX-4T-1/Fertilinβ原核表达质粒;其次,诱导表达GST-Fertilinβ融合蛋白,制备受精素β蛋白多克隆抗体,免疫荧光检测结果表明,受精素β蛋白定位于精子的头后部,并且阴道上皮细胞没有受精素β蛋白的表达;最后,将受精素β抗体与ProteinA琼脂糖球珠连接构建固相抗体系统,将精子吸附于表面,可从混合斑（精子与阴道上皮细胞混合液）中分离纯化精子.本文为性犯罪案件侦破提供了新的方法.

真核表达质粒pSG.SS.C3d3.YL.F_(β.ECD)免疫避孕效应研究

目的研究鼠受精素β胞外区(Fβextracellular domain,F_(β.ECD))真核表达重组质粒pSG.SS.C3d3.YL.F_(β.ECD)的DNA疫苗免疫避孕效应。方法应用pSG.SS.C3d3.YL.F_(β.ECD)(C3d3-YL-Fβ组)肌注雌鼠,观察其免疫避孕效应,ELISA法检测雌鼠血清抗Fβ蛋白IgG抗体最大稀释度、IL-2、INF-γ、IL-4、IL-10水平和阴道分泌物抗Fβ蛋白IgA抗体最大稀释度。对照组为PBS组、空载体pSG.SS.YL组(空载体组)和pSG.SS.YL.Fβ.ECD(YL-Fβ组)。结果C3d3-YL-Fβ组雌鼠生育能力显著降低,雌鼠妊娠率显著降低,一胎产仔数量显著降低,免疫避孕效果显著好于YL-Fβ组。pSG.SS.C3d3.YL.F_(β.ECD)DNA疫苗可激发雌鼠产生高水平血清抗Fβ蛋白IgG抗体,阴道分泌物中出现抗Fβ蛋白IgA抗体,血清IL-2、INF-γ浓度较对照组显著降低,血清IL-4、IL-10浓度显著增加。结论真核表达重组质粒pSG.SS.C3d3.YL.Fβ.ECD可有效诱导雌鼠免疫性避孕效应,效果优于pSG.SS.YL.F_(β.ECD)。