lncRNA HOTAIR靶向调控血管舒张剂激活磷蛋白对宫颈癌细胞迁移与侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)和血管舒张剂激活磷蛋白(VASP)在宫颈癌细胞迁移和侵袭过程中的分子调控机制。方法 敲降HOTAIR实验中,siHOTAIR-Ⅰ和siHOTAIR-Ⅱ作为HOTAIR敲降组。敲降VASP实验中,siVASP作为VASP敲降组。2组实验均以siNC作为对照。过表达VASP实验中,通过脂质体转染pCDNA3.1-VASP使VASP在HeLa细胞中高表达,以空载pCDNA3.1作为对照。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测敲降HOTAIR后HOTAIR表达变化情况。蛋白质印迹法检测敲降HOTAIR后VASP蛋白表达水平的变化,划痕实验和Transwell实验用于检测敲降HOTAIR或过表达/敲降VASP对HeLa细胞迁移和侵袭的影响。生物信息学分析用于分析VASP与miR-206之间的调控关系。过表达miR-206实验中,转染miR-206 mimics用于HeLa细胞中过表达miR-206,NC(mimics)作为对照组。敲降miR-206实验中,转染miR-206 inhibitor用于抑制miR-206表达,NC(inhibitor)作为对照组。蛋白质印迹法检测过表达或抑制miR-206对VASP蛋白水平的影响。将miR-206 mimics与VASP-UTR进行共转染,通过双荧光素酶报告系统检测miR-206对VASP的调控作用,共转染miR-206 mimics与VASP-UTR-wt作为对照。划痕实验和Transwell实验用于检测NC(mimics)、miR-206 mimics以及共转染miR-206 mimics与siVASP 3种分组对HeLa细胞迁移和侵袭的影响。采用独立样本t检验、单因素方差分析以及Dunnett-t等方法对实验数据进行统计学分析。结果 通过siRNA沉默HOTAIR表达,与siNC组(1.00±0.02)相比,siHOTAIR-Ⅰ和siHOTAIR-Ⅱ组中HOTAIR相对表达量分别为0.36±0.05和0.42±0.02,差异有统计学意义,F=387.724,P<0.001。蛋白质印迹法结果显示,抑制HOTAIR可下调VASP蛋白表达,F=93.722,P<0.001。划痕实验结果显示,siNC组及敲降HOTAIR实验组划痕的相对宽度分别为0.18±0.02、0.41±0.02和0.39±0.03,差异有统计学意义,F=85.941,P<0.001。Transwell实验结果显示,siNC组及敲降HOTAIR实验组中侵袭转移的细胞相对数目分别为1.00±0.07、0.34±0.03和0.28±0.09,差异有统计学意义,F=116.153,P<0.001。生物信息学分析结果表明,VASP可能是miR-206的靶基因。同时,转染miR-206 mimics后,相比于NC(mimics)的0.99±0.05,VASP相对表达量为0.73±0.04,差异有统计学意义,F=35.788,P=0.004。转染miR-206 inhibitor后,VASP的相对表达量为1.65±0.07,相比于NC(inhibitor)中VASP的相对表达量0.96±0.03,差异有统计学意义,F=227.705,P<0.001。双荧光素酶报告基因检测结果显示,共转染miR-206 mimics和VASP UTR-mut荧光素酶活性(6.44±0.42)高于共转染miR-206 mimics和VASP UTR-wt(1.00±0.18),差异有统计学意义,F=425.195,P<0.001。同时,划痕实验结果显示,转染miR-206 mimics在24和48 h划痕的相对宽度分别为0.62±0.03和0.37±0.02,相比于NC(mimics)的0.44±0.02和0.28±0.02,差异有统计学意义(F_(24 h)=74.769,P_(24 h)<0.001;F_(48 h)=30.375,P_(48 h)=0.005)。Transwell实验结果显示,转染miR-206 mimics后侵袭转移的细胞相对数目为0.38±0.06,相比于NC(mimics)的1.00±0.04,差异有统计学意义,F=221.769,P<0.001。而且,沉默HOTAIR表达后,miR-206相对RNA表达水平分别为17.32±3.12和18.52±4.24,高于siNC组(1.00±0.03),差异有统计学意义,F=31.549,P<0.001。结论 HOTAIR调控宫颈癌细胞的迁移和侵袭可能是通过miR-206调控VASP表达来实现的。

