尘螨变应原组分解析诊断在过敏性呼吸道疾病中的应用进展

尘螨是世界范围内过敏性呼吸道疾病最常见的变应原之一,其中变应性鼻炎和变应性哮喘最为常见。目前,临床上比较常用的变应原检测方法为皮肤点刺试验、特异性免疫球蛋白E检测和激发试验。随着尘螨所致过敏性呼吸道疾病的发病率逐年升高,对变应原检测技术提出了更高的要求。变应原组分解析诊断(CRD)是一种新兴的变应原检测技术,可以明确患者对变应原的哪些组分过敏。CRD使尘螨诱发的过敏性呼吸道疾病有了更加精准的分子分型,有助于未来开展基于尘螨组分的脱敏治疗和疗效监测。

变应原组分诊断及肽段微阵列技术在牛奶过敏特异性诊断中的应用

牛奶蛋白过敏(cow’s milk allergy, CMA)是儿童最常见的食物过敏之一,大多数CMA患者可随年龄增长对牛奶及牛奶制品产生耐受,约60%CMA免疫学机制为IgE介导。酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳清蛋白是牛奶主要致敏组分。相较于传统的应用天然变应原提取物进行特异性IgE检测,重组或纯化的牛奶变应原组分特异性IgE检测可更精确的诊断CMA及预测其自然进程。变应原组分氨基酸序列的确定使得IgE结合肽段的识别成为可能,基于变应原肽段微阵列技术可用于诊断CMA、预测自然进程及特异性免疫治疗的疗效和安全性。本综述就IgE介导CMA特异性诊断尤其是变应原组分诊断及肽段微阵列技术在CMA特异性诊断中的应用进行总结,旨在为临床工作提供参考。

针对蜂毒变应原检测的研究进展

对于膜翅目毒素过敏人群,膜翅目昆虫蜇刺是其不可忽视的危险因素。我国现有的诊断工具无法提供准确的信息来明确致敏昆虫,从而影响临床的诊断和治疗。蜜蜂为常见的膜翅目昆虫,分布地域广、数量多,且其毒素成分复杂,因此国内外研究者已针对蜜蜂毒素主要变应原开展了相关重组变应原方案工作,这为变应原检测提供了一定的理论基础。变应原组分诊断技术的发展可实现准确检测蜂毒变应原,这将为蜜蜂蜂毒过敏患者提供一套全新的临床诊断和治疗方案。

食物过敏的变应原组分诊断进展

免疫球蛋白E(IgE)介导的食物过敏是全球共同面对的健康问题,我国的食物过敏发病率也在逐年升高。传统的特异性IgE抗体(sIgE)检测方法是基于完整变应原提取物的体内和体外检测,特异性及敏感性较低,提供的诊断信息有限,临床确诊食物过敏需要进行口服食物激发试验,增加了患者的痛苦和风险。而随着食物变应原组分研究的不断进展,使得人们在分子水平上可以定量检测针对单个变应原组分的IgE抗体,从而产生了"变应原组分诊断"这一概念,使得食物过敏诊断更精确,帮助人们分辨交叉反应,判断疾病的严重程度及发生严重过敏反应的风险,预测免疫治疗疗效,大大提高了诊断的准确性,减少了对口服食物激发试验的依赖。现对常见食物变应原组分诊断的新进展分别进行总结,并讨论变应原组分诊断的优势。

