受翻译调节的肿瘤蛋白在PRL-3促进结肠癌转移中的作用

目的:研究受翻译调节的肿瘤蛋白(TCTP)在肝再生磷酸酶-3(PRL-3)促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。方法:构建载体pAcGFP-C3-PRL-3及pAcGFP-C3并分别转染至结肠癌LoVo细胞中,获得稳定表达PRL-3的LoVo-PRL-3细胞及对照细胞LoVo-control。Western blotting及real-time PCR检测2种细胞PRL-3及TCTP表达。设计并合成特异性干扰TCTP mRNA的siRNA序列(TCTP-siRNA)和阴性对照序列(control-siRNA),并将siRNA瞬时转染至LoVo-PRL-3细胞。在转染siRNA后24 h、48 h和72 h,Western blot-ting及real-time PCR检测LoVo-PRL-3细胞TCTP表达。CCK8-8和Transwell方法检测LoVo-control、LoVo-PRL-3及转染TCTP-siRNA和转染control-siRNA的LoVo-PRL-3细胞间增殖、迁移和侵袭能力差异。结果:转染PRL-3可以显著上调LoVo细胞TCTP mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。TCTP-siRNA在转染后的24 h、48h和72 h可以有效抑制LoVo-PRL-3细胞TCTP mRNA表达(P<0.01),同样TCTP蛋白在转染后的48 h和72 h也显著受到抑制(P<0.01)。转染PRL-3能显著促进LoVo细胞增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05),然而siRNA干扰抑制上调的TCTP表达后又能显著抑制LoVo-PRL-3细胞增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。结论:PRL-3通过上调TCTP表达促进结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。用siRNA靶向抑制TCTP表达可能是预防和治疗结肠癌转移的有效手段。

受翻译调节的肿瘤蛋白的结构与功能

受翻译调节的肿瘤蛋白(translationallycontrolledtumorprotein,TCTP)是一种普遍存在并且大量表达的蛋白,在进化上高度保守,与其它任何蛋白家族均未显示出明显的序列同源性.该家族的蛋白基本上都具有TCTP-1和TCTP-2两个特征结构区.TCTP与Mss4/Dss4(mammaliansuppressorofSec4)蛋白家族结构相似,二者构成结构超家族.TCTP的合成受到钙、真核翻译起始因子eIF4E(eukaryotictranslationinitiationfactor4E)和双链RNA依赖的蛋白激酶(dsRNA-dependentproteinkinase,PKR)的调节.具有与钙结合,与微管蛋白结合,抗细胞凋亡,抑制翻译,促进组胺释放等生物学活性.另外,它还可作为肿瘤逆转的靶标.系统发育分析提示,在真核细胞进化中,TCTP的直向同源基因起源于1·0×109年前.本文对TCTP的分子特点,生物学功能及其研究现状进行了综述.

酵母双杂交法筛选与受翻译调节的肿瘤蛋白相互作用的蛋白

目的:采用酵母双杂技术筛选与受翻译调节的肿瘤蛋白(translationally controlled tumor protein,TCTP)相互作用的蛋白,以探讨TCTP的生物学功能。方法:采用PCR法扩增获得TCTP基因,并将其插入酵母双杂交诱饵载体中构建获得pDEST32-TCTP;检测pDEST32-TCTP在酵母菌中的表达和自激活情况,利用酵母双杂交系统筛选出带有靶蛋白基因的阳性克隆并测序鉴定;免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,Co-IP)法验证人肝癌细胞Huh7中TCTP与细胞S期激酶相关蛋白-2(S-phase kinase-associated protein2,Skp2)的相互作用。结果:成功构建获得酵母双杂交诱饵载体pDEST32-TCTP,pDEST32-TCTP在酵母菌中可以表达,且在3-氨基-1,2,4-三唑(3-amino-1,2,4-triazole,3AT)浓度为20mmol/L时无自激活作用。采用酵母双杂交系统共筛选获得6个可与TCTP相互作用蛋白的基因,包括Smad4、人热休克蛋白60(heat shock protein60,HSP60)、TAKl、Bcl-xl、卵泡抑素(follistatin,FS)和Skp2。其中Skp2与TCTP蛋白的相互作用在Co-IP中得到验证。结论:应用酵母双杂交系统可筛选获得一组与TCTP相互作用的蛋白,为进一步研究TCTP的生物学功能提供了可靠的实验依据。

