大容量人免疫球蛋白G基因文库的构建及初步应用

目的从大容量人免疫球蛋白G基因文库中获得尘螨2类变应原特异的IgG Fab片段。方法通过DNA重组技术,从300名健康志愿者的外周血淋巴细胞中扩增全套人抗体轻链及重链Fd基因,分别插入pFab1-His2相应位置,构建人免疫球蛋白G基因文库;以重组粉尘螨2类变应原(rDer f2)作为抗原,采用克隆印迹法对抗体库进行筛选,ELISA验证以获得阳性克隆;提取阳性克隆质粒,进行核苷酸序列测定并推算氨基酸序列,Kabat数据库分析轻、重链基因的同源性,表面等离子共振BIAcore检测纯化的Fab片段与rDer f2的亲和力。结果从9×108库容的人免疫球蛋白G基因文库中筛选1.28×106个克隆,获得2个可与尘螨变应原特异结合的阳性克隆AM1和AM2。序列比较显示2个克隆的重链完全同源;同源性分析显示,AM1、AM2轻链可变区近似系分别为K2-30和K1-12,重链可变区近似系为VH3-30;BIAcore检测显示,2个克隆的Fab片段与rDer f2的结合常数分别为6.1×107和5.7×107,解离常数分别为3.1×10-8和4.1×10-8。结论从未经免疫的大容量人免疫球蛋白G基因文库获得具有较高亲和力的尘螨变应原特异的IgG Fab片段。