质子泵抑制剂与氯吡格雷联用对大鼠颈动脉血栓形成及血小板活性的影响

目的探讨质子泵抑制剂(PPIs)对氯吡格雷抗血栓形成及抗血小板活性的影响。方法 60只SD大鼠随机分为6组,对照组、氯吡格雷组、氯吡格雷与PPIs联用组(分别为奥美拉唑高剂量、奥美拉唑低剂量、埃索美拉唑、泮托拉唑),建立FeCl3诱导大鼠颈动脉血栓模型,测定血栓重量、ADP诱导血小板聚集率、血小板血管舒张剂刺激磷蛋白磷酸化(VASP-P)程度,评价PPIs对氯吡格雷疗效的影响。结果奥美拉唑高剂量、奥美拉唑低剂量、埃索美拉唑、潘托拉唑与氯吡格雷联合组的血栓重量、血小板聚集率、VASP-P程度与单用氯吡格雷组相比无显著差异(P>0.05)。但高剂量奥美拉唑联合组显著高于低剂量奥美拉唑联合组(P<0.05)。结论不同PPIs对氯吡格雷的抗血栓作用和抗血小板活性没有影响。在接受氯吡格雷治疗的同时可以联用PPIs,但是在联合使用大剂量奥美拉唑时仍需慎重。

急性冠脉综合征患者抗血小板药物疗效和对氯吡格雷的反应性

目的:通过检测血小板受血管舒张剂刺激的磷蛋白磷酸化程度和活化的糖蛋白Ⅱb/Ⅲa受体(PAC-1)表达评价急性冠脉综合征患者抗血小板治疗前后血小板活性的变化和对氯吡格雷的反应性。方法:研究对象为正常对照组15例,稳定性心绞痛组20例和急性冠脉综合征组33例。稳定性心绞痛组仅接受阿司匹林抗血小板治疗,急性冠脉综合征组予氯吡格雷、阿司匹林和肝素抗血小板治疗,分别在入选时和冠心病患者抗血小板治疗后第7天用流式细胞术检测PAC-1表达和受血管舒张剂刺激的磷蛋白磷酸化程度并计算血小板反应性指数(PRI)。结果:入选时正常对照组、稳定性心绞痛组和急性冠脉综合征组PAC-1值依次增高,差异具有统计学意义(P<0.05)。稳定性心绞痛组和急性冠脉综合征组抗血小板治疗7天后较入选时PAC-1显著下降。入选时正常对照组、稳定性心绞痛组和急性冠脉综合征组PRI值组间差异无统计学意义(P>0.05)。抗血小板治疗第7天时稳定性心绞痛组患者PRI无明显变化(P>0.05),急性冠脉综合征组PRI明显下降,差异有统计学意义(P<0.001),但分布较治疗前明显离散(17.8～80.1较65.70～92.10)。急性冠脉综合征组PRI下降与氯吡格雷干预呈正相关(r=0.766,P<0.001)。稳定性心绞痛组抗血小板治疗第7天时有9例(45)患者PAC-1大于入选时均数-2倍标准差。急性冠脉综合征组第7天时有9例(27)患者PRI大于入选时均数-2倍标准差,9例(27)患者PAC-1大于入选时均数-2倍标准差,7例(21)患者同时高于上述值,2例(6)患者PRI大于入选时均数-2倍标准差但PAC-1小于入选时均数-2倍标准差,另有2例患者PRI小于入选时均数-2倍标准差但PAC-1大于入选时均数-2倍标准差。结论:①氯吡格雷联合阿司匹林和肝素治疗能显著抑制急性冠脉综合征患者的血小板活性,但部分患者治疗后血小板活化聚集功能抑制不良,近30患者对氯吡格雷反应低下。②治疗前后联合检测血小板受血管舒张剂刺激的磷蛋白磷酸化程度和PAC-1能评价急性冠脉综合征患者总体抗血小板疗效和对氯吡格雷的反应性。