长链非编码RNA肿瘤蛋白翻译调节因子1-反义RNA1在神经胶质瘤细胞中的表达及对其增殖和侵袭的影响

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)肿瘤蛋白翻译调节因子1-反义RNA1(TPT1-AS1)对神经胶质瘤细胞U251增殖、侵袭的影响。方法将U251分为空白对照组、阴性转染组、TPT1-AS1过表达组,空白对照组不做处理,另两组进行相应质粒的转染,转染48 h后比较各组U251细胞中TPT1-AS1表达水平;MTT法测定各组U251细胞的存活率;流式细胞仪测定各组U251细胞的凋亡能力;Transwell小室实验检测各组U251细胞侵袭能力;划痕实验检测各组U251细胞迁移能力;Western blot检测各组U251细胞凋亡[半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bax、Bcl-2]及侵袭[基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9]相关蛋白表达情况。结果阴性对照组与空白对照组比较,TPT1-AS1表达、细胞存活率、细胞凋亡率、侵袭细胞数、划痕愈合率及Caspase-3、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达,差异无统计学意义(P>0.05)。TPT1-AS1过表达组TPT1-AS1表达水平、细胞凋亡能力、Caspase-3、Bax蛋白表达均高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);TPT1-AS1过表达组Bcl-2蛋白表达、细胞存活率、侵袭、迁移能力、侵袭相关蛋白表达均低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TPT1-AS1在U251中呈现低表达,高表达的TPT1-AS1可抑制神经胶质瘤细胞的增殖及侵袭能力。

Y-box结合蛋白功能及对肿瘤发生的影响

Y-box结合蛋白家族成员是一类高度保守的顺式作用元件,广泛存在于原核及真核生物细胞中。它是一种多功能蛋白,与转录调节、翻译调控、mRNA选择性剪接、DNA的修复、细胞增殖和再生等有关。Y-box结合蛋白的氨基酸序列包含3个结构域:氨基酸N末端,亲水结构域C末端,冷休克结构域(coldshockdomainCSD),保守的冷休克结构域决定了Y-box结合蛋白的大部分功能。最近研究发现,定位于细胞核中的YB-1蛋白在局部晚期非小细胞肺癌的预防上可作为新的靶位点,YB-1蛋白还可通过对抑癌基因p53启动子抑制起负调控作用,此外,YB-1蛋白在PI3K/Akt信号通路中也起到重要的作用,这些研究都为肿瘤的治疗提供了新的线索和启示。文章就Y-box结合蛋白功能及其对肿瘤发生的影响等方面进行概述。

术前lncRNA TPT1-AS1和整合素β3水平与结直肠癌根治性切除术后复发转移的相关性

目的探讨术前血清长链非编码RNA肿瘤蛋白翻译调节因子1-反义RNA1(lncRNA TPT1-AS1)、整合素β3(ITGB3)水平与结直肠癌病人根治性切除术后复发转移的相关性。方法选择2019年3月至2020年3月在海南省第二人民医院进行结直肠癌根治性切除术的90例病人为结直肠癌组,选择同期在海南省第二人民医院进行健康体检的人员90例作为对照组,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测血清lncRNA TPT1-AS1表达水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清ITGB3水平,搜集病人资料,Pearson法分析lncRNA TPT1-AS1与ITGB3水平相关性,Cox回归模型分析影响结直肠癌根治性切除术后复发转移的危险因素。结果与对照组比较,结直肠癌组病人术前血清lncRNA TPT1-AS1表达水平(2.62±0.35比1.05±0.12)、ITGB3水平[(236.24±30.62)ng/L比(185.47±25.38)ng/L]显著升高(P<0.05);结直肠癌病人血清lncRNA TPT1-AS1和ITGB3水平呈正相关性(r=0.65,P<0.05);不同分化程度、TNM分期、浸润深度、淋巴结转移及血管侵犯的病人血清lncRNA TPT1-AS1、ITGB3水平比较差异有统计学意义(P<0.05);lncRNA TPT1-AS1、ITGB3高表达组结直肠癌根治术后复发转移率显著高于低表达组(P<0.05);TNM分期、淋巴结转移、血管侵犯、lncRNA TPT1-AS1、ITGB3是影响结直肠癌病人术后复发转移的危险因素(P<0.05)。结论结直肠癌病人根治性切除术前血清lncRNA TPT1-AS1、ITGB3水平升高,与术后复发转移相关,可能成为结直肠癌预后判断的血清标志物。

稻瘟病菌翻译调节肿瘤蛋白(MoTCTP)参与真菌生长和产孢的调控(英文)