粉尘螨变应原第2组分血清特异性IgE酶联免疫吸附测定法的建立及其检测效能的评价

目的建立粉尘螨变应原第2组分(Der f 2)血清特异性IgE的酶联免疫吸附测定(ELISA)法,并评价其检测效能。方法利用重组表达的Der f 2作为包被抗原,分别建立检测Der f 2血清特异性IgE的间接ELISA法和亲和素-生物素复合(ABC)-ELISA法,采用正交试验筛选两种方法的最优检测条件。分别采用上述两种ELISA法检测Der f 2特异性IgE阳性标准血清,绘制两种ELISA法检测Der f 2特异性IgE的标准曲线;同时以Pharmacia Uni Cap系统检测结果为金标准,计算两种ELISA法检测46例哮喘患者血清Der f 2特异性IgE的结果符合率。结果间接ELISA法检测Der f 2特异性IgE的最佳条件为:包被液浓度为10μg/ml,血清稀释倍数为1∶5,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗人IgE抗体稀释倍数为1∶1 000。ABC-ELISA法检测Der f 2特异性IgE的最佳条件为:包被液浓度为15μg/ml,血清稀释倍数为1∶5,生物素标记抗人IgE抗体稀释倍数为1∶1 000,HRP标记的链霉和素稀释倍数为1∶2 000。间接ELISA和ABC-ELISA法的灵敏度值分别为0. 72 U/ml和0. 69 U/ml。间接ELISA和ABC-ELISA检测哮喘患者的符合率分别为93. 5%和95. 7%。结论成功建立基于重组表达Der f 2的ELISA法,其对Der f 2特异性IgE具有较好的检测效能。

热带无爪螨第1组分变应原的同源建模及表位分析

目的:利用生物信息学方法对热带无爪螨第1组分变应原(Blo t 1)特征进行分析。方法:采用SignalP 4.1服务器用于分析Blo t 1的信号肽序列,ProtScale tools对Blo t 1的理化性质进行分析,NetPhos3.1服务器预测分析Blo t 1的磷酸化位点。采用SOPMA服务器预测其二级结构。结果:Blo t 1是一种亲水蛋白,其第1-18位氨基酸为Blo t 1的信号肽序列,磷酸化位点预测显示:Blo t 1含有16个丝氨酸激酶、12个苏氨酸激酶及16个酪氨酸激酶,没有跨膜结构域;Blo t 1的二级结构中包含α螺旋(氨基酸占比28.56%),β转角(氨基酸占比7.95%),延伸链(氨基酸占比19.05%)和无规则卷曲(氨基酸占比44.44%)。Blo t 1的B细胞表位有5个肽序列(38-43,115-118,125-130,156-159,204-212),T细胞表位预测得到3个肽序列(89-109,134-154,247-267)。结论:对Blo t 1的表位分析,为Blo t 1基于表位的疫苗和肽-ELISA的研发奠定理论基础。

粉尘螨变应原第3组分基因克隆及序列多态性分析

目的获得粉尘螨变应原第3组分(Der f 3)的编码基因并了解其序列多态性。方法根据GenBank已公布的Der f 3核酸序列设计引物,用RT-PCR扩增获得其编码基因,插入pMD19-T载体,进行序列测定和多态性分析。结果获得粉尘螨变应原Der f 3编码基因为780bp。5株Der f 3基因cDNA克隆的核苷酸序列与参考序列(GenBankNo.AY 283291,GenBank No.D63858,GenBank No.EU312162,GenBank No.EU312163)相比,有19处cDNA序列发生突变,但有7处突变至少在3个cDNA克隆中序列一致;推导出氨基酸序列后进行比对,有11处氨基酸序列发生变化,有4处与上述7个位点相一致。结论获得了粉尘螨变应原Der f 3编码基因且证明其序列具有多态性,为进一步开展相关研究奠定了基础。

粉尘螨变应原第6组分基因克隆及序列多态性分析

目的获得粉尘螨变应原第6组分(Der f 6)的编码基因并了解其序列多态性。方法根据GenBank(AF125187)公布的Der f 6的CDS区序列设计引物,使用PrimeSTAR?HS DNA进行PCR扩增,将目的基因片段与pMD19-T simple连接,进行序列测定和多态性分析。结果获得粉尘螨Der f 6编码基因,大小为839bp。对5个Der f 6克隆质粒测序并与参考序列GenBank No.AF 125187和GenBank No.EU085359比对,出现突变的cDNA序列合计36处,cDNA克隆中序列存在27处突变至少达到3个;推导的氨基酸序列有15处与上述27个位点一致。结论获得粉尘螨Der f 6编码基因并证明其序列具有多态性,为相关研究奠定了基础。