血小板反应指数与血小板聚集率的相关性及对非ST段抬高急性冠脉综合征的预后评价

目的探讨通过流式细胞术定量的血小板反应指数(PRI)和经典的血小板聚集率(PAG)的相关性,并评价PRI及PAG与非ST段抬高急性冠脉综合征(NSTE-ACS)预后的关系。方法连续纳入2016年10月-2017年1月天津市胸科医院心内科收治的NSTE-ACS并接受冠状动脉介入治疗的患者231例,根据PRI中位数将患者分为2组,低PRI组(PRI≤55%)116例和高PRI组(PRI>55%)115例,对比2组患者PAG水平、主要不良心血管事件(MACE)的发生率、主要临床及生化指标。再根据PAG中位数将患者分为2组,低PAG组(PAG≤71%)112例和高PAG组(PAG>71%)119例,对比2组患者PRI水平、MACE发生率、主要临床及生化指标。对PRI和PAG进行相关性分析和受试者工作特征(ROC)曲线分析。全部患者随访2年,以全因死亡、支架内再狭窄、急性支架内血栓形成、再发急性心肌梗死为复合终点事件,通过Cox回归分析评价PRI、PAG、肌钙蛋白I(TnI)等指标对MACE的预测能力。结果以PRI中位数分组,高PRI组PAG水平、MACE发生率均高于低PRI组(P<0.01)。再根据PAG中位数分组,高PAG组PRI也高于低PAG组(P<0.01),2组间MACE发生率差异无统计学意义。相关性分析提示PRI与PAG呈正相关(r=0.318,P<0.01)。以PAG为检验变量,PRI为状态变量的ROC曲线分析,曲线下面积(AUC)为0.873(95%CI:0.839~0.908,P<0.01)。Cox回归分析提示高PRI水平(HR=1.090,95%CI:1.038~1.146,P=0.001)及男性(HR=0.186,95%CI:0.053~0.659,P=0.009)患者更易发生不良心血管事件。结论根据流式细胞术定量血管舒张刺激磷蛋白(VASP)磷酸化比例计算的PRI和经典的光比浊法测定的PAG有相关性,对于NSTE-ACS患者,高PRI能预测不良心血管事件发生,较传统的PAG检测更有意义。

VASP信号分子与大肠癌的关系

大肠癌发生发展与GCC/PKG/VASP、PKA/VASP等信号通路有关,VASP作为其中的一个重要的信号分子,在大肠癌的凋亡、侵袭转移、血管生成等过程中起到了重要作用.就VASP信号分子及相关的信号通路在大肠癌发生发展中的作用及其潜在临床意义进行综述.

细胞色素P450 2C19 G681A基因多态性与北方汉族冠心病患者氯吡格雷抵抗的关系探讨

目的 探讨细胞色素P450 2C19（CYP2C19） G681A基因多态性与氯吡格雷抵抗（CR）的关系,以期早期筛选和识别CR.方法 共纳入对象136例,其中73例为急性冠状动脉综合征（ACS）患者,63例为稳定性心绞痛（SAP）患者.对所有入选对象进行血管舒张剂刺激磷酸蛋白（VASP）磷酸化程度的检测,按照测得的VASP磷酸化指数（VASP index）将患者分为CR组和NCR组,CR定义为VASP index≥50％.采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术联合双脱氧sanger测序法,检测所有患者的基因型,分析各基因型和等位基因在两组之间的分布.结果 入选人群CR发生率为58.8％（80例）,ACS患者的CR发生率高于SAP患者（67.1％vs.49.2％,P＜0.05）.CYP2C19基因G681A多态性位点三种基因型（CG、GA、AA）在CR组与NCR组的分布频率分别为47.54％,46.22％,6.24％和69.63％,26.80％,3.57％,在两组间,三种基因型的分布存在差异（P＜0.05）.A等位基因的频率在CR组高于NCR组（29.37％vs.16.96％,P＜0.05）,A等位基因增加CR的发生风险（OR =2.04,95％ CI：1.12～ 3.71,P＜0.05）.Logistic回归校正了性别、年龄、体重指数、高血压病、2型糖尿病等因素后,发现CYP2C19基因G681A单核苷酸多态性仍与CR的发生风险有关（OR =3.259,95％ CI：1.476～6.764,P＜0.001）.结论 细胞色素P450 2C19 G681A基因多态性和CR的发生相关,A等位基因可能是导致CR发生的重要遗传学因素.

应用VASP检测氯吡格雷抵抗的研究进展

虽然阿司匹林与氯吡格雷双联抗血小板治疗后可降低经皮冠脉介入治疗(percutaneous coronary intervention,PCI)术后心血管事件的风险,但后续临床事件时有发生,氯吡格雷抵抗与PCI术后血栓事件存在直接关联。血管舒张剂刺激磷蛋白(vasodilator-stimulated phosphoprotein,VASP)磷酸化检测法是一种新型的用来确定ADP P2Y12受体阻断剂抑制血小板功能状态的新型检测方法,目前主要用于分析氯吡格雷抗血小板作用,同时可以预测PCI术后的主要不良心血管事件。