翻译调节肿瘤蛋白(TCTP)是一种在多细胞生物中高度表达的多功能蛋白,在动植物的很多生理过程中具有重要的作用:如细胞生长、分化和基因表达等。该文报道了稻瘟病菌MoTCTP基因(人TCTP的同源蛋白基因)在菌丝、孢子和附着胞等不同发育阶段的表达,在细胞内的分布以及在稻瘟病菌发育过程中的作用。MoTCTP蛋白分布于细胞质、线粒体外膜表面以及液泡周围的细胞质中。敲除MoTCTP基因后,稻瘟病菌的生长减慢、产孢减少、孢子萌发延迟,但对氧化压力的抗性增加。定量PCR分析了12个细胞分裂周期蛋白和3个产孢相关蛋白在MoTCTP敲除突变体中的表达量变化,发现6个细胞分裂周期蛋白和3个产孢相关蛋白的表达量下降、3个细胞分裂周期蛋白的表达量上升。这些结果说明,MoTCTP基因在稻瘟病菌发育和抗胁迫过程中具有重要的功能,并且这些功能可能与细胞周期蛋白的表达调控有关。

糖酵解调节与代谢关键调控因子沉默信息调节因子1在肿瘤细胞中的作用

糖酵解在肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移中起关键作用。通过Warburg效应,肿瘤细胞能够产生满足细胞生长所需的能量和生物大分子物质。糖酵解的关键调节因子包括葡萄糖转运蛋白(GLUT)和一系列酶,如己糖激酶(HK)、丙酮酸激酶M2型(PKM2)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、单羧酸转运蛋白1(MCT1)和单羧酸转运蛋白4(MCT4)等,这些调节因子的转录调控对于糖酵解途径中的信号传导非常重要。此外,沉默信息调节因子1(SIRT1)作为一种关键的去乙酰化酶,通过调控基因表达和蛋白质翻译后修饰参与多种恶性肿瘤途径,包括代谢重编程过程。文章综述了糖酵解在肿瘤中的关键蛋白和酶的作用及其调节机制,并探讨了SIRT1的调控作用,进一步探讨肿瘤细胞糖酵解与SIRT1可能的联动以及未来的研究方向。

麻疯树Jc-Tctp1基因的同源性分析及时空表达模式鉴定

从麻疯树胚乳cDNA文库中获得了翻译调节肿瘤蛋白(translationally controlled tumor protein,TCTP)cDNA序列,命名为Jc-Tctp1(GenBank登录号为EF091818).该序列全长1410bp,开放阅读框由507个碱基组成.Jc-Tctp1编码的推测蛋白产物含有168个氨基酸残基,该蛋白具有典型的TCTP蛋白特点:由3个α螺旋组成α螺旋核心、4个β片层结构构成β片层核心,及微管结合结构域(MTB)和钙结合结构域(CaB).其推测氨基酸序列与巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)、油棕(Elaeis guineensis)、大豆(Glycine max)、水稻(Oryza sativa,japonica cultivar-group)、黑杨(Populus trichocarpa)、番茄(Lycopersicon esculentum)、西加云杉(Picea sitchensis)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)以及玉米(Zeamay)的TCTP同源性依次为93%、90%、85%、84%、85%、84%、77%、80%和77%.经构建含Jc-TCTP1在内的植物TCTP蛋白分子进化树分析,发现单子叶植物并未按照其生物学分类的地位出现聚合.用半定量RT-PCR研究Jc-Tctp1基因的表达模式,结果显示,其表达在转录水平上具有一定的组织和时间特异性,茎、Ⅰ期胚乳、胚中最为丰富,而在Ⅱ期胚乳和花中表达最弱.