IgE介导的牛奶蛋白过敏患儿临床特征分析

目的探讨IgE介导的牛奶蛋白过敏(CMPA)患儿的临床特征,为疾病的管理和预防提供依据。方法采用横断面研究的方法,纳入2020—2022年于首都儿科研究所附属儿童医院确诊IgE介导的0~12岁142例CMPA患儿为研究对象,男79例(55.6%),女63例(44.4%),平均月龄为14(8,27)月,其中<1岁组61例(43.0%),1~3岁组54例(38.0%),>3岁组27例(19.0%)。收集人口学资料、临床表现、牛奶皮肤点刺试验平均风团直径和血清特异性IgE等数据,采用ImmunoCAP全自动荧光酶联免疫检测系统测定血清牛奶蛋白sIgE和牛奶蛋白组分sIgE,使用卡方检验、非参数检验、相关性分析等进行统计分析。结果142例患儿以皮肤症状为首发且最为多见(97.9%,139/142例),其次为消化(29.6%,42/142例)和呼吸系统症状(27.5%,39/142例)。3岁以上儿童组患儿进食牛奶后出现呼吸系统症状的比例明显高于婴儿组和幼儿组(66.7%vs 19.7%,χ^(2)=18.396,P<0.01;66.7%vs 16.7%,χ^(2)=20.250,P<0.01),且累积≥3个系统的比例亦显著高于另外两组(37.0%vs 13.1%,χ^(2)=6.597,P<0.05;37.0%vs 7.4%,χ^(2)=12.120,P<0.01)。3岁以上儿童组牛奶SPT平均风团直径和血清sIgE水平显著高于婴儿组和幼儿组[(Z=-4.682,P<0.01;Z=-3.498,P<0.01);(Z=-4.463,P<0.01;Z=-6.463,P<0.01)]。最常见的牛奶蛋白组分是β-乳球蛋白(65.1%,56/86例)和酪蛋白(57.0%,49/86例)。54.9%的患儿存在多重变应原致敏,最常见合并致敏的食物变应原是鸡蛋白(43.7%,62/142例),吸入变应原为霉菌(12.7%,18/142例)和杂草花粉(12.7%,18/142例)。儿童组出现多重吸入变应原致敏比例最高(51.9%,14/27例),其次为幼儿组(29.6%,16/54例),婴儿组最少(3.3%,2/61例),三组之间出现多重吸入变应原致敏的比例存在显著差异(χ^(2)=7.476,P<0.05)。结论CMPA患儿以皮肤黏膜症状最为常见。随年龄增长,呼吸系统和多系统受累症状的比例增加,牛奶皮肤测试的风团直径和血清sIgE水平升高。>3岁CMPA患儿出现吸入变应原致敏和患有气道过敏性疾病的比例最高。

Der f 1血清特异性IgE ELISA检测方法的建立

目的利用粉尘螨变应原第1组分重组蛋白rDer f 1建立特异性IgE ELISA检测方法,并对哮喘患者血清进行检测。方法以rDer f 1为包被抗原,分别建立间接ELISA法和亲和素-生物素复合ELISA(ABC-ELISA)法,检测Der f 1特异性IgE阳性标准血清和39例哮喘患者血清中的Der f 1特异性IgE,并分析检测结果。结果间接ELISA法和ABC-ELISA法检测Der f 1特异性IgE的最适抗原包被浓度和血清稀释倍数均为15μg/ml和1︰2,间接ELISA法辣根过氧化物酶(HRP)标记抗人IgE抗体适宜稀释倍数为1︰1 000,ABC-ELISA法生物素标记抗人IgE抗体和HRP标记亲和素的稀释倍数分别为1︰1 000和1︰2 000。用间接ELISA和ABC-ELISA检测IgE的灵敏度分别为0.68U/ml和0.73U/ml,检测患者血清中Der f 1特异性IgE的阳性率分别为92.3%和97.4%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论基于重组变应原rDer f 1的ELISA法检测粉尘螨特异性IgE具有较高的敏感度,可用于螨过敏性疾病的实验诊断。