LncRNA TPT1-AS1在前列腺癌中的表达及对生物学功能的影响

目的:研究长链非编码RNA(LncRNA)肿瘤蛋白翻译调节因子1(TPT1)-反义RNA1(AS1)对前列腺癌细胞增殖、侵袭的影响。方法:体外培养人正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)和前列腺癌细胞系雄激素非依赖f生前列腺癌(LNCaP)、DU-145、PC-3、22RV1,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各细胞系中LncRNA TPT1-AS1表达水平;选取表达差异最大的细胞系PC-3、DU-145,阳离子脂质体LipofectamineTM 2000瞬时转染si-RNATPT1-AS1阴性对照(si-RNA对照)组和siRNA-TPT1-AS1干扰(siRNA-TPT1-AS1干扰)组,不添加任何试剂设为空白对照组。qRT-PCR验证siRNA-TPT1-AS1转染情况;CCK-8检测TPT1-AS1-sh对细胞增殖的影响;Transwell检验TPT1-AS1-sh对细胞侵袭的影响;免疫印记(WB)法检测细胞TPT1蛋白的变化。结果:与正常前列腺细胞系RWPE-1相比,前列腺癌细胞系LNCaP、DU-145、PC-3、22RV1中TPT1-AS1的水平显著升高(P<0.05)。在DU-145、PC-3中,空白对照组与si-RNA对照组中TPT1-AS1表达量、0,6,12,24,36,48 h各时期450 nm处的吸光度(A450)值、侵袭细胞数量、TPT1蛋白表达量差异均无统计学意义(P>0.05);与空白对照组、si-RNA对照组相比,siRNATPT1-AS1干扰组中TPT1-AS1表达量,24,36,48 h细胞A450值、细胞侵袭数量、TPT1蛋白表达量显著降低(P<0.05)。在DU-145中,与空白对照组、si-RNA对照组相比,siRNA-TPT1-AS1干扰组12 h细胞A450值显著降低(P<0.05)。结论:前列腺癌细胞系中TPT1-AS1表达上调;干扰前列腺癌细胞系DU-145、PC-3中TPT1-AS1可抑制细胞增殖、侵袭。

TPT1-AS1靶向调控微小RNA-30c-5p及对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响

目的探讨长链非编码RNA肿瘤蛋白翻译调节因子1反义RNA 1(TPT1-AS1)对微小RNA-30c-5p(miR-30c-5p)的靶向调控作用及对结直肠癌细胞侵袭和迁移的影响。方法采用实时定量PCR(qPCR)检测结直肠癌组织相较于癌旁组织及结直肠癌细胞(DLD-1、HCT116、SW480和LoVo)相较于人正常结肠上皮细胞HCoEpiC的TPT1-AS1水平。脂质体法向LoVo细胞转染TPT1-AS1特异性siRNA(si-TPT1-AS1组)并设转染si-NC的阴性对照组和未转染的空白对照组,qPCR检测TPT1-AS1和miR-30c-5p水平,MTT比色法、划痕实验和Transwell小室实验检测细胞活性、划痕愈合率和穿膜细胞数,qPCR和Western blotting检测基质金属蛋白酶3(MMP-3)和信号转导和转录激活因子3(STAT3)及其磷酸化形式p-STAT3的水平,在线预测并结合双荧光素酶报告实验验证miR-30c-5p与TPT1-AS1的相互作用关系。结果与癌旁组织相比,结直肠癌组织的TPT1-AS1水平升高至2.020±0.080,而miR-30c-5p水平降低至0.597±0.044(P<0.05),且结直肠癌组织的TPT1-AS1水平与miR-30c-5p水平呈负相关(r=-0.801,P<0.001)。4株结直肠癌细胞的TPT1-AS1水平均表现为异常高表达(P<0.05),功能验证实验选择TPT1-AS1表达最高的LoVo细胞。与空白对照组和阴性对照组相比,si-TPT1-AS1组LoVo细胞活力减弱,TPT1-AS1水平降低而miR-30c-5p水平升高(P<0.05)。si-TPT1-AS1组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(18.650±3.346)%和(108.326±17.383)个,均低于空白对照组的(90.963±4.328)%和(275.675±21.078)个及阴性对照组的(93.165±4.317)%和(281.431±23.880)个(P<0.05)。与空白对照组和阴性对照组相比,si-TPT1-AS1组的STAT3水平无显著变化,而p-STAT3和MMP-3水平降低(P<0.05)。MiR-30c-5p模拟物降低了野生型TPT1-AS1的荧光素酶活性(P<0.05),而不影响突变型TPT1-AS1的荧光素酶活性。空白对照组和阴性对照组上述指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论结直肠癌中TPT1-AS1高表达,且增强了结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,TPT1-AS1可能通过靶向miR-30c-5p来发挥促癌作用。TPT1-AS1的发现为结直肠癌的诊治和预后评估及下一步的转化研究提供了新的思路。

长链非编码RNA TPT1-AS1促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭的作用研究

目的研究肿瘤蛋白翻译调节因子1反义-RNA1(TPT1-AS1)在肝细胞和肝癌细胞中表达的差异,及其对肝细胞癌增殖、迁移、侵袭、上皮细胞间质化(EMT)的影响。方法2018年9月—2020年6月于西安交通大学实验室进行细胞实验,使用qRT-PCR分别检测92例经手术切除的肝癌组织与对应癌旁肝组织,肝癌细胞HepG2、SNU-182和人肝永生化细胞THLE-3中TPT1-AS1相对表达量。根据qRT-PCR测得肝癌组织中TPT1-AS1表达量中位数(3.38),将患者分为TPT1-AS1高表达组(n=46)和低表达组(n=46)。使用Kaplan-Meier法分析比较2组患者5年生存率的差异。使用siRNA转染HepG2和SNU-182细胞以沉默TPT1-AS1表达,以阴性对照siRNA(si-NC)转染相同细胞作为对照。比较siRNA和si-NC转染HepG2和SNU-182细胞后的增殖、迁移、侵袭、EMT能力差异。结果与对应癌旁组织比较,肝癌组织中TPT1-AS1相对表达水平升高(t/P=54.065/0.000)。高表达组患者BCLC分期C期比例、淋巴结转移比例更高(χ^(2)/P=15.187/0.001,7.379/0.007)。高表达组患者5年生存率低于低表达组(χ^(2)/P=7.354/0.007)。使用siRNA转染的HepG2和SNU-182细胞较si-NC转染对应细胞的细胞集落数量明显减少,G0/G1期细胞比例升高(P均=0.000),S期细胞比例显著降低(P均=0.000),相对迁移距离降低(t/P=25.153/0.000),穿透基底膜的细胞数量减少,G1/S期转换及EMT相关蛋白CDK4、N-cadherin和Vimentin的相对表达量降低(P均=0.000),而p21和E-cadherin蛋白相对表达量升高(P均=0.000)。结论长链非编码RNA TPT1-AS1促进肝癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,TPT1-AS1有可能作为肝细胞癌的治疗靶点。

结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1、miR-30c-5p的表达及与病理特征、预后的关系

目的探讨结肠癌组织中长链非编码RNA(lncRNA)肿瘤蛋白翻译调节因子1(TPT1)-反义RNA1(AS1)、微小RNA(miR)-30c-5p的表达及与病理特征、预后的关系。方法选取2015年1月至2017年12月深圳大学附属第一医院收治的117例接受根治性或姑息性手术切除结肠癌患者,均行手术切除结肠癌组织及癌旁组织。采用qRT-PCR检测lncRNA TPT1-AS1、miR-30c-5p表达水平,分析lncRNA TPT1-AS1、miR-30c-5p表达水平与结肠癌病理特征的关系,采用Pearson相关性检验分析结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1与miR-30c-5p表达水平的相关性,Kaplan-Meier曲线绘制不同lncRNA TPT1-AS1、miR-30c-5p表达水平结肠癌患者3年累积生存率,Cox回归分析结肠癌患者预后影响因素。结果结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1表达水平明显高于癌旁组织(3.405±0.555 vs 1.766±0.096),miR-30c-5p表达水平(0.306±0.146 vs 0.872±0.267)明显低于癌旁组织(P<0.05)。结肠癌lncRNA TPT1-AS1表达水平TNM分期Ⅲ~Ⅳ期明显高于Ⅰ~Ⅱ期(3.651±0.579 vs 3.257±0.486),浸润深度T_(3)~T_(4)明显高于T_(1)~T_(2)(3.523±0.601 vs 3.301±0.491),有淋巴结转移明显高于无淋巴结转移(3.614±0.585 vs 3.220±0.456),差异均有统计学意义(P<0.05);miR-30c-5p表达水平TNM分期Ⅲ~Ⅳ期明显低于Ⅰ~Ⅱ期(0.251±0.126 vs 0.346±0.145),浸润深度T_(3)~T_(4)明显低于T_(1)~T_(2)(0.270±0.119 vs 0.338±0.162),有淋巴结转移明显低于无淋巴结转移(0.255±0.125 vs 0.351±0.151),差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1与miR-30c-5p表达水平呈负相关(r=-0.572,P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线显示,lncRNA TPT1-AS1高表达水平组3年累积生存率明显低于低表达水平组(59.32%vs 87.93%),miR-30c-5p高表达水平组3年累积生存率明显高于低表达水平组(85.00%vs 61.40%)(P<0.05)。多因素Cox回归分析显示,TNM分期Ⅲ~Ⅳ期(HR=2.387,95%CI:1.004~5.671)、淋巴结转移(HR=2.667,95%CI:1.021~6.969)、lncRNA TPT1-AS1≥3.405(HR=2.023,95%CI:1.076~3.803)为结肠癌患者预后独立风险因素,miR-30c-5p≥0.306(HR=0.175,95%CI:0.012~0.423)为独立保护因素(P<0.05)。结论结肠癌组织中lncRNA TPT1-AS1表达显著上调,miR-30c-5p表达显著下调,两者与TNM分期、浸润深度、淋巴结转移相关,为患者预后独立影响因素,可能成为结肠癌预后评估的标志物。